550例男性不育癥患者的血清抑制素B水平分析*

楊 昊 陳 斌馮 坦 張 濤 金 炎胡 凱 黃燕平 王鴻祥 韓銀發(fā) 王益鑫 黃翼然

上海交通大學(xué)附屬仁濟(jì)醫(yī)院（上海 200001）

550例男性不育癥患者的血清抑制素B水平分析*

楊 昊 陳 斌**馮 坦 張 濤 金 炎胡 凱 黃燕平 王鴻祥 韓銀發(fā) 王益鑫 黃翼然

上海交通大學(xué)附屬仁濟(jì)醫(yī)院（上海 200001）

抑制素B（Inhibin B）在男性體內(nèi)主要由睪丸支持細(xì)胞（Sertoli細(xì)胞）分泌，是一種糖蛋白激素。由于血清抑制素B的水平能夠較準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)男性睪丸的生精功能，如今它已逐漸有趨勢(shì)成為男科臨床檢測(cè)的一個(gè)重要指標(biāo)[1]。本文通過(guò)檢測(cè)550例男性的精液參數(shù)以及其血清抑制素B含量，探討男性血清抑制素B水平與精子濃度、總數(shù)以及活力之間的關(guān)系，并比較分析其在梗阻性無(wú)精子證（OA）與非梗阻性無(wú)精子癥（NOA）患者中的水平。

對(duì)象與方法

一、研究對(duì)象

隨機(jī)選擇2011年4月至2011年11月于上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院泌尿男科門診就診男性不育患者550例，年齡22～58歲，平均（31.67±0.46）歲?；楹笮陨钫＃幢茉?年以上不育。其中無(wú)精子癥患者267例、少精子癥患者20例、弱精子癥患者49例、少弱精子癥患者167例，精液參數(shù)正常47例。

二、標(biāo)本收集

禁欲2～7d，用消毒液清洗雙手、陰莖和尿道外口后，手淫法留取精液于干燥無(wú)菌的廣口取精杯內(nèi)，置于36℃恒溫箱內(nèi)，待完全液化后，進(jìn)行檢測(cè)。同時(shí)在上午8∶00～10∶30間，使用促凝管收集患者外周靜脈血4ml，經(jīng)3000r/min，10min離心后吸取上清液，儲(chǔ)存于-20℃冰箱內(nèi)，一周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

三、精液分析

待精液完全液化后，按照WHO第五版推薦的方法（稱重法）檢測(cè)精液量。使用中科恒業(yè)科技有限公司的計(jì)算機(jī)輔助精液分析儀（CASA）進(jìn)行檢測(cè)分析以獲得精子濃度、活力（a級(jí)+b級(jí)精子，即WHO第五版的前向運(yùn)動(dòng)精子數(shù)的百分比）。無(wú)精子癥患者標(biāo)本按照WHO第五版推薦的方法200個(gè)高倍視野下在離心沉渣中找精子，若3次檢測(cè)都未找到精子則判定此份標(biāo)本“無(wú)精子”。

四、血清抑制素B檢測(cè)

使用96T抑制素B檢測(cè)試劑盒（美國(guó)DSL公司，DSL-84100）進(jìn)行血清抑制素B的檢測(cè)。取出實(shí)驗(yàn)所需板條，并記錄各孔位置。在對(duì)應(yīng)的孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品及待測(cè)樣本各50μl，加入相應(yīng)緩沖液，封板，以300～400rpm震蕩，室溫過(guò)夜。次日按步驟分別依次加入50μl抗體-生物素結(jié)合物，以500～700rpm震蕩，室溫下孵育1.5h。之后加入50μl鏈霉和辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物，以500～700rpm震蕩，室溫下孵育20min。在每孔中加入100μlTMB，以500～700rpm震蕩，室溫下避光孵育15～30min。最后，加入100μl終止液。30min內(nèi)在450nm處讀取吸光度。由于該試劑檢測(cè)的靈敏度為7pg/mL。因此將檢測(cè)結(jié)果小于7pg/mL的標(biāo)本視作無(wú)法檢測(cè)出，結(jié)果視為0。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，采用t檢驗(yàn)，結(jié)果用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，相關(guān)系數(shù)r表示相關(guān)性。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、血清抑制素B水平與精液參數(shù)的相關(guān)性分析

血清抑制素B水平與精子濃度呈顯著正相關(guān)（r=0.242，P＜0.01）（圖1）；血清抑制素B水平與精子總數(shù)（精子濃度與精液體積的乘積）呈顯著正相關(guān)（r=0.132，P＜0.01）（圖2）；血清抑制素B水平與精子活力呈顯著正相關(guān)（r=0.272，P＜0.01）（圖3）。

圖1 血清抑制素B水平與精子濃度相關(guān)性分析

圖2 血清抑制素B水平與精子總數(shù)相關(guān)性分析

圖3 血清抑制素B水平與精子活力相關(guān)性分析

二、OA與NOA患者的血清抑制素B水平比較分析

我們將267例無(wú)精子癥患者根據(jù)診斷結(jié)果分為OA組共147例（包括生殖道感染97例、先天性雙側(cè)輸精管缺如（CBAVD）47例、輸精管結(jié)扎術(shù)后再通梗阻2例、射精管囊腫1例）NOA組共120例（包括特發(fā)性無(wú)精子癥107例、克氏綜合征5例、低促性腺激素性性腺功能減退6例、AZF基因缺失癥1例、隱睪癥1例），兩組的血清抑制素B水平分別為（98.43±6.16）pg/mL和（32.18±4.09）pg/mL，兩組相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

討 論

在男科學(xué)領(lǐng)域里，抑制素B是性激素的重要組成成員之一。它是由α和βB兩個(gè)亞基構(gòu)成且分子量約為26～30K的糖蛋白激素[2]。許多對(duì)抑制素的亞基研究表明，它們之間有著同源性并且都是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（transforming growth factorβ, TGF-β）家族的成員[3]。

Jorgensen等[4]研究發(fā)現(xiàn)，男性血清的抑制素B水平與其精液的精子濃度成較顯著的正相關(guān)。我們的研究顯示男性血清抑制素B水平與精子濃度、精子總數(shù)以及精子活力之間都存在正相關(guān)。但我們同時(shí)需要關(guān)注的是最終生成的精子其各項(xiàng)參數(shù)不僅取決于睪丸功能的好壞，還取決于附睪、輸精管等附屬性腺的功能狀態(tài)，而抑制素B多數(shù)由睪丸內(nèi)Sertoli細(xì)胞分泌，故不能非常全面地評(píng)價(jià)這些附屬性腺的功能，比如由于生殖道感染而引起的精子濃度或活力下降時(shí)其血清抑制素B水平可正常。

近年有研究表明非梗阻性無(wú)精子癥患者的血清抑制素B水平明顯低于正常對(duì)照組以及梗阻性無(wú)精子癥患者的血清水平[5,6]，這里我們也將267例無(wú)精子癥患者分為梗阻性無(wú)精子癥組與非梗阻性無(wú)精子癥組，并對(duì)兩組血清抑制素B水平進(jìn)行比較分析進(jìn)一步證實(shí)了這一理論。故血清抑制素B可能為判斷無(wú)精子癥患者有無(wú)梗阻情況提供了重要的參考，甚至可以作為一種預(yù)測(cè)附睪或睪丸穿刺是否能成功抽取精子的血清指標(biāo)。同時(shí)，國(guó)外有學(xué)者認(rèn)為血清抑制素B水平較高的非梗阻性無(wú)精子癥患者更容易成功取得精子[7]，輔助生殖領(lǐng)域?qū)τ趶姆枪Ｗ栊詿o(wú)精子癥患者睪丸獲取的精子結(jié)合ICSI可以有效治療非梗阻性無(wú)精子癥不育[8]，故血清抑制素B水平同樣可能對(duì)于非梗阻性無(wú)精子癥患者能否成功獲得子代有著重要的參考價(jià)值與預(yù)測(cè)作用。但是，近年也有研究表明血清抑制素B水平并不能作為非梗阻性無(wú)精子癥患者成功取得精子的預(yù)測(cè)指標(biāo)[9]，所以血清抑制素B到底能否成功預(yù)測(cè)非梗阻性無(wú)精子癥患者獲取精子的結(jié)果，有待進(jìn)一步更深入的研究。

國(guó)內(nèi)有文獻(xiàn)報(bào)道，通過(guò)二聚作用形成抑制素B的兩個(gè)亞基很有可能是由Sertoli細(xì)胞與生精細(xì)胞共同參與分泌[10]。這與最初的研究認(rèn)為抑制素B是由睪丸組織內(nèi)的Sertoli細(xì)胞分泌[11]存在分歧，因此對(duì)于抑制素B的來(lái)源仍然不是非常的清楚。雖然認(rèn)為抑制素B的主要來(lái)源還是Sertoli細(xì)胞[12]，其能夠較的反映Sertoli細(xì)胞的功能，但我們認(rèn)為這并不一定代表精子產(chǎn)生的數(shù)量與之存在絕對(duì)的正比關(guān)系，即在精子濃度及活力都較為良好的情況下，抑制素B完全有可能比較低。我們統(tǒng)計(jì)中就發(fā)現(xiàn)有部分患者精子情況并不是非常差，但其血清抑制素B的水平卻非常低，甚至有3例出現(xiàn)了有精子但是血清抑制素B卻無(wú)法檢測(cè)出的情況，分析原因可能在于作為為抑制素B提供其合成所需的亞基的Sertoli細(xì)胞受到一定程度的損害，但這種損害并沒(méi)有真正的影響到精子的生成。我們還發(fā)現(xiàn)血清抑制素B水平較低的精液標(biāo)本其精子頭部畸形率往往較高，國(guó)外有文獻(xiàn)顯示精子頭部的畸形率的高低與睪丸功能有著密切的聯(lián)系[13]，所以這也從另一個(gè)方面表明血清抑制素B能夠較好的反應(yīng)睪丸的功能狀態(tài)。

總之，我們對(duì)于550例不育患者的血清抑制素B與精液分析參數(shù)進(jìn)行比較分析，得出男性血清抑制素B水平與精子濃度、精子總數(shù)以及精子活力之間存在正相關(guān)。并且比較了OA與NOA患者的血清抑制素B水平，證實(shí)血清抑制素B水平可能是一個(gè)能較好鑒別梗阻與非梗阻無(wú)精子癥的血清指標(biāo)。但是，直到目前為止抑制素B的具體來(lái)源以及生理作用機(jī)制還不是非常的明確，有待進(jìn)一步更深入的研究。

抑制素B; 不育,男性; 精子計(jì)數(shù); 精子能動(dòng)性

1 Stewart J, Turner KJ. Inhibin B as a potential biomarker of testicular toxicity. Cancer Biomarkers 2005; 1(1)∶75-91

2 Robertson DM, Stephenson T, Mclachlan RI, et al. Characterization of plasma inhibin forms in fertile and infertile men. Hum Reprod 2003; 18(5)∶ 1047-1054

3 Chang H, Brown CW, Matzuk MM, et al. Genetic analysis of the mammalian transforming growth factor-beta superfamily. Endocr Rev 2002; 23(6)∶ 787-823

4 Jorgensen N, Liu F, Andersson AM, et al. Serum inhibin-b in fertile men is strongly correlated with low but not high sperm counts∶ a coordinated study of 1,797 European and US men. Fertil Steril 2010; 94(6)∶ 2128-2134

5 Muttukrishna S, Yussoff H, Naidu M, et al. Serum anti-Müllerian hormone and inhibin B in disorders of spermatogenesis. Fertil Steril 2007; 88(2)∶ 516-518

6 向代軍, 高文, 穆莎, 等. 血清抑制素B、卵泡刺激素和精漿中性α-葡萄糖苷酶在無(wú)精子癥中的診斷意義. 實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志 2011;27(11)∶2055-2057

7 Ziaee SA, Ezzatnegad M, Nowroozi M, et al. Prediction of successful sperm retrieval in patients with nonobstructive azoospermia. Urol J 2006; 3(2)∶ 92-96

8 黃學(xué)鋒, 鄭菊芬, 吳秀玲, 等. 睪丸精子獲取和單精子卵胞漿內(nèi)注射術(shù)治療非梗阻性無(wú)精子癥不育. 中華泌尿外科雜志 2002; 23(11)∶ 647-650

9 Mitchell V, Boitrelle F, Pigny P, et al. Seminal plasma levels of anti-Müllerian hormone and inhibin B are not predictive of testicular sperm retrieval in nonobstructive azoospermia∶ a study of 139 men. Fertil Steril 2010; 94(6)∶2147-2150

10 董志英, 于輝, 修賀明, 等. 抑制素BβB亞單位在不同病理分型的無(wú)精子癥患者睪丸組織中的表達(dá). 中華男科學(xué)雜志 2008; 14(1)∶ 20-22

11 Maddocks S, Sharpe RM. The route of secretion of inhibin from the rat testis. J Endocrinol 1989; 120(1)∶R5-R8

12 Kinniburgh D, Anderson RA, et al. Differential patterns of inhibin secretion in response to gonadotrophin stimulation in normal men. Int J Androl 2001; 24(2)∶95-101

13 Amann RP. Tests to measure the quality of spermatozoa at spermiation. Asian Journal of Andrology 2010; 12(1)∶71-78

（2013-08-12收稿）

R 698.2

資助∶ 國(guó)家自然科學(xué)基金（編號(hào)81270741）

**通訊作者, E-mail∶ dr_binchen@126.com

doi∶10.3969/j.issn.1008-0848.2014.02.017