粗壯脈紋孢菌發(fā)酵稻谷加工副產(chǎn)物生產(chǎn)類胡蘿卜素培養(yǎng)基的優(yōu)化

劉志剛，李 靜，張麗美，鄧澤元，范亞葦

（南昌大學(xué)，食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，高等研究院，江西南昌330047）

粗壯脈紋孢菌發(fā)酵稻谷加工副產(chǎn)物生產(chǎn)類胡蘿卜素培養(yǎng)基的優(yōu)化

劉志剛，李 靜*，張麗美，鄧澤元，范亞葦

（南昌大學(xué)，食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，高等研究院，江西南昌330047）

采用響應(yīng)面法對(duì)粗壯脈紋孢菌發(fā)酵稻谷加工副產(chǎn)物（礱糠和脫脂米糠）生產(chǎn)類胡蘿卜素的培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化。通過Plackett-Burman設(shè)計(jì)法，研究了脫脂米糠、（NH4）2SO4、KH2PO4、MgSO4、MnSO4、CaCl2等6個(gè)因素對(duì)粗壯脈紋孢菌產(chǎn)類胡蘿卜素的影響，篩選顯著影響因素。然后通過響應(yīng)面法優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基組成。研究表明，脫脂米糠和（NH4）2SO4為類胡蘿卜素發(fā)酵的主要影響因素。得到優(yōu)化培養(yǎng)基為：脫脂米糠64.58%、礱糠33.85%、（NH4）2SO41.57%。在優(yōu)化發(fā)酵工藝下，色素產(chǎn)量達(dá)到366mg/kg培養(yǎng)物。

類胡蘿卜素，脫脂米糠，礱糠，粗壯脈紋孢菌，響應(yīng)面法

Abstract：The culture medium composed of rice by-products（rice chaff and defatted rice bran） for carotenoid production by Neurospora crassa was optimized through statistical experiment design and data analysis.The defatted rice bran，（NH4）2SO4，KH2PO4，MgSO4，MnSO4and CaCl2were evaluated as factors affecting carotenoid biosynthesis by Neurospora crassa，and the significant factors were screened by a Plackett-Burman design.Then the culture medium was optimized by response surface methodology.Results indicated that defatted rice bran and （NH4）2SO4were the significant factors on carotenoid production.The optimal culture medium consisted of 64.58%defatted rice bran，33.85%rice chaff and 1.57% （NH4）2SO4at which the yield of carotenoids was gotten up to 366mg/kg culture using the optimized fermentation parameters.

Key words：carotenoid；defatted rice bran；rice chaff；Neurospora crassa；response surface methodology

類胡蘿卜素（carotenoid）是一類呈黃色、橙紅色或紅色的多烯類物質(zhì)，一般由8個(gè)類異戊二烯單位組成，包括胡蘿卜素和葉黃素兩大類色素。它是國際公認(rèn)的具有生理活性的功能性色素，是人體及動(dòng)物維生素A的重要來源；同時(shí)也是一類非常有效的抗氧化劑，對(duì)維持細(xì)胞正常生命代謝、增強(qiáng)人體免疫力、預(yù)防心血管疾病、延緩衰老和預(yù)防癌癥具有重要價(jià)值。目前，類胡蘿卜素作為功能性色素及營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑已廣泛應(yīng)用于食品保健、飼料添加劑、醫(yī)藥及化妝品等領(lǐng)域[1-2]。近年來研究表明，天然類胡蘿卜素較化學(xué)合成色素具有較高的安全性和生理活性，因此越來越受消費(fèi)者的青睞。天然類胡蘿卜素的生產(chǎn)主要有直接提取法和微生物發(fā)酵法。直接提取法主要以果蔬為原料，生產(chǎn)成本高、工藝復(fù)雜、提取效率低；而微生物發(fā)酵法因高效、操作方便、易實(shí)現(xiàn)工業(yè)化等優(yōu)點(diǎn)受到人們的普遍關(guān)注，但普遍存在菌種易退化，培養(yǎng)基組成復(fù)雜，成本高等問題，因此積極開發(fā)簡(jiǎn)便高效的發(fā)酵工藝和廉價(jià)易得的原料是科研工作者目前研究的熱點(diǎn)。本課題組在粗壯脈紋孢菌（Neurospora crassa）發(fā)酵再利用高纖維農(nóng)副產(chǎn)品方面有一定研究。研究過程中發(fā)現(xiàn)，該菌固態(tài)發(fā)酵時(shí)可產(chǎn)生大量橙紅色的分生孢子，并檢測(cè)到其中含有類胡蘿卜素[3]，國外也有類似報(bào)道[4-6]。但是相關(guān)報(bào)道都是關(guān)于粗壯脈紋孢菌產(chǎn)類胡蘿卜素的機(jī)理和基礎(chǔ)性研究，并未將其應(yīng)用于實(shí)際類胡蘿卜素的生產(chǎn)。另外，我國是世界上最大的稻谷生產(chǎn)國，稻谷加工副產(chǎn)物非常豐富，例如礱糠年產(chǎn)量在4000萬t以上，米糠年產(chǎn)量在1000萬t以上[7-9]，然而這些副產(chǎn)物的深度開發(fā)應(yīng)用在我國處于較低水平，經(jīng)濟(jì)效益較低，造成了一定的資源浪費(fèi)，所以本課題組擬采用礱糠和脫脂米糠作為發(fā)酵原料，對(duì)其進(jìn)行開發(fā)和再利用。本研究擬采用響應(yīng)面法對(duì)粗壯脈紋孢菌發(fā)酵稻谷加工副產(chǎn)物（礱糠和脫脂米糠）生產(chǎn)類胡蘿卜素的培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化。通過Plackett-Burman設(shè)計(jì)篩選出對(duì)色素產(chǎn)量具有顯著影響的因子，再通過最陡爬坡實(shí)驗(yàn)快速接近最大響應(yīng)區(qū)域，最后用響應(yīng)面法優(yōu)化各主要影響因子以確定最佳發(fā)酵培養(yǎng)基組成，以期為稻谷加工副產(chǎn)物的開發(fā)利用提供了一條有效的途徑。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

粗壯脈紋孢菌 本實(shí)驗(yàn)室自行篩選分離保存；礱糠、脫脂米糠 湖南粒粒晶糧油集團(tuán)；丙酮 分析純，上?？破栈瘜W(xué)試劑廠；乙酸乙酯 分析純，天津市永大化學(xué)試劑有限公司。

紫外可見分光光度計(jì) 上海光譜儀器有限公司；恒溫恒濕培養(yǎng)箱 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；pH計(jì) 上海精科；手提式蒸汽滅菌器 上海申安。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件

1.2.1.1 活化培養(yǎng)基 沙氏培養(yǎng)基（4%麥芽糖、2%蛋白胨、1.5%～1.8%瓊脂，pH5.5～6.0）。

1.2.1.2 種子液的制備 葡萄糖10g、蛋白胨5g、KH2PO41g、MgSO4·7H2O 0.5g、pH自然，自來水定容到1L。

1.2.1.3 培養(yǎng)條件 從新鮮菌體活化培養(yǎng)基上取1環(huán)菌接入種子液（30mL/250mL錐形瓶），于30℃、210r/min搖瓶培養(yǎng)24h后，以10%（v/m）的接種量接入固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，于30℃培養(yǎng)4d。

1.2.2 類胡蘿卜素的提取及測(cè)定[3]菌體及孢子的破壁采用研磨破壁法。將上述培養(yǎng)好的培養(yǎng)物于45℃烘干36h達(dá)恒重，粉碎，備用。準(zhǔn)確稱取培養(yǎng)物1g，與2g石英砂及10mL丙酮∶乙酸乙酯（1∶1，v∶v）混合液充分研磨后，補(bǔ)足20mL丙酮∶乙酸乙酯（1∶1，v∶v）混合液后室溫下浸提15min，將提取液濾入燒杯中。按上述操作，重復(fù)提取2次，合并提取液，減壓蒸餾后用丙酮定容到15mL，經(jīng)紫外可見分光光度計(jì)掃描后確定該色素的最大吸收峰在461nm處，因此于461nm下測(cè)定吸光度值，按下式計(jì)算類胡蘿卜素含量。

類胡蘿卜素產(chǎn)量（mg/kg培養(yǎng)物）=Aλmax×D×V/（0.16×W）

式中：Aλmax—類胡蘿卜素最大吸收波長(zhǎng)下的吸光度；V—提取所用溶劑量（mL）；D—測(cè)定試樣時(shí)的稀釋倍數(shù)；W—培養(yǎng)物重量（g）；0.16—類胡蘿卜素的克分子消光系數(shù)。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.3.1 Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)篩選培養(yǎng)基主要影響因素 影響粗壯脈紋孢菌產(chǎn)類胡蘿卜素的因素較為復(fù)雜，參考余瑋[10]、賈才華[11]等及本研究摸索，本實(shí)驗(yàn)選用實(shí)驗(yàn)次數(shù)N=12的Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以礱糠和脫脂米糠為主要原料，選擇脫脂米糠、（NH4）2SO4、KH2PO4、MgSO4、MnSO4、CaCl2六個(gè)因素為研究對(duì)象，另外選擇3個(gè)虛擬項(xiàng)，用于估計(jì)誤差，共9個(gè)因素，以類胡蘿卜素產(chǎn)量為響應(yīng)值，從中篩選出色素產(chǎn)量的主要影響因素。Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)各因子及水平表見表1。

表1 Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)因子水平表Table 1 Variables and levels in Plackett-Burman design

1.2.3.2 主要影響因素最陡爬坡實(shí)驗(yàn) 響應(yīng)面擬合方程只在最佳值區(qū)域的緊接鄰域里才能建立有效的響應(yīng)面擬合。為了確定主要影響因素的最大響應(yīng)區(qū)域，采用最陡爬坡法。最陡爬坡法以實(shí)驗(yàn)值變化的梯度方向?yàn)榕榔路较颍鶕?jù)各因素效應(yīng)值的大小確定變化步長(zhǎng)，能快速、經(jīng)濟(jì)地逼近最佳值區(qū)域。根據(jù)Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以選出2個(gè)主要影響因素，以類胡蘿卜素產(chǎn)量為考察指標(biāo)，設(shè)計(jì)最陡爬坡實(shí)驗(yàn)以快速接近最大響應(yīng)區(qū)域。

1.2.3.3 響應(yīng)曲面法（RSM）優(yōu)化培養(yǎng)基組成 篩選出影響粗壯脈紋孢菌發(fā)酵稻谷加工副產(chǎn)物產(chǎn)類胡蘿卜素的主要影響因子，并確定其最大響應(yīng)區(qū)域后，采用旋轉(zhuǎn)中心組合設(shè)計(jì)（central composite rotatable design，CCRD）法對(duì)脫脂米糠添加量（X1）和（NH4）2SO4添加量（X2）兩個(gè)因素進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化，以獲得該菌體產(chǎn)類胡蘿卜素的最佳培養(yǎng)基。自變量xi按式（1）進(jìn)行編碼變換：

式中：Xi為自變量xi的編碼值；xo為自變量xi在中心點(diǎn)的值；Δxi為自變量變化步長(zhǎng)。

用標(biāo)準(zhǔn)多項(xiàng)式回歸方法，對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，得到二次多項(xiàng)式回歸方程：

式中：Y為預(yù)測(cè)響應(yīng)值；β0為截距；βi為線性系數(shù)；βii為平方系數(shù)；βij為交互作用系數(shù)。

考察的變量及實(shí)驗(yàn)水平編碼見表2。

表2 中心組合設(shè)計(jì)因素水平表Table 2 Variables and levels in central composite design

1.2.3.4 最佳發(fā)酵工藝下發(fā)酵生產(chǎn)色素實(shí)驗(yàn) 根據(jù)實(shí)驗(yàn)室先期優(yōu)化的粗壯脈紋孢菌發(fā)酵稻谷加工副產(chǎn)物生產(chǎn)類胡蘿卜素的最佳發(fā)酵條件（蒸料時(shí)間23min、培養(yǎng)基初始含水量56%、初始pH為培養(yǎng)基自然pH、接種量0.2%、種齡72h、發(fā)酵溫度30℃、10cm高5W白熾燈全程光照培養(yǎng)112h），采用優(yōu)化的培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)色素實(shí)驗(yàn)，研究稻谷加工副產(chǎn)物發(fā)酵色素的可行性，為進(jìn)一步中試生產(chǎn)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS 8.2軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，p＜0.05為顯著性水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)篩選培養(yǎng)基主要影響因素

通過Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)篩選出粗壯脈紋孢菌產(chǎn)類胡蘿卜素培養(yǎng)基的主要影響因素，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見表3。

表3 Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 3 Design matrix and experimental results of Plackett-Burman design

對(duì)Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行回歸分析，結(jié)果見表4。由表4可知，脫脂米糠（p=0.025486）、（NH4）2SO4（p=0.013161）均在95%概率水平上差異顯著，而KH2PO4、MgSO4、MnSO4、CaCl2在95%概率水平上差異不顯著。因此選擇脫脂米糠和（NH4）2SO4進(jìn)一步考察它們對(duì)類胡蘿卜素產(chǎn)量的影響。其他可信度小的因素在下一步的培養(yǎng)基優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中不予考慮。

表4 Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)結(jié)果回歸分析Table 4 The results and regression analysis of the Plackett-Burman

2.2 最陡爬坡實(shí)驗(yàn)快速接近最大響應(yīng)區(qū)域

由Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)計(jì)主要因素的最陡爬坡路徑，其中脫脂米糠和（NH4）2SO4添加量均有顯著正效應(yīng)，應(yīng)增加；根據(jù)這2個(gè)因素效應(yīng)大小的比例設(shè)定它們的變化方向及步長(zhǎng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表5所示，最優(yōu)發(fā)酵條件可能在實(shí)驗(yàn)2與實(shí)驗(yàn)3之間，故以實(shí)驗(yàn)2的條件為響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)的中心點(diǎn)。

2.3 響應(yīng)面法優(yōu)化培養(yǎng)基組成

根據(jù)Plackett-Burman和最陡爬坡實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇脫脂米糠和（NH4）2SO4兩個(gè)因素為自變量，以類胡蘿卜素產(chǎn)量為響應(yīng)值設(shè)計(jì)中心組合實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見表6。

表6 中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及響應(yīng)值表Table 6 Process variables and levels in central composite design arrangement and experimental results

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，利用SAS 8.2數(shù)學(xué)分析軟件進(jìn)行回歸分析，得到響應(yīng)曲面二次多元回歸模型：Y=149.88+20.57541X1+5.075812X2-8.721269X12+19.525X1X2-23.37128X22式（3）

對(duì)模型進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表7，模型Pr＞F＝0.0001＜0.01，表明模型極顯著，失擬項(xiàng)Pr＞F=0.930465＞0.1不顯著，又有模型決定系數(shù)R2=0.9856，說明模型與實(shí)際情況擬合程度很好，因此該模型可用于粗壯脈紋孢菌發(fā)酵稻谷加工副產(chǎn)物產(chǎn)類胡蘿卜素的最佳培養(yǎng)基組成的分析和預(yù)測(cè)。

表7 回歸模型的方差分析Table 7 Variance analysis of each item in regression equation

由表7方差分析結(jié)果可知，各因素對(duì)粗壯脈紋孢菌發(fā)酵稻谷加工副產(chǎn)物產(chǎn)類胡蘿卜素的線性效應(yīng)、曲面效應(yīng)、交互影響作用皆顯著。脫脂米糠和（NH4）2SO4對(duì)類胡蘿卜素產(chǎn)量的交互作用的響應(yīng)曲面見圖1。由圖1可知，響應(yīng)值Y隨著X1編碼值的增大呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)，而X2在編碼值為1.0左右時(shí)有較大的響應(yīng)值。同時(shí)，脫脂米糠和（NH4）2SO4之間的交互作用較顯著，因素X1（脫脂米糠）對(duì)響應(yīng)值的影響最大，這與方差分析的結(jié)果一致。

圖1 脫脂米糠和（NH4）2SO4對(duì)類胡蘿卜素產(chǎn)量交互作用的響應(yīng)曲面圖Fig.1 Response surface showing the interactive effects of defatted rice bran and（NH4）2SO4on carotenoid production

對(duì)培養(yǎng)基組成回歸模型進(jìn)行求導(dǎo)和解逆矩陣可以得到模型的極值點(diǎn)，脫脂米糠為64.58%，（NH4）2SO4為1.57%，礱糠為33.85%，此時(shí)模型預(yù)測(cè)的最大響應(yīng)值為166.9mg/kg培養(yǎng)物。為了驗(yàn)證預(yù)測(cè)結(jié)果，在上述優(yōu)化培養(yǎng)基條件下進(jìn)行三次重復(fù)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，得到類胡蘿卜素產(chǎn)量為170.9mg/kg，與理論值接近。因此，通過響應(yīng)面法優(yōu)化的培養(yǎng)基參數(shù)準(zhǔn)確可靠，具有一定的實(shí)際指導(dǎo)價(jià)值。

2.4 最佳發(fā)酵工藝下發(fā)酵生產(chǎn)色素實(shí)驗(yàn)

在1.2.3.4最佳色素發(fā)酵工藝下，色素產(chǎn)量為366mg/kg培養(yǎng)物。說明優(yōu)化的工藝條件，能使色素產(chǎn)量進(jìn)一步提高。

3 討論與結(jié)論

3.1 稻谷加工副產(chǎn)物培養(yǎng)基組成簡(jiǎn)單

本研究發(fā)現(xiàn)，色素固態(tài)發(fā)酵最佳培養(yǎng)基由礱糠、脫脂米糠和少量的硫酸銨組成，該培養(yǎng)基可完全滿足粗壯脈紋孢菌發(fā)酵色素的營(yíng)養(yǎng)需求。硫酸銨作為一種速效氮源，主要用于滿足菌體初期生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)需求。而其他相關(guān)研究報(bào)道中一般需要在培養(yǎng)基中添加參與菌體生長(zhǎng)和物質(zhì)代謝過程必需的礦質(zhì)元素和無機(jī)鹽，如磷酸鹽、Ca2+、Mg2+、Mn2+等。米糠和脫脂米糠中含有豐富的礦物質(zhì)，特別是磷（1.43%）和鈣（0.07%），但大部分以植酸鹽及其絡(luò)合物的形式存在，這種植酸鹽絡(luò)合物的存在形式會(huì)降低米糠中有機(jī)磷和礦物質(zhì)元素的生物利用率[12-13]。周小玲、劉友芬等研究發(fā)現(xiàn)[12，14]，粗壯脈紋孢菌能分泌植酸酶，植酸酶可催化分解植酸生成無機(jī)磷酸和肌醇，可解除植酸對(duì)金屬離子和蛋白質(zhì)的螯合作用，增加培養(yǎng)基中的可利用礦物質(zhì)含量，并提高菌體對(duì)培養(yǎng)基中有機(jī)磷和礦質(zhì)元素的利用率。因此，脫脂米糠中豐富的礦物質(zhì)以及粗壯脈紋孢菌分泌的植酸酶可能是導(dǎo)致培養(yǎng)基不需添加無機(jī)鹽的一個(gè)原因。

3.2 簡(jiǎn)單的固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)較高產(chǎn)量的類胡蘿卜素

在優(yōu)化培養(yǎng)基和發(fā)酵條件下，粗壯脈紋孢菌類胡蘿卜素的產(chǎn)量達(dá)366mg/kg培養(yǎng)物，該色素發(fā)酵工藝不僅培養(yǎng)基組成簡(jiǎn)單，原料廉價(jià)易得，而且采用固體發(fā)酵工藝，發(fā)酵周期短，過程易操作控制。與其他研究報(bào)道相比，該工藝在色素產(chǎn)量和發(fā)酵成本上均具有一定的優(yōu)勢(shì)。例如，趙峰梅等[15]研究光合細(xì)菌ZY2159菌株產(chǎn)類胡蘿卜素的發(fā)酵條件，以蘋果酸鈉和酵母膏為培養(yǎng)液（需添加十二種無機(jī)鹽）在5L發(fā)酵罐中培養(yǎng)6d，生物量可達(dá)15.4g/L發(fā)酵液，類胡蘿卜素產(chǎn)量50.9mg/L發(fā)酵液；陳濤、陳宗勝等[16]利用三孢布拉氏霉生產(chǎn)β-胡蘿卜素，以淀粉、黃豆餅粉、玉米漿和植物油為主要配方，在30L發(fā)酵罐中產(chǎn)量可達(dá)1213.1mg/L，在3m3發(fā)酵罐中產(chǎn)量可達(dá)1146.5mg/L；劉春朝[17]研究產(chǎn)類胡蘿卜素的光合細(xì)菌Rhodobacter Sphaerordes在500L的發(fā)酵罐中48h時(shí)類胡蘿卜素的產(chǎn)量可達(dá)295mg/L。P B Bhosale[18]對(duì)產(chǎn)β-胡蘿卜素的Rhodotorula glutinis菌種發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化，采用UV對(duì)菌種進(jìn)行誘變使總類胡蘿卜素的產(chǎn)量達(dá)185mg/L。

[1]李福枝，劉飛，曾曉希，等.天然類胡蘿卜素的研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技，2007（9）：227-231.

[2]王永華，梁世中.類胡蘿卜素的結(jié)構(gòu)和生理功能研究[J].廣州食品工業(yè)科技，16（4）：1-4.

[3]李紅艷，鄧澤元，范亞葦，等.粗壯脈紋孢菌發(fā)酵豆渣所產(chǎn)類胡蘿卜素的研究[J].食品工業(yè)科技，2009，30（4）：160-162.

[4]WERNER RAU，URSULA MITZKA-SCHNABEL.Carotenoid synthesis in Neurospora crassa[J].METHODS IN ENZYMOLOGY，1985，110：253-267.

[5]Hideo Iigusa，Yusuke Yoshida，Kohji Hasunuma.Oxygen and hydrogen peroxide enhance light-induced carotenoid synthesis in Neurospora crassa[J].FEBS Letters，2005，579：4012-4016.

[6]Guang-Yi Wang，Jay D Keasling.Amplification of HMGCoA reductase production enhances carotenoid accumulation in Neurospora crassa[J].Metabolic Engineering，2002（4）：193-201.

[7]吳占文，郭唏明，孫強(qiáng).稻米資源深加工產(chǎn)品國內(nèi)外研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2010（2）：55-59.

[8]鹿保鑫，張丕智.稻殼的綜合利用技術(shù)[J].農(nóng)機(jī)化研究，2005（4）：195-196.

[9]閆金萍.米糠深加工產(chǎn)品的開發(fā)與研究進(jìn)展[J].食品科技，2007（6）：243-246.

[10]余瑋，鄧澤元，范亞葦，等.粗壯脈紋孢菌所產(chǎn)纖維素酶的性質(zhì)研究[J].食品科學(xué)，2006，27（12）：50-53.

[11]賈才華，鄧澤元，范亞葦，等.響應(yīng)面法優(yōu)化粗壯脈紋孢菌降解啤酒糟粗纖維的培養(yǎng)基[J].食品科學(xué)，2009，30（21）：195-199.

[12]周小玲.粗糙脈孢菌（Neurospora crassa）一種新植酸酶基因的克隆、鑒定和重組酶的生化特性[D].無錫：江南大學(xué)，2004.

[13]吳幸芳.開發(fā)米糠飼料的研究進(jìn)展[J].廣東飼料，2006，15（6）：28-29.

[14]劉友芬，陳育如，張玲玲，等.野生型脈孢菌MBS的鑒定及蛋白酶活性研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009（3）：264-267.

[15]趙峰梅，趙春貴，趙邑，等.光合細(xì)菌ZY2159菌株發(fā)酵生產(chǎn)類胡蘿卜素研究[J].食品科學(xué)，2007，28（6）：209-212.

[16]陳濤，陳宗勝，馬國華，等.三孢布拉氏霉發(fā)酵生產(chǎn)β-胡蘿卜素的研究[J].微生物學(xué)通報(bào)，1995，25（2）：79-81.

[17]劉春朝.光合細(xì)菌發(fā)酵產(chǎn)類胡蘿卜素的中試研究[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，1994（6）：47-49.

[18]P B Bhosale，R V Gadre.Production of β -carotene by a mutant of Rhodotorula glutinis[J].Appl Mircrobiol Biotechnol，2001，55：423-427.

Optimization of culture medium composed of rice by-products for carotenoid production by fermentation of Neurospora crassa

LIU Zhi-gang，LI Jing*，ZHANG Li-mei，DENG Ze-yuan，F(xiàn)AN Ya-wei
（State Key Laboratory of Food Science and Technology，Institute for Advanced Study，Nanchang University，Nanchang 330047，China）

TS210.1

A

1002-0306（2012）16-0277-04

2012－02－21 *通訊聯(lián)系人

劉志剛（1984-），男，碩士研究生，主要從事發(fā)酵工程方面的研究。

食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室基金項(xiàng)目（SKLF-MB-201003，SKLF-QN-201105）；江西省科技廳項(xiàng)目（2010BNB01104，S00344）。