參棗寧膠囊改善睡眠功能動物試驗研究

蔣中仁 葛宇杰 敬明武 徐 薇 盧潤生 吳月虹

【摘 要】目的：觀察參棗寧膠囊對動物是否具有改善睡眠功能。方法：選用雌性KM小鼠隨機分為400mg/kg.BW、800mg/kg.BW、1200mg/kg.BW三個劑量組和一個陰性對照組，每組40只，連續(xù)30天經(jīng)口灌胃給予動物后，比較試驗組動物的睡眠時間、睡眠發(fā)生率及睡眠潛伏期與對照組之間的差異性，評價受試物與戊巴比妥鈉（或巴比妥鈉）是否具有協(xié)同改善睡眠作用。結(jié)果：中、高劑量組的睡眠時間（36.70±12.02min，35.34±12.53min）與陰性對照組（22.15±7.94min）比較，延長有顯著性差異時間（F=3.695，P<0.05）；低、高劑量組的睡眠潛伏期時間（20.42±2.88min，20.23±4.04min）與陰性對照組比較（24.41±2.43min），能顯著縮短小鼠睡眠潛伏期時間（F=3.066，P<0.05），沒有出現(xiàn)直接睡眠現(xiàn)象。結(jié)論：參棗寧膠囊對動物具有改善睡眠功能。

【關(guān)鍵詞】參棗寧；酸棗仁；刺五加；人參；KM小鼠；睡眠功能

【中圖分類號】R151 【文章編號】1004-7484（2014）04-2419-01

Experimental Study on the Improvement Sleep Function of Mouse by Shenzaoning Capsules

Zhongren Jiang， Yujie Ge， Mingwu Jing， Wei Xu， Runsheng Lu， Yuehong Wu

（Sichuan Center for Disease Control and Prevention， Chengdu 610041， Sichuan.）

【Abstract】Objective：To evaluate the sleep improvement function of mice by shenzaoning capsule. Methods：Healthy female KM mice were given shenzaoning capsule by oral gavage at dosages of 0， 400mg/kg.BW， 800mg/kg.BW and 1200mg/kg.BW for 30 days. The effect of direct sleep， prolonged sleeping time induced by pentobarbital sodium， the sleeping rate under the threshold hypnogenesis dosage of pentobarbital sodium and sleep delitescence induced by pentobarbital sodium were observed. Results：Significant prolonging of the sleeping time was observed in high doses （35.34±12.53min，P<0.05） and middle doses （36.70±12.02min，P<0.05）， and sleep delitescence was reduced in high doses （20.23±4.04min，P<0.05） and low doses （20.42±2.88min，P<0.05）， while the direct sleeping effect was negative. Conclusions：Shenzaoning capsule could improve sleep of mice to a certain degree.

【Key Words】shenzaoning capsule； spina date seed； acanthopanax； ginseng； mice； sleep improvement

隨著社會竟?fàn)幒凸ぷ鲏毫Φ戎T多因素的影響，睡眠狀態(tài)不佳的人群逐年增加，睡眠障礙嚴(yán)重威脅人群身體健康，目前治療睡眠障礙的方法介紹比較多，有物理療法和藥物療法[1，2，3]。研發(fā)生產(chǎn)具有改善睡眠功能的營養(yǎng)保健品備受廣泛關(guān)注。參棗寧膠囊就是針對睡眠狀態(tài)不佳的人群加工制成的保健營養(yǎng)品，對動物是否具有改善睡眠功能尚未見報道。本文選用雌性KM小鼠進行了睡眠功能方面的研究，為開發(fā)該產(chǎn)品的改善睡眠功能提供評價依據(jù)。

1材料和方法

1.1材料 參棗寧膠囊由陜西某健康藥業(yè)有限公司提供，人體每日推薦量為2400mg/Kg.BW。雌性KM小鼠由成都達碩生物科技有限公司提供，動物合格證號為SCXK（川）2008-24.SPF級。

戊巴比妥鈉由SIGMA-ALDRICH生產(chǎn)（批號為P3761）；巴比妥鈉由國藥集團化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)（批號為F20070124）。動物飼料由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院.四川省人民醫(yī)院實驗動物研究所提供，生產(chǎn)許可證號為SCXK（川）2010-01；實驗動物房使用許可證號為SYXK（川）2011-043.屏障系統(tǒng)。

1.2方法 按照國家衛(wèi)生部2003年頒布的《改善睡眠功能檢驗方法》進行[4]。直接睡眠試驗、延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠時間試驗、戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗及巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗，均設(shè)400mg/kg.BW、800mg/kg.BW、1200mg/kg.BW三個劑量組（分別相當(dāng)于人體推薦量的10、20、30倍）。每套試驗每個組各10只動物。三個劑量組給予不同劑量的受試物，對照組同法給予蒸餾水，每日按20ml/kg.BW經(jīng)口灌胃一次，連續(xù)30天。

1.2.1 直接睡眠試驗：各組動物分別給予不同劑量的受試物，對照組給予同體積的蒸餾水后，以小鼠翻正反射消失（當(dāng)小鼠置于背臥位時，能立即翻正身位，如超過30-60秒不能翻正者，即認(rèn)為翻正反射消失，進入睡眠）為指標(biāo)，觀察各受試物組是否出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象。

1.2.2 延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠時間試驗：各組動物于末次給予受試物和溶劑對照后15分鐘，按10ml/kg.BW腹腔注射戊巴比妥鈉53mg/kg.BW（經(jīng)預(yù)試所得），以小鼠翻正反射消失為指標(biāo)，觀察受試物能否延長戊巴比妥鈉睡眠時間。

1.2.3 戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗：各組動物于末次給予受試物和溶劑對照后15分鐘，按10ml/kg.BW給各組動物腹腔注射戊巴比妥鈉最大閾下催眠劑量42.5mg/kg.BW（經(jīng)預(yù)試所得），記錄30分鐘內(nèi)翻正反射消失達1分鐘以上入睡動物數(shù)。

1.2.4 巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗：動物末次給予受試物和溶劑對照后15分鐘，按10ml/kg.BW給各組動物腹腔注射巴比妥鈉396mg/kg.BW（經(jīng)預(yù)試所得），以翻正反射消失為指標(biāo)，觀察受試物對巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響。

1.3 試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計：睡眠時間和體重的數(shù)據(jù)經(jīng)方差齊性檢驗，進行方差分析，如P值小于0.05，則用Dunnett法進行兩兩比較；若方差不齊，則進行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，仍不齊，改用秩和檢驗，如P值小于0.05，則用 Dunnett，s T3法進行兩兩比較。睡眠發(fā)生率用X2檢驗，以上數(shù)據(jù)均由SPSS 11.0 for Windows軟件包處理。

2 結(jié)果

2.1動物的一般表現(xiàn)、直接睡眠現(xiàn)象及對體重的影響：

結(jié)果見表1，受試物連續(xù)30天經(jīng)口灌胃給予動物后，沒有發(fā)現(xiàn)動物出現(xiàn)直接睡眠現(xiàn)象。動物精神狀態(tài)正常，觀察期內(nèi)各組動物生長發(fā)育正常，體重持續(xù)增長，沒有發(fā)現(xiàn)對動物體重有顯著性影響。

2.2參棗寧膠囊延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠時間試驗

結(jié)果見表2，三個劑量組動物的睡眠時間與陰性對照組比較，可見中、高劑量組能顯著延長睡眠時間（F=3.695，P<0.05）。

2.3參棗寧膠囊戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗

結(jié)果見表3，三個劑量組的小鼠睡眠發(fā)生率與陰性對照組比較，各劑量組的小鼠睡眠發(fā)生率均無明顯差異（x2=2.027，P>0.05）。

2.4參棗寧膠囊巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗

結(jié)果見表4，三個劑量組的小鼠睡眠潛伏期與陰性對照組比較，可見中、高劑量組能顯著縮短睡眠潛伏期時間（F=3.066，P<0.05）。

3 討論

參棗寧膠囊是以酸棗仁、刺五加、人參、五味子等為主要原料經(jīng)粉碎、提取、濃縮等主要工藝加工而成的保健營養(yǎng)品。參棗寧膠囊改善小鼠睡眠的研究結(jié)果表明，中、高劑量組能在（戊）巴比妥鈉催眠的基礎(chǔ)上，顯著延長小鼠的睡眠時間及顯著縮短睡眠潛伏期時間，且無直接睡眠現(xiàn)象，提示受試物能改善動物的睡眠狀態(tài)，說明該受試物與戊巴比妥鈉有協(xié)同延長睡眠時間的作用，與巴比妥鈉有協(xié)同縮短睡眠潛伏期的作用。這可能與受試物中所含的總皂苷等功效成分有關(guān)。據(jù)藥典記載[5]，酸棗仁含有酸棗仁皂苷A和斯皮諾素，刺五加中含有紫丁香苷、五味子中含有五味子醇甲以及人參中含有人參皂苷Rg和Re等生物活性物質(zhì)，這些活性物質(zhì)具有補肝補腎和寧心安神等功能，主要用治療虛煩不眠、驚悸失眠多夢等。

本研究受到實驗環(huán)境條件和動物自身固有的生物學(xué)特征及習(xí)性等諸多因素的影響，動物對受試樣品的反應(yīng)存在種屬、性別、年齡等方面的差異，年齡大的動物中樞神經(jīng)反應(yīng)不敏感[4]；這與葛宇杰等作者的報道結(jié)果一致[6]。該報道用雌性KM小鼠研究了動物體重對戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗的影響，結(jié)果表明小體重動物對戊巴比妥鈉的敏感性及催眠率明顯大于大體重動物。本研究中各劑量組的睡眠發(fā)生率與對照組之間沒有顯著性差異，是否與預(yù)試驗及正式試驗之間的動物體重有關(guān)，尚需進一步研究。為了盡量減少環(huán)境因素及動物體質(zhì)等諸多因素對試驗結(jié)果的干擾，實驗環(huán)境必須恒溫、恒濕、安靜，動物必須保證質(zhì)量，同時還應(yīng)保證各劑量組與對照組之間、預(yù)試驗與正式試驗之間動物體重的均衡性。

參考文獻：

[1] 鄭洲會 睡眠障礙的綜合治療[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新.2012，9（1）：127-128

[2] 姚麗麗，張艷霞.“三聯(lián)療法”促進失眠患者睡眠的臨床觀察[J]，中國誤診學(xué)雜志，2010，10（25）：60-69

[3] 秦嶺.體位療法簡便易行治失眠[J]，家庭醫(yī)學(xué)，2010（1）：54-55

[4] 中華人民共和國衛(wèi)生部，保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范[S]，2003：81-83

[5 中華人民共和國藥典[S]，2010年版（一部）：62-344

[6] 葛宇杰，敬明武，歐世平，等.小鼠體重對睡眠實驗的影響[J].職業(yè)衛(wèi)生與病傷.2007，22（3）：197-198.

作者簡介：

蔣中仁（男，1962-），主任技師，主要從事衛(wèi)生毒理