豬支原體肺炎活疫苗與豬偽狂犬活疫苗混合噴鼻試驗(yàn)

李相釗

（齊魯動物保健品有限公司，山東 濟(jì)南 250100）

豬支原體肺炎是一種頑固性慢性疾病，抗支原體藥物治療可以抑制，但不能根除它，目前最好的辦法是免疫預(yù)防[1-3]。J.Maes等對豬支原體肺炎疫苗免疫接種豬和對照組進(jìn)行成本效率分析表明，接種豬肺炎支原體疫苗具有誘人的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，每頭育肥豬可節(jié)約 1.3歐元[4-5]。接種豬肺炎支原體疫苗還對豬的生長性能、飼料轉(zhuǎn)化率、成活率、淘汰率及治療費(fèi)用等方面均有積極作用 。近年來，豬支原體肺炎活疫苗的研制已取得了巨大進(jìn)展，具有較好的保護(hù)效率。但在探索豬支原體活疫苗免疫的方法也需要進(jìn)行更多研究，本試驗(yàn)旨在探索簡化豬場免疫程序的思路進(jìn)行。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)豬場

山東濰坊昌樂某規(guī)?；i場，基礎(chǔ)母豬5 000頭。

1.2 試驗(yàn)背景

1）該公司肥豬偽狂犬活疫苗、豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）免疫程序：豬偽狂犬活疫苗免疫程序：3日齡噴鼻1頭份海博萊偽狂犬疫苗、50日齡肌注1頭份海博萊疫苗。豬支原體肺炎疫苗免疫程序：進(jìn)口疫苗兩針型3日齡、21日肌內(nèi)注射，每次1頭份/頭。

2）齊魯豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）批號1604001、齊魯偽狂犬活疫苗批號1606006-1、海博萊偽狂犬活疫苗批號2J06-1、進(jìn)口兩針型豬支原體肺炎批號160783A。

3）健康、3日齡、杜長達(dá)三元仔豬，數(shù)量1 201頭。

4）試驗(yàn)試劑：IDEXX偽狂犬抗體檢測試劑盒（gE、gB)

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.1 豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與偽狂犬疫苗相互影響試驗(yàn)

分3個組，豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）+偽狂犬疫苗混合稀釋組、豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）單獨(dú)稀釋對照組與偽狂犬疫苗單獨(dú)稀釋對照組。豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與偽狂犬疫苗混合稀釋，在稀釋之后0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h分別測定豬支原體肺炎活疫苗（RM 48株）效價(jià)、偽狂犬疫苗效價(jià)。單獨(dú)稀釋豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）、單獨(dú)稀釋偽狂犬疫苗，在稀釋之后0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h分別測定豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）、偽狂犬疫苗的效價(jià)。

1.3.2 豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與偽狂犬疫苗混合噴鼻對豬偽狂犬病臨床免疫的影響試驗(yàn)

分成3組，豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）+齊魯偽狂犬疫苗混合噴鼻組、豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）+海博萊偽狂犬疫苗混合噴鼻組、海博萊疫苗單獨(dú)噴鼻組，每組200頭，3日齡噴鼻，35日齡測抗體，56日齡測抗體。

1.3.3 豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與偽狂犬疫苗混合噴鼻對豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）臨床免疫的影響試驗(yàn)

分為2個組，豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）+偽狂犬疫苗混合噴鼻組、不免疫組，每組200頭。3日齡噴鼻、對照噴生理鹽水，免疫21 d后，混合免疫組選取10頭豬，不免疫組選取5頭豬，用豬支原體肺炎強(qiáng)毒株攻毒，攻毒4周后，殺豬，肺部病變觀察，取出肺臟、支氣管，用電子顯微鏡電子掃描纖毛狀態(tài)。

1.3.4 豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與豬支原體肺炎滅活疫苗臨床對比試驗(yàn)

分成2個組，齊魯豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）免疫組與進(jìn)口某廠家疫苗兩針型組，分別免疫201頭、200頭；齊魯組3日齡噴鼻免疫1頭份/頭，進(jìn)口組3日齡、21日肌內(nèi)注射，每次1頭份/頭。70日齡保育結(jié)束，全程統(tǒng)計(jì)日增重、耗料、正品率（去死淘）、試驗(yàn)過程中呼吸道癥狀統(tǒng)計(jì)、試驗(yàn)過程中死亡豬只肺部病變評估。

圖1 試驗(yàn)1：豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與偽狂犬疫苗相互影響試驗(yàn)技術(shù)路線

圖2 試驗(yàn)2：豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與偽狂犬疫苗混合噴鼻對偽狂犬臨床免疫的影響試驗(yàn)

圖3 試驗(yàn)3：豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與偽狂犬疫苗混合噴鼻對豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）臨床免疫的影響試驗(yàn)

圖4 試驗(yàn)4：豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與豬支原體肺炎滅活疫苗臨床對比試驗(yàn)

圖5 豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）+偽狂犬活疫苗混合稀釋與豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）單獨(dú)稀釋豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）的效價(jià)變化圖

圖6 豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）+偽狂犬活疫苗混合稀釋與豬偽狂犬活疫苗單獨(dú)稀釋豬偽狂犬活疫苗的效價(jià)變化圖

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與偽狂犬活疫苗相互影響試驗(yàn)

2.1.1 豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）稀釋后效價(jià)變化曲線

豬支原體肺炎活疫苗（RM 48株）初始效價(jià)為107.74CCU/頭份 ，與偽狂犬疫苗混合稀釋、單獨(dú)稀釋，在稀釋之后 0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h豬 支 原體肺炎活疫苗（RM48株）的效價(jià)變化曲線。單獨(dú)稀釋與混合稀釋對于豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）的效價(jià)影響不顯著。

2.1.2 偽狂犬活疫苗稀釋后效價(jià)變化曲線

偽狂犬活疫苗初始效價(jià)為107.2TCID50/頭份，與豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）混合稀釋、單獨(dú)稀釋，在稀釋之后0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h偽狂犬疫苗的效價(jià)變化曲線。單獨(dú)稀釋與混合稀釋對于偽狂犬疫苗的效價(jià)影響不顯著。

2.2 豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）對偽狂犬臨床免疫的影響試驗(yàn)

無論是單獨(dú)噴鼻還是混合噴鼻，對于偽狂犬抗體的影響是不顯著的。不同廠家的偽狂犬疫苗與豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）的混合噴鼻對于偽狂犬的抗體影響是不顯著的。

2.3 豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與偽狂犬活疫苗混合噴鼻對豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）臨床免疫的影響試驗(yàn)

豬支原體肺炎活疫苗（RM 48株）與偽狂犬活疫苗混合噴鼻免疫對于豬支原體肺炎強(qiáng)毒株攻毒能夠提供保護(hù)，而對照組發(fā)病。

2.3.1 混合噴鼻免疫組與不免疫組攻毒后剖檢對照

用豬支原體肺炎強(qiáng)毒株攻毒后，豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與偽狂犬活疫苗混合噴鼻免疫的豬只的肺臟沒有病變，而生理鹽水對照組，均表現(xiàn)出典型的豬支原體肺炎尖葉、心葉對稱性肉變的癥狀。2.3.2 混合噴鼻免疫組與不免疫組電鏡纖毛觀察

表1 豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）對偽狂犬臨床免疫的影響

表2 豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與偽狂犬活疫苗混合噴鼻對豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）臨床免疫的影響

圖7 不免疫疫苗攻毒豬只肺臟照片

圖8 混合噴鼻攻毒后豬只肺臟照片

圖9 不免疫疫苗攻毒豬只纖毛電鏡照片

圖10 混合噴鼻攻毒后豬只纖毛電鏡照片

表3 豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與豬支原體肺炎滅活疫苗臨床對比

用豬支原體肺炎強(qiáng)毒株攻毒后，豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與偽狂犬活疫苗混合噴鼻免疫的豬只的纖毛表現(xiàn)的均比較正常，而生理鹽水對照組，纖毛脫落明顯。

2.4 豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與豬支原體肺炎滅活疫苗臨床對比試驗(yàn)

2.4.1 呼吸道癥狀臨床評價(jià)

轉(zhuǎn)保育之后，共進(jìn)行4次抽檢，每隔10天抽檢一次，接種豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）豬只呼吸道癥狀比例明顯好于接種進(jìn)口兩針型豬支原體滅活疫苗。

2.4.2 死亡豬只肺部病變評分

采用Goodwen評分法（即55分法）：免疫豬支原體肺炎活疫苗（RM 48株）組死亡的豬只肺部評分明顯好于進(jìn)口滅活疫苗。

2.4.3 生產(chǎn)指標(biāo)評價(jià)

生產(chǎn)指標(biāo)是評價(jià)疫苗免疫效果最直觀的指標(biāo)。免疫齊魯豬支原體肺炎活疫苗（RM 48株）組比進(jìn)口兩針型疫苗，從免疫至保育結(jié)束，平均日增重多長24.55 g/d，造肉效率提升0.188，正品率提升1.52%。

3 討論

3.1 豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與偽狂犬活疫苗用同一種稀釋液混合稀釋不產(chǎn)生相互影響

可能因?yàn)閭慰袢钸m應(yīng)的pH 6-8，而支原體適應(yīng)pH的范圍更廣，而采用PBS緩沖液為主的稀釋液pH在7.4左右。再者動物疫苗里邊最常見的污染就是支原體，也就是說支原體在其他動物疫苗中生存是不影響這些疫苗抗原本身的生長活力。由于支原體與偽狂犬直接的不相互影響，這對于聯(lián)合稀釋噴鼻應(yīng)用推廣有了嘗試的可能。

3.2 豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與偽狂犬活疫苗混合噴鼻對于偽狂犬活疫苗臨床應(yīng)用效果不產(chǎn)生影響

圖11 免進(jìn)口疫苗死豬肺臟正面

圖12 免進(jìn)口疫苗死豬肺臟背面

圖13 免疫豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）死豬肺臟正面

圖14 免疫豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）死豬肺臟背面

表4 免疫后死亡豬只剖檢評分表

表5 免疫齊魯豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與進(jìn)口兩針疫苗關(guān)鍵生產(chǎn)指標(biāo)對照表

表6 免疫豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與進(jìn)口兩針疫苗關(guān)鍵生產(chǎn)指標(biāo)對照表

因?yàn)榛旌蠂姳桥c單獨(dú)噴鼻其偽狂犬的免疫趨勢是一致的。對于豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與偽狂犬疫苗混合聯(lián)合噴鼻的臨床應(yīng)用有了前景，一旦成為事實(shí)，就可以完成簡化免疫程序，方便生產(chǎn)。

3.3 豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與偽狂犬活疫苗混合噴鼻對豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）在臨床應(yīng)用效果也不產(chǎn)生影響

通過攻毒混合噴鼻與不免疫疫苗的結(jié)果看，在攻毒后肺部檢查、纖毛電鏡照片上，混合噴鼻免疫組比不免疫疫苗組產(chǎn)生明顯的優(yōu)勢。豬支原體免疫評價(jià)借助電鏡等先進(jìn)的儀器設(shè)備，直觀表現(xiàn)出了差異。因?yàn)橹гw快速評價(jià)比較麻煩，將來新技術(shù)、新設(shè)備的介入會使試驗(yàn)結(jié)果客觀準(zhǔn)確、速度更快。

3.4 豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與進(jìn)口豬支原體肺炎滅活疫苗臨床免疫對比試驗(yàn)結(jié)果，豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）的優(yōu)勢比較明顯

噴鼻產(chǎn)生的效果比較應(yīng)用進(jìn)口兩針型滅活疫苗帶來生產(chǎn)指標(biāo)更優(yōu)秀。從免疫至保育結(jié)束，平均日增重多長24.55 g/d，造肉效率提升0.188，正品率提升1.52%。推測原因可能因?yàn)樨i支原體肺炎活疫苗（RM48株）是活疫苗，而進(jìn)口疫苗為滅活疫苗，活疫苗在產(chǎn)生免疫保護(hù)的速度上有優(yōu)勢，而且活疫苗在細(xì)胞免疫、黏膜免疫上均有優(yōu)勢。

通過以上4個試驗(yàn)，基本可以得出結(jié)論：豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與偽狂犬活疫苗是可以混合噴鼻使用的；豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）的臨床應(yīng)用效果是優(yōu)于豬支原體肺炎滅活疫苗產(chǎn)品。當(dāng)然本試驗(yàn)的臨床數(shù)據(jù)來源于1個豬場，更多的試驗(yàn)豬場有相似的結(jié)果才能大規(guī)模推廣該項(xiàng)應(yīng)用。但本試驗(yàn)讓豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）與偽狂犬疫苗的聯(lián)合使用看到了前景。

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