人參非皂苷類成分分析方法研究進(jìn)展

王明蛟，高 航，剛婉嬌，徐 偉*

(1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,長(zhǎng)春 130117；2.吉林財(cái)經(jīng)大學(xué)醫(yī)院，長(zhǎng)春 130117)

人參為五加科人參屬植物人參PanaxginsengC.A.Meyer的干燥根，主產(chǎn)于我國(guó)東北地區(qū)。人參主要含有皂苷、多糖、揮發(fā)油等多種化學(xué)成分。其中，人參皂苷是廣為人知的主要效能成分,主要含有單體人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rg2、Rg3、Rh、Ro等。其分析方法主要有：HPLC、GC、TLCS、MS、分光光度法、比色法、薄層光密度法、棒狀薄層掃描法、液滴逆流色譜法等。目前，很多人已對(duì)人參皂苷的檢測(cè)與分析方法進(jìn)行了綜述，如李青[1]、張萍[2]等。越來越多的研究揭示了人參皂苷在抗缺血、抗腫瘤、抗衰老、治療心血管疾病[3]和糖尿病[4]等方面具有良好的前景。近年來的研究還表明，人參中非皂苷類成分，如：糖類、揮發(fā)油、氨基酸、脂肪酸、微量元素等成分也具有良好的生物活性，但是非皂苷類成分分析方法的綜述尚未報(bào)道。本文重點(diǎn)就人參中常見的非皂苷類成分的檢測(cè)與分析方法進(jìn)行較為全面的綜述。

1 人參中糖類成分的測(cè)定

人參含有的糖類成分主要有單糖、低聚糖和多糖。有一定生理活性的人參糖類成分是人參多糖，為人參中主要活性成分之一。人參多糖具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫、抗衰老等作用，其藥理活性部位是酸性人參多糖。人參多糖的提取方法主要有水提醇沉法、微波提取法、堿提取法、酶提取法、超聲波提取法和超臨界萃取提取法；分級(jí)純化的方法主要有分步醇沉法、季銨鹽沉淀法、鹽析法、離子交換色譜法等[5]。

鐘巖等[6]采用苯酚-硫酸比色法測(cè)定鮮人參中多糖的含量。筆者取樣品溶液于具塞試管中，加蒸餾水至2.0 mL,加入5%苯酚溶液1.0 mL搖勻,迅速加入濃硫酸溶液5.0 mL，振搖5 min，放置10 min，置沸水浴中加熱20 min，取出冷卻至室溫，用DU-7500紫外分光光度計(jì)于490 nm處測(cè)定吸光度A。結(jié)果顯示，加樣回收率為98.40%，效果較好，可作為檢測(cè)人參中多糖成分的有效方法。

白雪媛等[7]采用紫外分光光度法對(duì)長(zhǎng)白山區(qū)15個(gè)不同產(chǎn)地人參中總糖、還原糖和可溶性多糖的含量分別進(jìn)行了檢測(cè)。其中，人參中總糖和還原糖的檢測(cè)方法采用的是3,5-二硝基水楊酸法。即將樣品、蒸餾水和3,5-二硝基水楊酸混合均勻，在沸水浴中加熱5 min，取出后立即用冷水冷卻,最后于UV-2550紫外分光光度計(jì)520 nm處測(cè)定吸光度值A(chǔ)。人參中可溶性多糖的檢測(cè)方法采用的是苯酚-硫酸比色法。結(jié)果總糖、還原糖和可溶性多糖的平均含量分別為：57.32%、10.44%、6.52%，其RSD均<3.0%，符合要求，方法切實(shí)可行。

2 人參中揮發(fā)油成分的測(cè)定

人參中揮發(fā)油成分具有香味和揮發(fā)性，其化學(xué)成分比較復(fù)雜，主要由倍半萜類、長(zhǎng)鏈飽和羧酸以及少量芳香烴類物質(zhì)組成，其中最主要的成分是倍半萜類。目前為止，已從人參揮發(fā)性成分中分離鑒定了90余種化合物，認(rèn)為其中欖香稀、金合歡稀等8～9個(gè)化合物是活性成分。人參中揮發(fā)油的提取方法主要有水蒸氣蒸餾法、超聲提取技術(shù)、超臨界流體萃取技術(shù)、微波萃取、半仿生提取法及固相微萃取等方法。對(duì)于揮發(fā)油SPE與其他色譜技術(shù)及IR、MS聯(lián)用，可高效、快速地分析其中的有效成分。人參揮發(fā)油的分析手段大多以GC-MS法分析鑒別，用70eV的EI離子源的質(zhì)譜得到的數(shù)據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)譜圖庫進(jìn)行比較。

佟鶴芳等[8]運(yùn)用GC-MS技術(shù),計(jì)算機(jī)檢索結(jié)合保留指數(shù)(Kovats RI)對(duì)人參中揮發(fā)性成分進(jìn)行了分析研究。氣相色譜條件為：Varian VF-5-MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm)毛細(xì)管色譜柱；進(jìn)樣口柱溫：250 ℃，不分流，升溫程序：50 ℃，以10 ℃/ min升至155 ℃，保持15 min，再以8 ℃/min升至280 ℃，保持10 min，載氣為He，柱流量1 mL/min，進(jìn)樣量1 μL。質(zhì)譜測(cè)定條件：電離方式EI，離子源溫度200 ℃，電離電壓70 eV，傳輸線溫度240 ℃，掃描離子范圍50～500 amu。最終共鑒定出52個(gè)化合物，主要具有倍半萜、脂肪酸酯、醇、酮、烷烴、芳香烴等，其中以倍半萜類化合物為主；并采用峰面積歸一化法測(cè)定其相對(duì)含量，可知已鑒定的化合物占人參揮發(fā)油總量的94.61%。

王慧等[9]利用TLC和硝酸銀-硅膠G層析法、IR、GC、GC-MS聯(lián)機(jī)技術(shù)對(duì)人參莖葉揮發(fā)油的有效成分進(jìn)行分離純化，結(jié)果從該揮發(fā)油中分離鑒定了6個(gè)倍半萜烯類化合物,分別為：反式-β-金合歡烯、β-甜沒藥烯、β-芹子烯、異長(zhǎng)葉烯、α-檀香烯、異香木蘭烯。

3 人參中脂肪酸成分的測(cè)定

人參中脂肪酸成分以不飽和脂肪酸為主，主要包括亞油酸、棕櫚酸、亞麻油酸、油酸、硬脂酸等，其中亞油酸含量高達(dá)62%～65%，硬脂酸含量最低，在人參根中相對(duì)含量不足1%。亞油酸為人體必需脂肪酸，是人體組織、細(xì)胞的組成成分，亞油酸與脂類代謝和膽固醇代謝密切相關(guān)，并具有降低血脂和膽固醇、減少動(dòng)脈粥樣硬化、抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)和促進(jìn)大腦發(fā)育等作用。

楊艷輝等[10]采用GC-MS法鑒定出19種脂肪酸，其中不飽和脂肪酸占總含量的80.01%，而油酸和亞油酸含量居1、2位。

陳文學(xué)等[11]采用索氏提取法提取并結(jié)合GC-MS法對(duì)不同品種人參中脂肪酸成分及含量進(jìn)行了分析。結(jié)果共鑒定出20種脂肪酸，其中主要為(Z，Z)-9,12-十八碳二烯酸、棕櫚酸和(Z,Z,Z)-9,12,15-十八碳三烯酸；用面積歸一化法測(cè)定其相對(duì)含量，顯示出不同人參脂肪酸的含量存在差異，其中含量最高的是亞油酸，即9,12-十八碳二烯酸。該法準(zhǔn)確、有效，可鑒別出不同品種的人參,有望成為人參品種選育的一項(xiàng)重要手段。

魏建華等[12]基于超臨界CO2對(duì)中藥的脂溶性成分具有強(qiáng)溶解能力和高選擇性，首次應(yīng)用GC-MS聯(lián)用法分析超臨界CO2萃取(SFE)的人參脂溶性成分。通過GC-MS分析發(fā)現(xiàn)，人參超臨界CO2萃取物主要含脂肪酸和揮發(fā)油2類成分。同時(shí)應(yīng)用此技術(shù),共鑒定出了31種脂肪酸，超過楊艷輝[10]、陳文學(xué)[11]、張秀麗[13]等報(bào)道的用索氏提取法提取的脂肪酸數(shù)量。因此可作為獲得人參中脂溶性成分有效的方法。

4 人參中氨基酸成分的測(cè)定

人參中富含多種氨基酸，其種類和數(shù)量隨人參品種、產(chǎn)地、參齡以及人參部位的不同而異，其中人參根所含的氨基酸主要有精氨酸、賴氨酸、丙氨酸等20種以上的氨基酸，除色氨酸外，多數(shù)為人體必需氨基酸。目前，氨基酸的含量已作為衡量人參產(chǎn)品質(zhì)量的指標(biāo)之一，對(duì)于人參中氨基酸類成分的分析報(bào)道也較多[14]，大多依賴于氨基酸分析儀對(duì)總氨基酸的測(cè)定。

張晶等[15]采用HPLC法測(cè)定人參根渣中的氨基酸含量。色譜柱為ODS色譜柱,檢測(cè)波長(zhǎng)360 nm,流動(dòng)相A0.05 mol/L乙酸鈉緩沖溶液(pH6.5,含10 mL/L NN-二甲基甲酰胺)，梯度洗脫，流速1 mL/min，進(jìn)樣量20 μL，梯度洗脫。結(jié)果顯示，人參樣品中含有15種氨基酸，氨基酸總量達(dá)到19.08%，其中6種人體必需氨基酸總量達(dá)到9.38%，占氨基酸總量的49.18%。

陳再潔等[16]運(yùn)用柱前衍生RP-HPLC法測(cè)定人參中17種游離氨基酸和總氨基酸的含量。筆者采用異硫氰酸苯酯對(duì)樣品進(jìn)行柱前衍生，以反高效液相色譜法測(cè)定，并用外標(biāo)法測(cè)定其含量。結(jié)果顯示，17種氨基酸的檢測(cè)濃度線性范圍為0.002 5～2.5 000 μmol/L，r均>0.998 0。可知，此方法靈敏、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于人參及相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

5 人參中微量元素的測(cè)定

人參中富含各種人體所必需的微量元素，如Ca、Mg、Zn等，現(xiàn)代研究表明，微量元素與人體的內(nèi)分泌、生長(zhǎng)發(fā)育、免疫和感染、腫瘤、心血管疾病等密切相關(guān)。因此，對(duì)人參中微量元素進(jìn)行測(cè)定非常有必要。人參中微量元素的分析方法主要有灰化法、熱分析法、非完全消化法、微波消解法、質(zhì)子激發(fā)X射線分析法、中子活化法、X射線熒光分析法等；檢測(cè)方法主要有原子吸收分光光度法、原子熒光光譜法等。

梁晨等[17]采用空氣-乙炔火焰原子吸收光譜法測(cè)定了人參和人參果中9種無機(jī)元素的含量(HG-9602型原子吸收分光光度計(jì))。結(jié)果顯示人參和人參果樣品中Zn、Cu、Mn、Fe、Ca、Mg、Cd、K、Na 9種無機(jī)元素含量測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.53%～3.4%,加樣回收率分別為90.59%～110.00%和90.00%～114.29%。表明該方法簡(jiǎn)單、快速、切實(shí)可行。

吳冬梅等[18]采用端視電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法測(cè)定人參不同部位中的微量元素，并用先進(jìn)的微波高壓消解系統(tǒng)完成人參的前處理步驟，此方法快速、安全有效，消耗試劑少，也可由此降低由酸帶來的空白值，避免污染樣品，減少或消除易揮發(fā)元素的損失。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，共測(cè)定出16種元素，其譜線強(qiáng)度與濃度之間線性關(guān)系良好。各元素的方法加樣回收率介于89.9%～107.5%。據(jù)此,此方法合理、有效，能夠滿足人參樣品中鋁、鋇、鈣、銅、鐵等微量和痕量元素的分析測(cè)定。

高寶巖等[19]采用微波消解ICP-AES法測(cè)定人參中常量及微量元素。微波消解系統(tǒng)為CM-MSD-Ⅱ，最大操作壓力1 mPa，100 mL聚四氟乙烯消解罐1個(gè)，微波輸出功率800 W。美國(guó)利曼公司PS-Ⅰ型中階梯光柵光譜儀，波長(zhǎng)范圍190～800 nm，高頻發(fā)生器頻率40.68 mHz，耦合功率1.0 kW，冷卻水壓0.27 mPa，三層同心可拆卸式石英炬管，格網(wǎng)霧化器(Hidrbrand Grid)，氬氣流量，冷卻氣12 L/min，載氣0.3 L/min，進(jìn)樣方式：蠕動(dòng)泵進(jìn)樣，樣品提升量1 mL/min。結(jié)果測(cè)定其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.78%～9.95%，加樣回收率為91.0%～105.0%，方法切實(shí)可行。

6 結(jié)語

本文總結(jié)了近年來人參中非皂苷類成分分析方法的新進(jìn)展，以上各分析方法都在非皂苷類成分的定量分析中取得了成功。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，人參中非皂苷成分的分析方法將會(huì)朝著更靈敏、更便捷、更環(huán)保、高通量、高精度的方向發(fā)展。

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