常用梅毒檢測方法的比較和評價

范燁華 錢金李

【摘 要】目的：本文主要比較和評價梅毒的4種檢測方法的靈敏度和特異性，為選擇篩查梅毒的方法提供參考，進而總結出簡單快捷的最佳篩查方法，用于大批量標本的診斷。方法：用快速血漿反應素試驗（RPR）、甲苯胺紅快速反應素試驗（TRUST）、梅毒螺旋體抗體體外診斷膠體金法（SYP）、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）同時檢測226例血清標本，其中經梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）法確證97份為梅毒患者血清，129份血清為對照組。結果：RPR、TRUST、SYP、ELISA這四種方法的靈敏度分別為93.81%、94.84%、97.94%、98.97%，特異性分別為95.35%、96.12%、98.45%、99.22%。結論：ELISA法的靈敏度和特異性明顯高于其他三種方法，RPR、TRUST這兩種方法適用于篩選試驗，也可應用于梅毒治療療效觀察，SYP法適用于大規(guī)模體檢、急診手術，ELISA法適于用復檢試驗、手術或輸血前的試驗。

【關鍵詞】梅毒；快速血漿反應素試驗（RPR）；甲苯胺紅快速反應素試驗（TRUST）；梅毒螺旋體抗體體外診斷膠體金法（SYP）；酶聯免疫吸附試驗（ELISA）

【中圖分類號】R377+.1 【文獻標識碼】A 【文章編號】1004-7484（2014）04-01920-02

梅毒（Syphilis）是由蒼白螺旋體（Treponema pallidum，TP）所引起的一種性傳播疾病，其傳染性強，感染后可引起全身各組織、器官的損害，危害較大。今年來，在我國梅毒的發(fā)病率呈上升趨勢。在梅毒診斷中，由于抗體效價或方法靈敏性特異性等原因使診斷結果常出現偏差。因此選擇靈敏度高、特異性強的檢測方法，對控制梅毒傳播意義重大。實驗室合理、有效的選用檢驗方法，避免錯診、誤診和漏診是至關重要的。目前我國梅毒螺旋體抗原血清試驗方法主要有快速血漿反應素試驗（RPR）、甲苯胺紅快速反應素試驗（TRUST）、梅毒螺旋體抗體體外診斷膠體金法（SYP）、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）、梅毒螺旋體血球凝集試驗（TPHA）、梅毒印跡試驗（WB）、TP-DNA測定實驗（PCR）等試驗方法。本文就梅毒血清學檢測中常用的4種（RPR、TRUST、SYP、ELISA）方法進行了對比分析。

1材料和方法

1.1 標本來源 226份待測血清其中97份確診梅毒患者血清，129份為對照血清。待測血清全部來自2012年3月至2012年5月到本保健所進行婚前檢查以及梅毒篩查者共2568份血清，其中對照組血清129例為隨機抽取。129例非梅毒患者中孕婦33例，病毒性肝炎患者9例，類風濕性疾病患者5例，慢性腎炎患者6例，75歲以上健康老年人21例，健康體檢者55人。

1.2 試劑 試驗用RPR試劑由上?？迫A生物藥業(yè)有限公司提供，TRUST試劑由上海榮盛生物藥業(yè)有限公司提供，SYP試劑由艾康生物技術（杭州）有限公司提供，ELISA試劑由英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司提供，TPPA由日本富士株式會社提供。

1.3方法 用RPR、TRUST、SYP、ELISA法同時檢測，所有檢測方法操作和實驗條件與試劑說明書保持一致，試劑均在有效期內使用。

1.3.1快速血漿反應素試驗（RPR）

快速血漿反應素試驗是一種常用的梅毒血清學試驗，檢查的是人體內的反應素。該試驗原理是用未經過處理的活性炭顆粒（直徑3～5）吸附VDRL抗原（0.03%心擬脂、0.21%卵磷脂、0.9%膽固醇，用無水乙醇配置）。此顆粒如果與待檢血清中反應素結合，便形成黑色凝集塊，可肉眼觀察結果。

1.3.2.甲苯胺紅快速反應素試驗（TRUST）

TRUST試驗是檢測梅毒患者血清中存在著的反應素，采用VDRL抗原重懸于特制的甲苯胺紅溶液中，當待測血清中存在反應素時，即與其發(fā)生凝集反應，出現肉眼可見的粉紅色凝塊。

1.3.3梅毒螺旋體抗體體外診斷膠體金法（SYP）

梅毒抗體試紙條是采用高度特異性的抗原抗體反應及免疫層析分析技術來定性檢測全血、血清、血漿中是否有梅毒抗體，試劑盒含有被事先固定于膜上測試區(qū)（T）的鼠抗人抗體和質控區(qū)（C）的相應抗體。

1.3.4酶聯免疫吸附試驗（ELISA）

ELISA是利用重組梅毒螺旋體TP47、TmPA抗原包被微孔板和辣根過氧化物酶標記的TP47、TmPA抗原夾心法檢測血清中的梅毒特異性抗體。

1.4統(tǒng)計方法 采用χ2檢驗。

2 結果

四種檢測方法對待測血清檢測的敏感度和特異性比較見表1。

3 討論

目前臨床對梅毒螺旋體感染的診斷方法越來越多，但臨床應用不一。人感染梅毒螺旋體后，血液產生兩種抗體，一種是非梅毒螺旋體特異性抗體，是梅毒螺旋體在破壞組織時釋放的抗原性物質（心磷脂）刺激機體產生的有抗體性質的反應素（抗心磷脂抗體），檢測方法如RPR、TRUST、VDRL、USR等；另一種是梅毒螺旋體特異性抗體包括IgM和IgG，檢測方法如TPHA、ELISA、SYP等。

本研究用4種方法對標本進行檢測，結果顯示RPR以及TRUST的靈敏度和特異性低于其他2種方法，這是因為人體感染梅毒4～10周血清中才可產生一定數量的抗體，非特異性抗體比特異性抗體晚1周出現，在疾病的非活動期和治療后容易消失，易造成漏檢。而且在人體某些生理或病理狀態(tài)下，RPR和TRUST易出現假陽性，如懷孕、病毒性肝炎、結核、亞急性細菌性心內膜炎、類風濕性疾病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、慢性腎炎等，健康老年人中也可出現假陽性結果。但這兩種方法可以用于梅毒的治療觀察、隨訪和復發(fā)的輔助診斷。

SYP膠體金法是近幾年迅速發(fā)展起來的一種體外快速診斷技術，它結合了特異的抗原抗體反應與免疫層析技術，應用現代生物工程技術制備了純化的單克隆梅毒螺旋體基因工程抗原，能檢測出梅毒螺旋體抗體，具有快速（5～15min）、簡便和準確的特點，而且可用于全血、血清或血漿的檢測，一次加樣，不需要特殊的儀器，既可以批量檢測，也可以用于少量標本的檢測。梅毒膠體金方法的敏感性高于RPR和TRUST，具有較高的特異性。因此梅毒膠體金方法可以作為梅毒的大規(guī)模體檢、急癥手術、床邊檢驗和無償獻血的初篩試驗，具有推廣意義。

梅毒螺旋體ELISA試驗是梅毒特異性抗原包被在微孔板上，采用雙抗原夾心法檢測梅毒螺旋體特異性IgM和IgG抗體，其敏感度高、特異性好、試驗方法操作簡便、穩(wěn)定性好，且不受溶血和纖維蛋白影響，可自動化進行，結果清晰，并可與全自動免疫分析系統(tǒng)結合進行加樣檢測和分析，采用電腦軟件處理、保存、傳輸數據，使檢測更客觀準確，數據管理更規(guī)范化，是目前梅毒血清學診斷實驗的首選方法。需注意的是ELISA法檢測時，如果血清中梅毒抗體濃度過高，會產生鉤狀效應。對于我們所及其他醫(yī)療單位來說，進行大量血液樣本篩查，可利用ELISA和TRUST兩種方法的互補來提高梅毒的檢出率和準確性。

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