抵擋湯對(duì)2型糖尿病大鼠胰島素抵抗影響的實(shí)驗(yàn)研究*

常 柏，李巧芬，李春深，李云平

（1.天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院，天津 300070；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193；3.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津 300193）

抵擋湯對(duì)2型糖尿病大鼠胰島素抵抗影響的實(shí)驗(yàn)研究*

常 柏1，李巧芬2，李春深2，李云平3

（1.天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院，天津 300070；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193；3.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津 300193）

摘要：[目的]探討抵擋湯對(duì)糖尿病大鼠大血管病變的作用及其機(jī)制。[方法]將自發(fā)2型糖尿病大鼠模型隨機(jī)分為模型組、抵擋湯組、羅格列酮組，同系非糖尿病大鼠為空白對(duì)照組。抵擋湯組與羅格列酮組大鼠分別給以抵擋湯與羅格列酮灌胃，模型組與空白組均以等量蒸餾水灌胃。實(shí)驗(yàn)周期為12周，對(duì)大鼠進(jìn)行葡萄糖曲線下面積，血脂、胰島素抵抗指數(shù)、高胰島素正糖鉗夾實(shí)驗(yàn)與骨骼肌腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）活性定量檢測(cè)。[結(jié)果]與模型組比較，抵擋湯組和羅格列酮組胰島素抵抗指數(shù)不同程度下調(diào)（P＜0.05）。與模型組比較，羅格列酮組甘油三酯及游離脂肪酸下調(diào)，抵擋湯組游離脂肪酸較模型組下調(diào)（P＜0.05）。與模型組比較，羅格列酮組AMPK酶活性上升（P＜0.05）。[結(jié)論]抵擋湯對(duì)糖尿病大鼠的血糖、血脂無明顯影響，但可明顯影響胰島素抵抗指數(shù)與正糖鉗夾實(shí)驗(yàn)葡萄糖輸注率，提示其對(duì)胰島素抵抗有較好的干預(yù)作用。

關(guān)鍵詞：抵擋湯；胰島素抵抗；糖尿病；胰島素敏感指數(shù)

目前，以2型糖尿病為主體的糖尿病發(fā)病率急劇攀升，中國1976年糖尿病發(fā)病率為1.0%，1996年約為3.2%，而新近研究進(jìn)一步表明，中國20歲以上的人群中總體糖尿病患病率為9.7%，由此推算出全國糖尿病總患病人數(shù)約9 200萬[1]，成為全球糖尿病患者增長(zhǎng)最快的國家之一，糖尿病及其并發(fā)癥的防治刻不容緩。抵擋湯源自中醫(yī)傳統(tǒng)經(jīng)典著作《傷寒雜病論》，由大黃、桃仁、水蛭、虻蟲組成，以活血通絡(luò)逐瘀見長(zhǎng)，前期部分臨床及基礎(chǔ)研究顯示，抵擋湯對(duì)糖尿病血管并發(fā)癥有較好的干預(yù)作用[2-3]。為進(jìn)一步觀察抵擋湯對(duì)糖尿病大鼠作用及其機(jī)制，筆者開展了如下研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 研究引進(jìn)日本德島研究所自發(fā)2型糖尿病大鼠模型OLETF以及同系非糖尿病對(duì)照LETO為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均為雄性，其中OLETF大鼠30只，LETO大鼠10只，引進(jìn)時(shí)為4周齡，再經(jīng)海關(guān)檢疫監(jiān)管4周后進(jìn)入SPF級(jí)動(dòng)物房飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)大鼠給以標(biāo)準(zhǔn)飼料，每日12 h光照循環(huán)，自由進(jìn)水。

1.2 動(dòng)物分組及給藥 實(shí)驗(yàn)大鼠定期進(jìn)行口服葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)（OGTT）[4-5]。至30周時(shí)，采用隨機(jī)數(shù)字表法將成模大鼠隨機(jī)分為模型組、抵擋湯組、羅格列酮組，LETO為空白對(duì)照組。抵擋湯藥物組成為桃仁10 g，水蛭10 g，虻蟲10 g，大黃6 g，生藥購于天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，水煎濃縮，每日3.2g/kg灌胃。羅格列酮組以羅格列酮蒸餾水稀釋，給藥劑量為每日3 mg/kg。模型組與空白組每日均以等量蒸餾水灌胃，實(shí)驗(yàn)周期為12周。

1.3 生化指標(biāo)與檢測(cè)

1.3.1 OGTT 大鼠每4周定期行OGTT，并以之為基礎(chǔ)計(jì)算糖耐量實(shí)驗(yàn)葡萄糖曲線下面積（AUC）[5]。

1.3.2 血脂檢測(cè) 灌胃結(jié)束后，大鼠隔夜禁食12 h，次晨取血，甘油三酯（TG）、膽固醇（CHOL）及游離脂肪酸（FFA）。

1.3.3 胰島素抵抗指數(shù)（ISI）計(jì)算 ISI用穩(wěn)態(tài)模式評(píng)估法公式計(jì)算。

1.3.4 高胰島素—正糖鉗夾實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)隔夜禁食不禁水12 h，戊巴比妥鈉麻醉，行頸部動(dòng)靜脈插管，先后靜脈輸注短效胰島素及20%葡萄糖，調(diào)整葡萄糖輸注速度（即葡萄糖輸注率，GIR），使血糖恢復(fù)到基礎(chǔ)值±0.5 mmol/L的范圍內(nèi)，達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)，將鉗夾處于穩(wěn)態(tài)的3個(gè)GIR值求平均值。

1.3.5 骨骼肌腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）活性檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，解剖動(dòng)物，取出實(shí)驗(yàn)動(dòng)物新鮮腓腸肌組織，分別依次加入GENMED清理液、GENMED裂解液、GENMED緩沖液、GENMED酶促液及GENMED陰性液處理，以分光光度儀檢測(cè)，并依照公式計(jì)算骨骼肌AMPK活性定量指數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，所有計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，正態(tài)分布計(jì)量資料的組間比較采用單因素方差分析，偏態(tài)分布資料的組間比較采用秩和檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 OGTT中的AUC檢測(cè)結(jié)果比較 模型組較LETO對(duì)照組在治療前后的口服葡萄糖耐量曲線下面積明顯上升（P＜0.05）。隨著實(shí)驗(yàn)周期延長(zhǎng)，模型組AUC持續(xù)上升，羅格列酮組AUC下降，抵擋湯組與模型組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。見表1。

表1 OGTT各時(shí)點(diǎn)AUC變化（x±s）Tab.1 Changes of OGTT AUC at each time point（x±s）

2.2 各組血脂檢測(cè)結(jié)果比較 模型組的血清TG水平較空白組顯著增高，CHOL、FFA水平明顯增高。羅格列酮組TG及FFA較模型組下調(diào)，抵擋湯組FFA較模型組下調(diào)，見表2。

表2 各組血脂情況比較（x±s）Tab.2 Comparison of blood fat in each group（x±s）mmol/L

2.3 ISI的檢測(cè)結(jié)果比較 模型組ISI較空白組顯著上升，兩治療組不同程度下調(diào)，與模型組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表3。

2.4 高胰島素—正糖鉗夾實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較 模型組OLETF大鼠高胰島素—正糖鉗夾穩(wěn)態(tài)GIR與正常LETO對(duì)照組比較顯著下調(diào)（P＜0.05），抵擋湯組、羅格列酮組GIR較模型組均不同程度下調(diào)，見表4。

表3 各組ISI比較（x±s）Tab.3 Comparison of insulin resistance index in each group（x±s）

表4 各組高胰島素-正葡萄糖鉗夾實(shí)驗(yàn)結(jié)果（x±s）Tab.4 Results of hyperinsulin-euglycemic clamp test in each group（x±s）

2.5 骨骼肌AMPK活性比較 與LETO大鼠相比較，模型組AMPK酶活性顯著降低，羅格列酮較模型組上升，抵擋湯組雖較模型組升高，但無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表5。

表5 各組大鼠骨骼肌AMPK活性比較（x±s）Tab.5 Comparison of AMPK activity in the skeletal muscle of the rats in each group（x±s）

3 小結(jié)

胰島素抵抗（IR）是指機(jī)體脂肪、骨骼肌和肝臟等靶器官對(duì)正常濃度的胰島素產(chǎn)敏感性下降的現(xiàn)象，目前認(rèn)為IR是2型糖尿病重要致病機(jī)制[6]，并作為是2型糖尿病、肥胖癥、高血壓等系列疾病的共同致病機(jī)制有關(guān)，而受到相關(guān)研究領(lǐng)域的高度重視[7]。Matthews最早提出以穩(wěn)態(tài)模型法來測(cè)定IR，并于1998年進(jìn)一步改進(jìn)為HOMA2，成為較好的IR評(píng)價(jià)手段[8]。正常血糖高胰島素鉗夾技術(shù)簡(jiǎn)稱正糖鉗技術(shù)，盡管該技術(shù)方法復(fù)雜，代價(jià)昂貴，但仍具有其他檢測(cè)方法無法比擬的優(yōu)勢(shì)，是國際公認(rèn)的檢測(cè)胰島素敏感性的“金指標(biāo)”[9]。本研究以2型糖尿病模型動(dòng)物OLETF為模型，以穩(wěn)態(tài)模型法以及正糖鉗夾技術(shù)進(jìn)行研究，結(jié)果顯示抵擋湯對(duì)糖尿病大鼠的血糖、血脂無明顯影響，但可明顯影響ISI與正糖鉗夾實(shí)驗(yàn)GIR，顯示對(duì)IR有較好的干預(yù)作用，這是否與其潛在的對(duì)AMPK干預(yù)作用有關(guān)尚待進(jìn)一步深入研究。

抵擋湯為醫(yī)圣張仲景的經(jīng)方，由桃仁、水蛭、虻蟲、大黃組成，具有活血通絡(luò)、逐瘀攻下功效，近年來被廣泛以用于內(nèi)科雜病及疑難疾病的治療[10]。前期研究顯示，抵擋湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病模型大鼠的核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB），一般認(rèn)為，激活的NF-κB從胞漿轉(zhuǎn)位到胞核,可增加腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、抵抗素等表達(dá),從而增加胰島素抵抗,同時(shí)促使血管斑塊形成[11-12]。抵擋湯對(duì)NF-κB的干預(yù)作用可能是其干預(yù)胰島素抵抗及改善糖尿病大血管并發(fā)癥的關(guān)鍵因素，然而，中藥雖然有改善IR的作用，但是其降糖作用卻不甚明顯，其可能的機(jī)制尚待進(jìn)一步探討。同時(shí)，方中的一些主要藥物如大黃等改善IR的研究方興未艾[13]，這些都為今后的研究提供了有益的思路。

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（本文編輯：馬 英，高 杉）

中圖分類號(hào)：R587.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1672-1519（2014）02-0091-03

收稿日期：（2012-10-13）

*基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81273914）。

作者簡(jiǎn)介：常 柏（1972-），男，博士，副主任醫(yī)師，長(zhǎng)期從事中西醫(yī)結(jié)合治療糖尿病的基礎(chǔ)與臨床研究。

Effect of Didang decoction on insulin resistance in rats with type 2 diabetic

CHANG Bai1,LI Qiao-fen2,LI Chun-shen2,LI Yun-ping2
(1.Metabolic Disease Hospital of Tianjin Medical University,Tianjin 300070,China;2.Tianjin University of TCM,Tianjin 300193,China;3.The First Affilated Hospital of Tianjin University of TCM,Tianjin 300193,China)

Abstract:[Objective]To investigate the effect and its mechanism of Didang decoction on vascular lesions in diabetic rats.[Methods]

Rats with type 2 diabetic were randomly divided into model group,Didang decoction group,rosiglitazone group,and LETO control group. The rats in Didang decoction group and the rosiglitazone group were treated orally with Didang decoction and rosiglitazone respectively, and the rats in model group and blank group with equal amount of distilled water.The experimental period was 12 weeks.The area under the curve of glucose,lipids,insulin resistance index,hyperinsulinemic euglycemic clamp test of skeletal muscle and the activity of AMPK quantitative detection of all the rats were detected.[Results]Compared with the model group,the insulin resistance index of the rats in Didang decoction group and rosiglitazone group was reduced(P＜0.05).Compared with the model group,the triglyceride and free fatty acid ofthe ratswere reducedinrosiglitazone group,andthe free fattyacidsofthe ratswere loweredinDidangdecoctiongroup(P＜0.05).Compared with the model group,the AMPK activity of rats was increased in rosiglitazone group(P＜0.05).[Conclusion]The Didang decoction has no effect on the blood glucose and blood lipid of rate with diabetic disease,but can significantly alter the insulin resistance index and euglycemic clamp glucose infusion rate and has effect on the insulin resistance of rats with type 2 diabetic.

Key words：Didang decoction;insulin resistance;diabetes mellitus;insulin sensitivity index