消毒劑和激素對江西野生金線蓮?fù)庵搀w的誘導(dǎo)研究

邱江明　王瑩　吳建陽等

摘要[目的]研究消毒劑和激素對江西野生金線蓮?fù)庵搀w消毒效果的影響。[方法]以江西龍南九蓮山自然保護(hù)區(qū)的野生金線蓮帶腋芽的莖段為材料，研究濃度0.1%升汞、濃度2%次氯酸鈉、濃度10%次氯酸鈣和飽和漂白粉溶液等不同消毒劑在不同處理時(shí)間對外植體的消毒效果，以及不同濃度的6BA和NAA組合對外植體誘導(dǎo)率的影響。[結(jié)果]以酒精消毒30 s后再用濃度0.1%升汞處理16 min的消毒效果最好，其污染率只有10%，存活率高達(dá)82%；最適合江西野生金線蓮?fù)庵搀w誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L 6BA+0.1 mg/L NAA，誘導(dǎo)率高達(dá)98%。[結(jié)論]消毒劑和激素對江西野生金線蓮?fù)庵搀w的誘導(dǎo)均有一定程度的影響。

關(guān)鍵詞 江西野生金線蓮；消毒劑；激素；誘導(dǎo)

中圖分類號S567文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號0517-6611（2014）04-01029-03

作者簡介邱江明（1984-），男，湖北武漢人，講師，碩士，從事植物組織培養(yǎng)研究。

金線蓮[Anoectochilus roxburghii （Wall.） Lindl]又名金線蘭、金草、烏人參、金絲線、金耳環(huán)等，為蘭科（Orchidaceae）開唇蘭屬（Anoectochilus）多年生珍稀植物，能清熱解毒、滋陰降火、消炎止痛，對無名腫痛、發(fā)燒、止瀉、蛇傷等有明顯療效，無毒無副作用，使用安全[1-2]。其在民間使用范圍較廣，素有“藥王”、“神草”等美稱，主要生長在深山密林下或溪澗旁潮濕的草叢或竹林下，特別是闊葉林下的陰濕地帶。金線蓮是我國傳統(tǒng)的珍貴藥材。經(jīng)測定發(fā)現(xiàn)，金線蓮中氨基酸組成成分、含量及抗衰老活性的微量元素的含量均高于國產(chǎn)和野生西洋參。近年來，金線蓮在治療高血壓、糖尿病及腫瘤等疑難病癥方面效果明顯，日益引起醫(yī)藥界的重視[3]。另一方面由于其株型小巧美觀、葉型優(yōu)美、葉脈金黃色呈網(wǎng)狀排列，是觀賞價(jià)值極高的室內(nèi)觀葉植物，因此金線蓮具有廣闊的開發(fā)利用前景。

金線蓮在我國主要分布于亞熱帶地區(qū)：福建、廣東、廣西、浙江、江西、海南、云南、四川、貴州以及西藏南部等省區(qū)[4]。江西省贛州市安遠(yuǎn)縣鶴子村以及贛州市龍南縣等地有上百年的銷售本地野生金線蓮的歷史。市場上，1 kg野生金線蓮鮮品要幾千元，干品高達(dá)上萬元。但是由于其野生資源有限，而且再生能力差，使得目前江西野生金線蓮資源匱乏。利用組培快繁技術(shù)能對江西野生金線蓮進(jìn)行有效保護(hù)，能夠大大增加當(dāng)?shù)剞r(nóng)戶的經(jīng)濟(jì)收入。但江西野生金線蓮的快繁技術(shù)研究鮮有報(bào)道。因此，筆者通過對比不同消毒劑在不同處理時(shí)間對江西野生金線蓮的消毒效果，以及不同濃度6BA和NAA組合對其外植體誘導(dǎo)率的影響，以期為江西野生金線蓮的組織培養(yǎng)和快速繁殖提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對象。野生金線蓮帶腋芽的莖段，于2012年6月采自江西龍南九蓮山自然保護(hù)區(qū)（圖1）。

1.2 方法

1.2.1 升汞對江西野生金線蓮?fù)庵搀w消毒效果的影響。取江西野生金線蓮?fù)庵搀w，先用酒精消毒30 s，再用濃度0.1%升汞分別處理江西野生金線蓮?fù)庵搀w8、10、12、14、16、18和20 min。消毒完后用無菌蒸餾水沖洗3～5遍，將外植體切成帶腋芽的莖段接種到培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基以MS為基本培養(yǎng)基，并同時(shí)加入6BA和NAA這2種植物激素。每瓶接1株，每個(gè)處理接種20瓶。

1.2.2 次氯酸鈉對江西野生金線蓮?fù)庵搀w消毒效果的影響。取江西野生金線蓮?fù)庵搀w，先用酒精消毒30 s，再用濃度2%次氯酸鈉分別處理江西野生金線蓮?fù)庵搀w10、15、20、25和30 min。消毒完后用無菌蒸餾水沖洗3～5遍，將外植體切成帶腋芽的莖段接種到培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基以MS為基本培養(yǎng)基，并同時(shí)加入6BA和NAA這2種植物激素。每瓶接1株，每個(gè)處理接種20瓶。

1.2.3 次氯酸鈣對江西野生金線蓮?fù)庵搀w消毒效果的影響。取江西野生金線蓮?fù)庵搀w，先用酒精消毒30 s，再用濃度10%次氯酸鈣分別處理江西野生金線蓮?fù)庵搀w10、15、20、25和30 min。消毒完后用無菌蒸餾水沖洗3～5遍，將外植體切成帶腋芽的莖段接種到培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基以MS為基本培養(yǎng)基，并同時(shí)加入6BA和NAA這2種植物激素。每瓶接1株，每個(gè)處理接種20瓶。

1.2.4 飽和漂白粉對江西野生金線蓮?fù)庵搀w消毒效果的影響。取江西野生金線蓮?fù)庵搀w，先用酒精消毒30 s，再用飽和漂白粉溶液分別處理江西野生金線蓮?fù)庵搀w10、15、20、25和30 min。消毒完后用無菌蒸餾水沖洗3～5遍，將外植體切成帶腋芽的莖段接種到培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基以MS為基本培養(yǎng)基，并同時(shí)加入6BA和NAA這2種植物激素。每瓶接1株，每個(gè)處理接種20瓶。

1.2.5 6BA和NAA對江西野生金線蓮?fù)庵搀w消毒效果的影響。以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并同時(shí)加入6BA和NAA這2種植物激素。其中6BA采用3種不同濃度，分別為1、2和3 mg/L；NAA采用5種不同濃度，分別為0.1、0.2、0.5、1.0和1.5 mg/L。

1.2.6 試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。1個(gè)月后統(tǒng)計(jì)用不同消毒劑在不同處理時(shí)間下外植體的污染率、成活率和死亡率，以及不同培養(yǎng)基對外植體誘導(dǎo)率的影響。計(jì)算各種指標(biāo)的公式如下：成活率（%）=（外植體成活數(shù)量/外植體接種數(shù)量）×100；死亡率（%）=（外植體死亡數(shù)量/外植體接種數(shù)量）×100；污染率（%）=（外植體污染數(shù)量/外植體接種數(shù)量）×100；誘導(dǎo)率（%）=成功誘導(dǎo)芽數(shù)量/誘導(dǎo)外植體數(shù)量×100。

2結(jié)果與分析

2.1不同消毒劑對江西野生金線蓮?fù)庵搀w消毒效果的影響

2.1.1 濃度0.1%升汞對江西野生金線蓮?fù)庵搀w消毒效果的影響。由表1可知，用濃度0.1%升汞消毒時(shí)，污染率隨著消毒時(shí)間的增加在降低，死亡率在處理14 min中首次出現(xiàn)，并隨著消毒時(shí)間的增加而增加；存活率隨著消毒時(shí)間的延長先增加后降低，在處理16 min中達(dá)到最大值為82%。綜上可知，用濃度0.1%升汞消毒時(shí)最適宜江西野生金線蓮的消毒時(shí)間為16 min。

2.1.2 濃度2%次氯酸鈉在不同消毒時(shí)間對江西野生金線蓮?fù)庵搀w消毒效果的影響。由表2可知，用濃度2%次氯酸鈉消毒時(shí)，污染率隨著消毒時(shí)間的增加變化不大，污染率都在96%以上，死亡率都為0，存活率隨著消毒時(shí)間的增加首次在25 min中出現(xiàn)，但存活率太低，只有4%。綜上可知，用濃度2%次氯酸鈉對江西野生金線蓮消毒時(shí)由于污染率太高（高達(dá)96%以上），且存活率太低（只有4%），所以濃度2%次氯酸鈉不適合用于江西野生金線蓮?fù)庵搀w的消毒。

2.1.3 濃度10%次氯酸鈣在不同消毒時(shí)間對江西野生金線蓮?fù)庵搀w消毒效果的影響。由表3可知，用濃度10%次氯酸鈣消毒時(shí)，污染率隨著消毒時(shí)間的增加并沒有變化，都為100%，死亡率和存活率都為0。綜上可知，用10%次氯酸鈣對金線蓮消毒時(shí)由于污染率太高（高達(dá)100%），且存活率為0，所以10%次氯酸鈣不適合用于江西野生金線蓮?fù)庵搀w的消毒。

2.1.4 飽和漂白粉溶液在不同消毒時(shí)間對江西野生金線蓮?fù)庵搀w消毒效果的影響。由表4可知，用飽和漂白粉溶液消毒時(shí)，污染率隨著消毒時(shí)間的增加并沒有變化，都為100%，死亡率和存活率都為0。綜上可知，用飽和漂白粉溶液對江西野生金線蓮消毒時(shí)由于污染率太高（高達(dá)100%），且存活率為0，所以飽和漂白粉溶液不適合用于江西野生金線蓮的消毒。

2.2不同濃度的6BA和NAA組合對江西野生金線蓮?fù)庵搀w誘導(dǎo)率的影響 由表5可知，當(dāng)6BA的濃度為1.0 mg/L時(shí)，隨著NAA濃度的增大誘導(dǎo)率逐漸降低；當(dāng)NAA濃度為0.1 mg/L時(shí)，誘導(dǎo)率最大為63%。當(dāng)6BA的濃度為2.0 mg/L時(shí)，隨著NAA濃度的增大誘導(dǎo)率也在降低；當(dāng)NAA濃度為0.1 mg/L和0.2 mg/L時(shí)誘導(dǎo)率最大，都為98%。當(dāng)6BA的濃度為3.0 mg/L時(shí)，隨著NAA濃度的增大誘導(dǎo)率也在降低；當(dāng)NAA濃度為0.1 mg/L和0.2 mg/L時(shí)誘導(dǎo)率最大，都為98%。但在6BA的濃度為3.0 mg/L時(shí)有玻璃化現(xiàn)象出現(xiàn)，且隨著NAA濃度的增加玻璃化現(xiàn)象更明顯。綜合以上情況可知，最適宜金線蓮?fù)庵搀w誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L 6BA+0.1 mg/L NAA；在此培養(yǎng)基中，金線蓮的誘導(dǎo)率高達(dá)98%。

3結(jié)論與討論

試驗(yàn)研究了濃度0.1%升汞、濃度2%次氯酸鈉、濃度10%次氯酸鈣、飽和漂白粉溶液等4種消毒劑在不同處理時(shí)間對江西野生金線蓮?fù)庵搀w的消毒效果，從而得到最適宜江西野生金線蓮?fù)庵搀w的消毒藥劑為濃度0.1%升汞，最適宜的消毒時(shí)間為16 min，其污染率只有10%，存活率高達(dá)82%。同時(shí)，試驗(yàn)還通過比較不同濃度的6BA和NAA組合對江西野生金線蓮?fù)庵搀w誘導(dǎo)率的影響，從而得到最適宜金線蓮?fù)庵搀w誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為：MS+2.0 mg/L 6BA+0.1 mg/L NAA；在此培養(yǎng)基中，金線蓮的誘導(dǎo)率高達(dá)98%。

目前，臺灣金線蓮和福建金線蓮品種選育及快繁技術(shù)研究已成功運(yùn)用于商業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)，在福建地區(qū)已經(jīng)形成了較大的產(chǎn)業(yè)鏈。江西野生金線蓮其葉面顏色較臺灣品種和福建品種更深，其藥用價(jià)值可能會(huì)更高于臺灣金線蓮和福建金線蓮，但江西野生金線蓮的優(yōu)良品種選育及快繁技術(shù)的研究鮮有報(bào)道。試驗(yàn)利用江西野生金線蓮為外植體成功的誘導(dǎo)出其組培瓶苗，為實(shí)現(xiàn)江西野生金線蓮的商業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)提供了一點(diǎn)技術(shù)儲備。

參考文獻(xiàn)

[1] 吳清昌.中國本草原色圖譜[M].臺灣：臺灣草藥出版社，1984：14.

[2] 福建中醫(yī)研究院.福建藥物志[M].福州：福建科學(xué)技術(shù)出版社，1994.

[3] 鐘岑生.金線蓮的藥用價(jià)值與開發(fā)[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，1997（2）：102-104.