高效液相色譜法測定肉類食品中常見合成著色劑檢測方法探討

石驍昵，李 玲

(1.烏魯木齊市疾病預防控制中心，新疆 烏魯木齊 830000；2.新疆大學，新疆 烏魯木齊 830000)

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高效液相色譜法測定肉類食品中常見合成著色劑檢測方法探討

石驍昵1，李 玲2

(1.烏魯木齊市疾病預防控制中心，新疆 烏魯木齊 830000；2.新疆大學，新疆 烏魯木齊 830000)

目的：通過高效液相色譜法對肉類食品中五種常用的合成著色劑的檢測方法進行研究并確定最佳洗脫條件。方法：以甲醇-0.02mol/L乙酸銨(pH=6)為流動相進行梯度洗脫；檢測條件：二極管陣列檢測器檢測檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃，檢測波長為250nm，亮藍檢測波長為310nm，將沉淀劑亞鐵氰化鉀和乙酸鋅引入到食物樣品中分析。結(jié)果：對肉類食品中檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍五種著色劑檢出限為2～12ng，回收率為89%～104%。結(jié)論：本研究實現(xiàn)了一站式快速、準確、經(jīng)濟檢測肉類食品樣品中常見的五種著色劑。

高效液相色譜法；前處理；合成著色劑；肉類食品檢測

食品是人們生存的必需品。在社會高速發(fā)展的今天，隨著生活水平的逐步提高，人們對食品的要求也越來越高。除了最基本的衛(wèi)生要求外，更多地要求色、香、味和健康，而近年來的食品安全問題也日益突出。食品添加劑是食品工業(yè)的重要組成部分，沒有食品添加劑就不會有現(xiàn)代的食品工業(yè)[1]。但并非所有的食物都能使用食品添加劑，當前在市售的各類食品中，濫用食品添加劑的違法行為有加大趨勢。本文通過對肉類食品中五種常用的合成著色劑的檢測方法進行評價，探索快速、準確、經(jīng)濟檢測常用合成著色劑的優(yōu)化方法。

1 材料和方法

1.1 實驗儀器

液相色譜儀：島津10AVP液相色譜儀(二極管陣列檢測器，兩個高壓泵，柱溫箱，手動進樣器)；離心機：TGL-16G上海安亭科學儀器廠制造(最大轉(zhuǎn)速可達160 000r/min)；超聲機：奧特賽恩斯儀器有限公司；層析柱管：10cm×1cm玻璃管，有砂芯；色譜柱：Phenomenon Synergi 4u Hydro-RP 80A 150mm×4.6mm；恒溫干燥箱：MEMMERT UFE600；筒式微孔濾膜過濾器；天津市騰達過濾器件廠微孔濾膜；砂芯層析柱：定制，玻璃，直徑26mm，高200mm；實驗室常用玻璃器皿等。

1.2 實驗試劑

1.2.1 甲醇-甲酸洗脫液 甲醇與甲酸按6∶4(V/V)配制，混勻；乙醇-氨水洗脫液：用20% 氨水與乙醇按1∶9(V/V)配成；甲醇-氨水洗脫液：用20%氨水與甲醇按1∶9(V/V)配成；尿素-甲醇洗脫液：用4mol/L 尿素溶液與甲醇按1∶1(V/V)配成；10%亞鐵氰化鉀溶液：稱取Fe(CN)·2H2O 114.6g溶于500mL水中；30%乙酸鋅溶液：稱取Zn(SO4)2·7H2O 239.2g溶于500 mL水中。

1.2.2 標準品 檸檬黃、莧菜紅、靛藍、胭脂紅、日落黃、亮藍均為國家標準物質(zhì)中心購買，濃度為1mg/mL。

1.2.3 聚酰胺固相萃取柱制備 稱取10g聚酰胺粉，用少量超純水調(diào)勻成糊狀，倒入砂芯層析柱中，用超純水反復沖洗備用，臨用前用少量pH=4的水溶液(2mol/L鹽酸調(diào)pH值至4)活化。

1.3 色譜條件確立

流動相：A：0.02mol/L乙酸銨(pH=6)，B：甲醇 ；室溫：25℃；流速：1mL/min；檢測波長：250nm。梯度洗脫條件見表1。

表1 流動相梯度洗脫條件

1.4 實驗方法

方法一：稱取粉碎樣品10g，取少量石油醚分三次沖洗樣品，揮干石油醚后，將樣品加至50mL離心管中再加入20mL乙醇-氨水溶液，超聲15min，5 000r/min離心10min取上清液。重復上述步驟，以10mL、10mL、10mL、20mL再提取四次，合并上清液。水浴揮干至10mL，用2mol/L鹽酸調(diào)pH=6，將2g聚酰胺粉加少許水調(diào)成粥狀，倒入樣品中，攪拌片刻使著色劑充分吸附，用墊好濾紙的漏斗過濾，用60℃、pH=4的水洗滌3～5次，再用甲醇-甲酸溶液洗滌至流出液無色，接著用超純水洗滌至中性，上述洗滌過程中的流出液全部棄去。最后用乙醇-氨水溶液洗滌至流出液無色，收集所有解吸液，水浴蒸發(fā)至1～2mL，用超純水定容至10mL，取1mL于離心管經(jīng)10 000r/min離心10min，待測。

方法二：稱取粉碎樣品10g，取少量石油醚分三次沖洗樣品，揮干石油醚后，將樣品加至50mL離心管中再加入20mL尿素-甲醇(1∶1)，超聲15min，5 000r/min離心10min取上清液。重復上述步驟，以20mL、10mL再提取兩次，合并上清液。水浴揮干至10mL，用2mol/L鹽酸酸調(diào)至pH=6，將2g聚酰胺粉加少許水調(diào)成粥狀，倒入樣品中，攪拌片刻使著色劑充分吸附，水浴至60℃，保溫30min，趁熱連同聚酰胺粉一起傾入層析柱中，用超純水洗滌保持流速20～30滴/min，洗至流出液為中性，且無色，棄去流出液。再用甲醇-氨水洗滌解析著色劑，流速控制在20～30滴/min，至流出液無色，收集流出液，60℃水浴蒸發(fā)至1～2mL，定容至10mL，取1 mL于離心管經(jīng)10 000r/min離心10min，待測。

方法三：用方法二處理的樣品處理至“合并上清液”處，水浴揮發(fā)至近干，加水定容至5mL，加入亞鐵氰化鉀溶液和乙酸鋅溶液各1mL進行沉淀，定容至10mL,搖勻后放置過夜，取上清液1mL于離心管經(jīng)10 000r/min離心10min，待測。

方法四：用方法二處理的樣品處理至“合并上清液”處，水浴揮發(fā)至近干，加水定容至5mL，加入亞鐵氰化鉀溶液和乙酸鋅溶液各0.5mL進行沉淀，定容至10mL,搖勻后放置過夜，取上清液1mL于離心管經(jīng)10 000r/min離心10min，待測。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用 SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果

表2 肉制品樣品四種前處理方法回收率比較

表3 肉制品前處理方法比較

注：“+”表示用，“-”表示未用。

表4 肉制品樣品的回收率及精密度

以市售某品牌的紅腸為樣品，準確稱取5.00g樣品。加入含量為0.50mg、1.00mg、2.00mg的標準溶液，按照固體類食品方法四方法進行樣品處理，測定。從表2和表3中可以看出：方法二、四的回收率高于方法一、三；從表4看出，肉制品中四種著色劑高、中、低三個濃度的平均回收率為90%～101%，相對標準偏差均小于5%。此方法顯示了良好的準確度和精密度。

3 討論

從蘇丹紅事件、三聚氰胺事件到果脯話梅中二氧化硫超標；從米粉中非法添加吊白塊超標到皮革奶，這些非法或是過量添加的食品添加劑讓國人聞之色變，難道食品添加劑就是百害而無一利嗎？世界各國對食品添加劑的定義都有所不同，世界衛(wèi)生組織(WHO)和聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)聯(lián)合食品法規(guī)委員會對食品添加劑定義為：是有意識地一般以少量添加于食品，以改善食品的外觀、風味、組織結(jié)構(gòu)或貯存性質(zhì)的非營養(yǎng)物質(zhì)。在我國對其定義為：指為改善食品品質(zhì)和色、香、味以及為防腐、保鮮和加工工藝的需要而加入食品中的人工合成或者天然物質(zhì)[2]。目前，我國批準使用的著色劑有21個品種，其中最常用的合成著色劑有胭脂紅、莧菜紅、檸檬黃、日落黃和亮藍等，使用范圍限于飲料、配制酒、糖果、糕點和青梅等，禁止用于肉類、魚類、水果及其制品(紅腸腸衣除外)[3]。肉類食物是人們餐桌上最為常見的食物之一，因此肉類食物的安全食用與人們的健康息息相關(guān)。

本研究方法二中甲醇氨水洗脫液的洗脫能力大于方法一中乙醇氨水洗脫液。由于運用了甲醇氨水洗脫液提高了被測物的溶解性，提取劑甲醇里加尿素是為了防止合成著色劑與蛋白質(zhì)結(jié)合，一般用氨水提取不能真正完全提取實際樣品中的合成著色劑，因為合成著色劑易于與蛋白質(zhì)結(jié)合，而尿素是一種蛋白質(zhì)變性劑，能破壞氫鍵，導致蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)松弛，使蛋白質(zhì)變性，蛋白質(zhì)和著色劑更容易分離,著色劑更容易與甲醇相結(jié)合，提高了提取率[4]，回收率也隨之提高。方法二優(yōu)于方法一。

研究顯示方法三、四基本相同，只是在沉淀劑的用量上有區(qū)別，方法四沉淀劑用量少，從回收率上看，明顯減少了對著色劑的包裹。方法四優(yōu)于方法三。方法四和方法二回收率相差不大，但方法四在樣品處理的時間上明顯優(yōu)于方法二。方法四在實驗過稱中減少了試劑對環(huán)境和檢測人員的危害，是較為優(yōu)化的檢測方法。

食品合成著色劑含量分析的特殊性和復雜性在于待測物的基質(zhì)復雜、干擾物質(zhì)多。由于樣品基質(zhì)和待測組分的不確定性，因此要求分析方法具有靈敏度高、選擇性或分離能力強和線性范圍寬等特點。所謂精密度是表示測定結(jié)果中隨機誤差的大小程度，指在一定條件下進行多次測定時所得各次檢測結(jié)果彼此之間的符合程度，一般用相對標準偏差(RSD,%)表示。本研究中以市售某品牌的紅腸為樣品，結(jié)果顯示四種著色劑高、中、低三個濃度的平均回收率為90%～101%，說明該方法顯示了較好的準確度和精密度。

近年來，隨著食品安全問題越來越被人們關(guān)注，能快速、便捷、準確檢測食品，是相關(guān)實驗室工作者的努力方向，本文通過對肉類食品合成著色劑檢測方法的探討及優(yōu)化，以期進一步運用到其它食品上，為其檢測提供參考依據(jù)。

[1] 郭順堂,謝焱.食品加工業(yè)[M].北京：化學工業(yè)出版社,2004:356-360.

[2] 第八屆全國人大常委.中華人民共和國食品衛(wèi)生法[S].北京：法律出版社,2009:4-15.

[3] 中華人民共和國衛(wèi)生部，中國國家標準化委員會.GB2760-2007 食品添加劑使用衛(wèi)生標準應用指南[S].北京：中國標準出版社,2007.

[4] 沈堅,潘旭,王全林,等.魚子醬中的合成色素反相高效液相色譜法同時測定[J].分析測試學報,2010,29(6):584-588.

(責任編輯：魏 曉)

2014-03-31

石驍昵(1977-)，女，新疆烏魯木齊市疾病預防控制中心主管檢驗技師，研究方向為衛(wèi)生理化檢驗。

R284

A

1673-2197(2014)15-0028-02