參苓白術(shù)散對乙酸誘導(dǎo)大鼠胃潰瘍的保護(hù)作用

陳宇寧 曹輝瓊 張 毅

（惠州市第三人民醫(yī)院消化內(nèi)科，廣東 惠州 516002）

參苓白術(shù)散對乙酸誘導(dǎo)大鼠胃潰瘍的保護(hù)作用

陳宇寧 曹輝瓊 張 毅

（惠州市第三人民醫(yī)院消化內(nèi)科，廣東 惠州 516002）

目的探討參苓白術(shù)散對乙酸誘導(dǎo)大鼠胃潰瘍的保護(hù)作用。方法雄性SD大鼠40只。隨機(jī)分別為空白對照組、模型組、參苓白術(shù)散組、奧美拉唑組。100%冰醋酸誘導(dǎo)胃潰瘍，參苓白術(shù)散連續(xù)灌胃10 d。病理切片觀察參苓白術(shù)散對乙酸誘導(dǎo)大鼠胃潰瘍的病理改變。以潰瘍面積來評估胃黏膜損傷程度，Elisa檢測胃潰瘍組織勻漿液TNF-α的含量。結(jié)果參苓白術(shù)湯組減少潰瘍面積，修復(fù)胃組織病理損傷。Elisa結(jié)果顯示，參苓白術(shù)湯減少胃潰瘍組織勻漿液TNF-α的含量，與模型組比較有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），與陽性對照奧美拉唑結(jié)果相當(dāng)（P＞0.05）。結(jié)論參苓白術(shù)散能修復(fù)潰瘍損傷，減少TNF-α含量，對乙酸誘導(dǎo)胃潰瘍大鼠有一定的保護(hù)作用。

參苓白術(shù)；胃潰瘍；奧美拉唑；TNF-α

1 材料與方法

1.1 材料：雄性SD大鼠40只，體質(zhì)量200～220 g，隨機(jī)分成4組，分別為空白對照組（n=10）、潰瘍模型組（n=10）、參苓白術(shù)散組（n=10）和奧美拉唑組（n=10），由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 主要試驗(yàn)藥物：參苓白術(shù)散由本院中藥房提供，水煎濃縮，200目濾膜過濾除渣。奧美拉唑腸溶膠囊（奧克）：規(guī)格20 mg（1粒），常州四藥制藥有限公司生產(chǎn)，批號200911224；總蛋白提取及定量試劑盒購于碧云天試劑有限公司，TNF-α的Elisa試劑盒購于武漢博士德生物技術(shù)有限公司。蘇木素、伊紅、PBS均購于中杉金橋生物試劑有限公司。多聚甲醛、石蠟、二甲苯、酒精購于廣州東征試劑有限公司。

1.3 主要儀器：德國萊卡石蠟切片機(jī)；日本尼康Eoipse Ti-s熒光倒置顯微鏡及分析軟件；美國Thermo全波段酶標(biāo)儀。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 參照經(jīng)典冰醋酸造模方法[2]。隨機(jī)將40只SD大鼠隨機(jī)分成4組，禁食不禁水24 h后，2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，開腹暴露胃，在胃前壁竇體交界同一部位（避開血管），用浸有100%冰醋酸、直徑為5 mm的圓形濾紙接觸1 min。然后還納胃體逐層縫合切口。

1.4.2 分組與喂藥：雄性SD大鼠40只，稱重，標(biāo)記，隨機(jī)分為4組，造模1 d后開始灌胃參苓白術(shù)散3.5g/（kg·d），奧美拉唑組：3.5 mg/（kg·d）（按成年人等效劑量與大鼠換算的給藥劑量），空白對照及模型組給予等體積0.9%的生理鹽水，每天1次，連續(xù)10 d。處死前1 d禁食不禁水。麻醉大鼠后，剖腹，結(jié)扎賁門，摘取全胃，沿胃大彎剪一小口，傾出胃內(nèi)容物于離心管中。將收集的胃液于低溫離心機(jī)1500 r/min離心10 min，留取上清胃液，-80 ℃凍存。把胃潰瘍組織剪下來分成兩份，一份放置10%的甲醛溶液固定。另一份放置-80 ℃凍存。

1.5 觀察內(nèi)容及方法

1.5.1 計(jì)算創(chuàng)面愈合面積：采用格子法測定胃潰瘍面積，即用透明方格紙描繪出潰瘍損傷面積，剪下描繪的格子，以格子計(jì)算潰瘍面積。

1.5.2 組織學(xué)檢查：切取潰瘍灶或潰瘍瘢痕組織，用10%甲醛液固定，按照常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片4 μm厚度，進(jìn)行蘇木精-伊紅染色，每只大鼠組織制作2張切片，隨機(jī)抽取1張?jiān)诟弑讹@微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野觀察炎性細(xì)胞浸潤、黏膜層厚度、纖維排列。應(yīng)用Nikon Eoipse Ti-s倒置顯微鏡分析圖像。

1.5.3 Elisa檢測TNF-α含量：稱取胃潰瘍組織50 mg，生理鹽水勻漿，制作10%的勻漿液，分裝成3份，凍存于-80 ℃；BCA法蛋白定量，具體按說明書操作；TNF-α檢測，滴加稀釋樣品50 μL，37 ℃孵育1.5 h，PBS洗板，3次，每次5 min，滴加HRP二抗孵育30 min，洗板，加顯色液A，B孵育15 min，加終止液，酶標(biāo)儀A450檢測并分析結(jié)果。

2 結(jié) 果

2.1 空白對照組術(shù)后飲食、飲水活動(dòng)均無異常，模型組術(shù)后出現(xiàn)食欲下降、活動(dòng)減少、四肢無力、倦臥嗜睡、被毛蓬松。參苓白術(shù)散組對飲食、飲水、活動(dòng)度均有改善。

2.2 參苓白術(shù)散對乙酸誘導(dǎo)胃潰瘍大鼠潰瘍面積的影響?？瞻讓φ战M未見潰瘍，模型組可見潰瘍形成，并且面積增大，潰瘍有肉芽組織形成。與模型組比較，給藥各組大鼠潰瘍較為表淺，面積較小，與模型組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），見表1。

表1 參苓白術(shù)散對胃潰瘍面積的影響（

表1 參苓白術(shù)散對胃潰瘍面積的影響（

與模型比較 *P＜0.05

組別 n 潰瘍面積（mm2）空白對照組 10 0模型組 10 8±2.1參苓白術(shù)散組 10 4.6±1.3*奧美拉唑組 10 4.2±1.5*

2.3 參苓白術(shù)散對實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍大鼠潰瘍組織病理學(xué)的影響。正常對照組胃組織結(jié)構(gòu)正常，模型組可見潰瘍形成，并見大量炎性細(xì)胞浸潤，潰瘍床有肉芽組織形成，纖維排列紊亂；與模型組比較，給藥各組大鼠潰瘍較為表淺，黏膜層較厚，炎性細(xì)胞浸潤少，纖維排列較整齊，與奧美拉唑組相當(dāng)（圖1）。

圖1 為HE染色的病理結(jié)果（200X）（A：空白對照組；B：模型組；C：參苓白術(shù)散組；D：奧美拉唑組）

2.4 如圖2顯示，參苓白術(shù)散顯著減低TNF-α的含量，奧美拉唑組與參苓白術(shù)散無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）

3 討 論

消化性潰瘍（peptic ulcer，PU）是指消化道內(nèi)受胃酸、胃液和胃蛋白酶浸浴范圍的黏膜層、黏膜下層甚至肌層和漿膜層在多種因素影響下發(fā)生的局限性組織缺損性疾病[3，4]?，F(xiàn)在研究認(rèn)為其發(fā)生機(jī)制主要是由于“防御因子” 受損或（和）“攻擊因子”作用增強(qiáng)所致。其中炎性因子屬于損害胃黏膜的重要“攻擊因子。TNF-α又名惡液質(zhì)素，由單核、巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，是可成組廣泛損傷的促炎性因子TNF-α是引起潰瘍形成的烈性介質(zhì)，在胃黏膜損傷過程中發(fā)揮作用。TNF-α是重要的致炎因子，可促進(jìn)其他細(xì)胞因子包括IL-1、IL-2、IL-8等的繼發(fā)性釋放，并引起中性粒細(xì)胞活化，急性期蛋白生成，影響?zhàn)つぱ豕┙o，加劇損傷，最終形成潰瘍[5，6]。結(jié)果顯示參苓白術(shù)散減少TNF-α的表達(dá)，與胃潰瘍常用藥奧美拉唑的作用相當(dāng)，而且可以減少服用奧美拉唑帶來的副作用，是臨床中西醫(yī)結(jié)合治療胃潰瘍的良方。

中醫(yī)認(rèn)為，消化性潰瘍多因飲食不節(jié)，七情內(nèi)傷，導(dǎo)致脾胃受損，肝脾不和，氣滯血瘀。故選用健脾益氣、和胃除滿、清熱解毒的中藥組方，參苓白術(shù)散由人參、白術(shù)、茯苓、灸甘草、山藥、扁豆、蓮子、薏苡仁、砂仁、陳皮、桔梗組成，具有健脾益氣、滲濕止瀉之功能。方中人參、茯苓、白術(shù)、灸甘草、扁豆、薏苡仁，甘溫益脾陽，蓮子、山藥之甘平滋脾陰，是以扶陽多于護(hù)陰，用以補(bǔ)脾元升清氣。并以陳皮、砂仁、桔梗調(diào)理脾胃。重在補(bǔ)而輔以調(diào)，配伍合度，補(bǔ)通得當(dāng)，有調(diào)中養(yǎng)胃之益[7]。臨床應(yīng)用治療消化性潰瘍病療效顯著。結(jié)果顯示參苓白術(shù)散能夠增強(qiáng)乙酸誘導(dǎo)胃潰瘍大鼠的飲食及活動(dòng)狀態(tài)，減少炎性細(xì)胞的滲出，減低TNF-α的表達(dá)。

綜上所述，參苓白術(shù)散能改善乙酸誘導(dǎo)的大鼠胃潰瘍病理修復(fù)，減少潰瘍面積，增加動(dòng)物的飲食，增強(qiáng)動(dòng)物的活動(dòng)度，減少TNF-α表達(dá)，減少胃黏膜損傷的“攻擊因子”，保護(hù)胃黏膜損傷，最終達(dá)到治療胃潰瘍的作用。

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R573.1

B

1671-8194（2014）16-0092-02參苓白術(shù)散出自《太平惠民和劑局方》，是宋代著名復(fù)方，由人參、白術(shù)、茯苓、灸甘草、山藥、扁豆、蓮子、薏苡仁、砂仁、陳皮、桔梗組成，具有健脾益氣、和胃除滿、滲濕止瀉的功用，主治脾胃虛弱、納呆腹脹、便溏脈虛等癥[1]。臨床應(yīng)用治療消化性潰瘍病療效顯著。但對它的作用機(jī)制尚不清楚?，F(xiàn)在通過對病理的修復(fù)，抗炎的療效觀察參苓白術(shù)散對大鼠胃潰瘍的作用，旨在為臨床應(yīng)用參苓白術(shù)散治療胃潰瘍疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。