雞病毒性關(guān)節(jié)炎活疫苗對SPF雞攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)研究

王友等

摘 要：本研究分別測定了兩種病毒性關(guān)節(jié)炎活疫苗ZJS株和S1133株的TCID50。其中ZJS疫苗株的TCID50為104.5TCID50/羽份，S1133疫苗株的TCID50為103.5TCID50/羽份。通過進(jìn)一步的攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)，證實(shí)ZJS疫苗株對SPF雞的臨床保護(hù)力明顯優(yōu)于S1133疫苗株。

關(guān)鍵詞：病毒性關(guān)節(jié)炎；活疫苗；臨床保護(hù)力

Abstract： The TCID50 of Viral arthritis live vaccine ZJS strain and S1133 strain were determined in this research. The result displayed ZJS strain is 104.5TCID50/dose， and S1133 strain is 103.5TCID50/dose. The further SPF chicken protection experiment indicated that ZJS vaccine strain is much better than S1133strain in the clinical protection of SPF chicken.

Key Words：viral arthritis； live vaccine； protection

病毒性關(guān)節(jié)炎是一種可以由不同血清型和致病型呼腸弧病毒引起導(dǎo)致重大經(jīng)濟(jì)損失的疾病。該病主要侵害肉雞，也可見于商品蛋雞和火雞。該病主要表現(xiàn)為患病雞輕度呼吸道疾病、肝臟壞死及腱和滑膜的炎癥。選擇對雞致病的呼腸弧病毒人工接種火雞可以產(chǎn)生與病毒性關(guān)節(jié)炎一致的病變。

本病可以使用致弱活疫苗和滅活全病毒疫苗接種來控制典型的雞呼腸弧病毒感染。母源抗體的保護(hù)對于該病的防控具有重要意義，種雞接種活苗和滅活疫苗后產(chǎn)生抗體可以防止后代發(fā)生接觸傳染和經(jīng)卵垂直傳播。

Vander Heide等利用禽呼腸弧病毒S1133株開發(fā)了第一代商品化的活疫苗，雖然父母代種雞都在免疫該毒株，但是仍有很多免疫失敗的現(xiàn)象發(fā)生。一株新鑒定的呼腸弧病毒毒株，命名為ZJS株，該毒株具有良好的免疫原性和穩(wěn)定性，能夠在雞胚成纖維細(xì)胞上穩(wěn)定傳代，該毒株通過致弱后，可制作成活疫苗。本實(shí)驗(yàn)通過對SPF雞攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)，比較了兩種病毒性關(guān)節(jié)炎活疫苗的臨床保護(hù)效果，結(jié)果顯示ZJS株疫苗臨床保護(hù)效果明顯優(yōu)于傳統(tǒng)的S1133株疫苗。

1材料

1.1疫苗和種毒

雞病毒性關(guān)節(jié)炎活疫苗-ZJS株由瑞普（保定）生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；雞病毒性關(guān)節(jié)炎活疫苗S1133株由國外某藥業(yè)公司生產(chǎn)；攻毒用種毒為S1133野毒株，由中國獸藥監(jiān)察所提供。

1.2實(shí)驗(yàn)動物

SPF雞胚購自北京梅里亞維通實(shí)驗(yàn)動物有限公司，7日齡SPF雛雞由瑞普（保定）公司疫苗研發(fā)實(shí)驗(yàn)室孵化。

1.3實(shí)驗(yàn)試劑

細(xì)胞培養(yǎng)液，胰酶，胎牛血清，細(xì)胞培養(yǎng)板，肉雞1#料等，其他試劑均為國內(nèi)分析純產(chǎn)品。

1.4實(shí)驗(yàn)儀器

CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱，剪刀，鑷子，離心機(jī)，渦旋儀，注射器，SPF雞負(fù)壓隔離器等。

2方法

2.1 ZJS疫苗和S1133疫苗TCID50的測定

2.1.1 按照常規(guī)方法制備雞胚成纖維細(xì)胞（參考王友 尤永君等《一種優(yōu)化的雞胚成纖維細(xì)胞制備方法及細(xì)胞生長曲線測定》）。

2.1.2取1瓶ZJS凍干苗（1 000dose）用200 mL疫苗稀釋液稀釋后。取0.2 mL做病毒原液，從0.2 mL原液中取20 μL加到180 μL稀釋液中充分混勻；從此稀釋液中取20 μL加到180 μL稀釋液中充分混勻；依次倍比稀釋至10-10。取1塊鋪滿單層次代CEF細(xì)胞的96孔板。前4排接種ZJS株，后4排接種S1133株。每種病毒作11個梯度，每孔加20μL病毒稀釋液，每個稀釋度重復(fù)4個孔，第12孔做陰性對照只加20 μL不含病毒的稀釋液。于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)5～7 d，每天觀察細(xì)胞病變記錄并拍照，按照Reed-Munech方法計算病毒的TCID50。測定方法同上。

2.2實(shí)驗(yàn)動物分組

1日齡健康REO抗體檢測陰性的SPF雞隨機(jī)分成4組。A組為ZJS免疫組；B組為S1133免疫組；C組為不免疫只攻毒對照；D組為不免疫不攻毒對照。A組、B組和C組每組14只雞，D組6只雞

2.3免疫實(shí)驗(yàn)

飼養(yǎng)至7日齡的SPF雞，A組每羽頸皮下接種1dose ZJS株疫苗，B組每羽頸皮下接種1dose S1133株疫苗，C組和D組每羽頸皮下注射0.2 mL疫苗稀釋液。免疫后每日觀察雞群采食和精神狀態(tài)。

2.4攻毒實(shí)驗(yàn)

免疫后21 d，A組、B組和C組所有雞均經(jīng)左側(cè)足墊以104.0EID50的劑量（按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程劑量）注射攻毒，D組左側(cè)足墊注射0.2 mL無菌稀釋液。攻毒后每天觀察雞群采食狀況，精神狀態(tài)以及足部和腿部關(guān)節(jié)變化情況，并記錄。

3結(jié)果

3.1 ZJS株與S113株疫苗TCID50測定結(jié)果

結(jié)果測得ZJS株疫苗為104.38 TCID50/羽份，S1133株疫苗為103.5 TCID50/羽份。

3.2 SPF雞群生長狀況（見圖1～3）

3.3攻毒后雞群發(fā)病情況統(tǒng)計

攻毒對照組的雞群在攻毒后2 d開始發(fā)病，可以見到明顯的左側(cè)足墊腫脹，趾關(guān)節(jié)腫脹。攻毒后第7天，A組有1只左側(cè)足墊出現(xiàn)非常輕微的腫脹；B組有2只出現(xiàn)輕微腫脹，另外有3只出現(xiàn)趾部破損；C組14只雞全部都出現(xiàn)左側(cè)趾部腫脹，并且其中有9只腫脹嚴(yán)重的出現(xiàn)趾部破損；D組不免疫不攻毒對照組一直正常（見圖4～13）。

從圖中臨床癥狀可以看出ZJS株和S1133株均能對呼腸弧病毒強(qiáng)毒產(chǎn)生保護(hù)。S1133組雖然也出現(xiàn)足部腫脹和皮膚破損病例，但是發(fā)病情況明顯輕于攻毒組，說明S1133疫苗可以對病關(guān)強(qiáng)毒產(chǎn)生一定的抵抗；ZJS株僅造成一例輕微腫脹也沒有皮膚破損病例出現(xiàn)，可見ZJS疫苗株對強(qiáng)毒的保護(hù)力明顯高于S1133疫苗株。

4討論

呼腸弧病毒感染雞特別是肉雞導(dǎo)致病毒性關(guān)節(jié)炎、腱鞘炎，雞群常因跛行和總體生產(chǎn)性能低下，包括增重減少、飼料轉(zhuǎn)化率降低、淘汰率高（有時廢棄率高達(dá)20%～40%）、屠宰率下降、死亡增加，種雞產(chǎn)蛋下降、受精率降低及垂直傳鼻病毒等降低了雞的經(jīng)濟(jì)價值，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。種雞在育雛和育成期接種活苗和滅活疫苗是控制本病的經(jīng)典方法。

在開發(fā)用于雛雞免疫，預(yù)防病毒性關(guān)節(jié)炎的活疫苗時，需要建立效檢用強(qiáng)毒株，用于評價雛雞預(yù)防用病毒性關(guān)節(jié)炎活疫苗的效力可行性。本實(shí)驗(yàn)通過經(jīng)典的臨床攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)，證實(shí)了新毒株ZJS制備的活疫苗在安全性和保護(hù)力上均優(yōu)于傳統(tǒng)的S1133疫苗毒株。ZJS疫苗具有更好地保護(hù)效果，在規(guī)?；u場防控病毒性關(guān)節(jié)炎的程序中將發(fā)揮極大地作用，具有廣闊的市場前景。

（編輯：何芳）