止脫生發(fā)丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李 梅

（山東省萊陽衛(wèi)生學(xué)校，山東 煙臺 264000）

止脫生發(fā)丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李 梅

（山東省萊陽衛(wèi)生學(xué)校，山東 煙臺 264000）

目的建立止脫生發(fā)丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法（TLC）對止脫生發(fā)丸中的當(dāng)歸、川芎、蒼術(shù)、延胡索、陳皮進(jìn)行定性鑒別；采用HPLC法測定橙皮苷的含量。結(jié)果當(dāng)歸、川芎、蒼術(shù)、延胡索、陳皮的TLC鑒別法專屬性強(qiáng)、簡便易行；HPLC含量測定，橙皮苷進(jìn)樣量在0.278～1.39 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系（r=0.99995，n=5），回收率為102.74%，RSD為0.80%。結(jié)論該法能有效地控制止脫生發(fā)丸的質(zhì)量。

止脫生發(fā)丸；薄層色譜鑒別；高效液相法；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

止脫生發(fā)丸是由中藥何首烏、當(dāng)歸、川芎、蒼術(shù)、延胡索、陳皮、茯苓等制成的丸劑，具有益氣健脾，化瘀通絡(luò)，養(yǎng)血生發(fā)的功效，用于脾虛濕盛，氣滯血瘀所致的脂溢性脫發(fā)及斑禿。為了有效控制制劑質(zhì)量，本研究建立了當(dāng)歸、川芎、蒼術(shù)、延胡索、陳皮五味藥的定性鑒別方法和橙皮苷的含量測定方法；所建立的方法能有效控制止脫生發(fā)丸的質(zhì)量，且含量測定方法準(zhǔn)確、簡便易行。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-2010A型高效液相色譜儀（日本島津公司）；METTLER TOLEDO AL204電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；KQ-500E型超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

薄層硅膠G（青島海洋化工廠）、聚酰胺薄膜（浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠）；當(dāng)歸對照藥材（120927-201014）、川芎對照藥材（120918-201110）、蒼術(shù)對照藥材（120932-200405）、延胡索乙素對照品（110726-201112）、橙皮苷對照品（110721-201014），均購自上海源葉生物科技有限公司；乙腈為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其他試劑為分析純。

表1 樣品中橙皮苷含量測定結(jié)果表批號

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別

2.1.1 當(dāng)歸、川芎的鑒別[1,2]：取本品5 g，研細(xì)，加乙醚30 mL，超聲處理15 min，濾過，濾渣備用，濾液用2%氫氧化鈉溶液振搖提取2次，每次20 mL，合并氫氧化鈉溶液，加鹽酸調(diào)pH 1～2，在酸水液中加入乙醚，然后進(jìn)行震蕩提取，共需要2次，每次劑量為20 mL，合并乙醚液之后進(jìn)行水浴蒸干處理，在殘渣中加入乙酸乙酯共1 mL，溶解之后就成為供試品溶液。另外取出當(dāng)歸對照藥材共1 g，使用與上述同樣方法進(jìn)行當(dāng)歸對照藥材溶液制備；川芎對照藥材1 g，同法制成川芎對照藥材溶液。再取缺當(dāng)歸、川芎樣品，使用同樣的方法進(jìn)行陰性對照溶液的制備。進(jìn)行薄層色譜法試驗，根據(jù)《中國藥典》（2010年版本）當(dāng)中相關(guān)記載進(jìn)行操作，將上面各種溶液進(jìn)行吸取，每次吸取劑量為3 μL，放置在同樣材料的硅膠G薄層板上面，展開劑主要為比例19∶1的正己烷—乙酸乙酯，將其展開之后取出，晾干并在紫外光燈下面檢測。在供試品色譜當(dāng)中和對照藥材色譜相適應(yīng)的位置上面有同樣顏色的熒光斑點顯示出現(xiàn)。

2.1.2 蒼術(shù)的鑒別[3]：取出蒼術(shù)對照藥材1 g，加入劑量為15 mL的正己烷并進(jìn)行超聲處理，時間為20 min，過濾然后將濾液揮發(fā)，使用1 mL的甲醇將殘渣溶解然后制備成為對照藥材溶液。取出缺蒼術(shù)樣品然后通過與上述方法制備對照藥材溶液。行薄層色譜法試驗，根據(jù)《中國藥典》（2010年版本）當(dāng)中相關(guān)記載進(jìn)行操作。將上述2.1.1所得到的供試品溶液與本項目得到的對照藥材溶液和陰性對照溶液各取其劑量5 μL并分別放置在同樣材料的硅膠G薄層板上面，展開劑選擇溫度為60～90 ℃的石油醚-比例為19∶1乙酸乙酯，展開后取出并晾干，噴上5%的二甲氨基苯甲醛還有10%的硫酸乙醇溶液，使用熱風(fēng)吹直到出現(xiàn)清晰的顯色斑點為止。

2.1.3 延胡索的鑒別[1,4]：取本品10 g，研細(xì)，加氨水5 mL，浸漬30 min，加乙醚50 mL，回流提取30 min，濾過，濾液用稀鹽酸振搖提取2次，每次15 mL，合并酸水液，加氨水調(diào)pH 9～10，使用氯仿振蕩提取，次數(shù)為3次，每次劑量為20 mL，與氯仿液合并然后使用水浴方法蒸干，使用1 mL甲醇將殘渣溶解然后作為供試品溶液。取出延胡索乙所對照品加入甲醇，最終制成每mL含有0.5 mg藥物的溶液，制備成為對照品溶液。取缺延胡索樣品，同法制備陰性對照溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷—氯仿—甲醇－三乙胺（10∶6∶1∶1滴）為展開劑，展開，取出，晾干，以碘蒸氣熏至斑點顯色清晰，在空氣中揮盡板上吸附的碘后，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點。

2.1.4 陳皮的鑒別[5]：取2.1.1項下濾渣，揮干殘余乙醚，加2%氫氧化鈉溶液30 mL，超聲處理30 min，離心，上清液加鹽酸調(diào)pH 1～2，酸水液加乙酸乙酯振搖提取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，置水浴上濃縮至約1 mL，取出適量的橙皮苷對照品，加入甲醇之后制造成為飽和溶液并將其作為對照品溶液。取出缺陳皮的陰性樣品使用上述方法取得陰性對照溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述兩種溶液各2 μL，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以氯仿-丙酮-甲醇（5∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，熱風(fēng)吹干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

2.2 橙皮苷的含量測定[6]

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil ODS-C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動相為乙腈—水（21：79）；檢測波長284 nm；流速設(shè)置為每分鐘1 mL，柱溫設(shè)置為30 ℃。橙皮苷峰計算在理論搭板數(shù)不得少于4000。

2.2.2 溶液的制備

①對照品溶液的制備：取橙皮苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含橙皮苷80 μg的溶液，即得。②供試品溶液的制備：取本品2袋，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇50 mL，稱定重量，超聲（功率250 W，頻率40 kHz）處理30 min，取出，放冷，稱定重量，用甲醇補(bǔ)足失重，濾過，取續(xù)濾液，以微孔濾膜（0.45 μm）濾過，即得。③陰性對照溶液：按處方比例不加陳皮藥材，按本品制備工藝制得缺陳皮樣品，按照供試品溶液制備方法制備陰性對照，即得。

2.2.3 方法學(xué)考察

①專屬性試驗：精密吸取上述橙皮苷對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 μL，按2.2.1項下色譜條件進(jìn)行測定。結(jié)果表明供試品橙皮苷峰與對照品具有相同保留時間，分離度佳；陰性對照溶液在橙皮苷峰處無吸收，空白無干擾。②線性關(guān)系的考察：精密稱取橙皮苷對照品13.9 mg置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。再分別精密量取2、4、6、8、10 mL至10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。分別精密進(jìn)樣各濃度溶液10 μL，按2.2.1項下色譜條件進(jìn)行測定，以進(jìn)樣量（μg）（X）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，所得橙皮苷線性方程為：Y=1.71×106X-6403.1 r=0.99995，橙皮苷進(jìn)樣量在0.278～1.39 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。③精密度試驗：取橙皮苷對照品溶液（83.4 μg/mL），注入液相色譜儀，連續(xù)測定5次，橙皮苷峰面積值RSD 0.27%，表明儀器精密度良好。④穩(wěn)定性試驗：取2.2.2.2項下的供試品溶液于配制后的0、2、4、6、8、10 h分別測定峰面積，橙皮苷峰面積RSD0.14%（n=6），表明橙皮苷供試品溶液在配制后10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。⑤重復(fù)性試驗：取同一批號樣品3袋，研細(xì)，取五份，每份0.5 g，精密稱定，按2.2.1項下色譜條件進(jìn)行含量測定，結(jié)果供試品溶液中橙皮苷平均含量為38.351毫克/袋，RSD為0.837%（n=5），表明該方法測定樣品含量重復(fù)性良好。⑥加樣回收試驗：取已知含量的止脫生發(fā)丸（橙皮苷含量為38.351 毫克/袋，相當(dāng)于7.670 mg/g）研細(xì)，取5份，每份0.25 g，精密稱定，分別精密加入橙皮苷對照品溶液（0.0408 mg/mL）各50 mL，制備樣品并測定回收率，結(jié)果平均回收率為102.74%，RSD為0.80%，表明本測定方法可行。⑦樣品含量測定：取10批止脫生發(fā)丸，按本文供試品制備方法及色譜條件進(jìn)行測定，每批樣品平行測定2份，求得十批止脫生發(fā)丸中橙皮苷的含量。

3 結(jié) 果

見表1。

4 討 論

4.1 當(dāng)歸、川芎二味藥共有成分較多，故采用同一條件對二味藥進(jìn)行鑒別，參考文獻(xiàn)，對其中的內(nèi)酯類成分進(jìn)行鑒別。

4.2 參考藥典對本品中的延胡索進(jìn)行薄層鑒別研究，樣品采用氨性乙醚回流提取，由于處方中藥味較多，有色帶干擾，斑點不夠明顯；由于延胡索乙素為生物堿類成分，采用酸堿處理法對樣品進(jìn)行精制，陽性結(jié)果明顯。

4.3 本品為一多種中藥配制而成的中藥復(fù)方制劑，成分較復(fù)雜，方中陳皮為君藥，采用高效液相色譜法測定陳皮中的橙皮苷的含量，結(jié)果表明方法簡單、靈敏度高，重現(xiàn)性好，可用于本制劑的質(zhì)量控制。

[1] 張寶秀,史永平,張朔生.乙肝口服液中三七、赤芍、延胡索、當(dāng)歸的薄層鑒別研究[J].山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2007,8(4):50-51.

[2] 孔菲,丁瑩,梁雪,等.川芎、當(dāng)歸的薄層層析鑒別[J].中醫(yī)藥學(xué)報, 2013,41(2):56-57.

[3] 國家藥典委員會.中國藥典(一部)[M].2010版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:50.

[4] 徐程,田原,劉桂芳.薄層色譜法對二黃散中大黃延胡索定性的研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,2006,33(3):357-358.

[5] 張應(yīng)輝,蔣帆,吳雪.平安丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國藥房,2011,22 (35):3323-3325.

[6] 徐韌柳,王永欣.健胃消食片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中成藥,2006,28 (4):506-509.

R285

B

1671-8194（2014）17-0085-03