輪狀病毒合并細(xì)菌性腹瀉的病原實(shí)驗(yàn)室檢查及臨床意義

余林普

輪狀病毒合并細(xì)菌性腹瀉的病原實(shí)驗(yàn)室檢查及臨床意義

余林普

目的 探討人輪狀病毒（human rotavirus，HRV）合并細(xì)菌性腹瀉的發(fā)生率，為臨床治療提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。方法選取2012年3月至2013年12月期間經(jīng)初步診斷為細(xì)菌性腹瀉的患者128例，收集上述患者的糞便，細(xì)致觀察糞便性狀后，進(jìn)行細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)，同時(shí)檢測(cè)HRV，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果在所有的128份樣本中，HRV檢測(cè)陽(yáng)性率為64．06%（82／128），細(xì)菌檢測(cè)陽(yáng)性率為53．91%（69／128），HRV及細(xì)菌均為陽(yáng)性的陽(yáng)性率為53．91%（69／128）。69份細(xì)菌陽(yáng)性樣本中有27份檢出金黃色葡萄球菌，25份檢出非傷寒沙門(mén)菌，7份檢出志賀菌，4份檢出大腸埃希菌，6份同時(shí)檢出2種細(xì)菌。大腸埃希菌對(duì)所選6種抗生素均呈較高耐藥性，其中對(duì)氨芐西林、左氧氟沙星完全耐藥；25株非傷寒沙門(mén)菌及7株志賀菌對(duì)氨芐西林、頭孢曲松以及左氧氟沙星均呈較高的耐藥性；合并2種菌感染的標(biāo)本中檢出的沙門(mén)菌B群對(duì)所選6種抗菌藥都呈較高耐藥性，其中對(duì)磺胺甲噁唑及頭孢曲松完全耐藥；金黃色葡萄球菌對(duì)頭孢曲松及氨芐西林呈較高的耐藥性，但對(duì)環(huán)丙沙星及氯霉素較敏感。HRV與細(xì)菌檢測(cè)均呈陽(yáng)性的糞便外觀均呈膿血便、黏液便或水樣便，其中有36份糞便呈水樣便兼黏液便或者血便。結(jié)論HRV合并細(xì)菌性腹瀉臨床發(fā)生率較高，檢測(cè)HRV、病原菌及其耐藥性鑒定對(duì)臨床治療方案制定有重要的價(jià)值。

輪狀病毒；細(xì)菌性腹瀉；病原檢查；耐藥性

腹瀉是臨床十分常見(jiàn)的胃腸道疾病之一，該疾病不僅臨床發(fā)病率較高，而且傳播速度較快，傳播范圍較廣，對(duì)兒童的身心健康造成了嚴(yán)重的不良影響。細(xì)菌感染和人輪狀病毒（human rotavirus，HRV）感染是最多見(jiàn)的誘因［1，2］。近年來(lái)，隨著臨床檢驗(yàn)技術(shù)的進(jìn)步以及患者病情的變化，我們發(fā)現(xiàn)部分患者同時(shí)存在HRV感染和細(xì)菌感染現(xiàn)象，為了驗(yàn)證上述發(fā)現(xiàn)，本文研究分析了128例腹瀉患者的糞便樣本，現(xiàn)將結(jié)果匯報(bào)如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取2012年3月至2013年12月期間經(jīng)初步診斷為細(xì)菌性腹瀉的患者128例，其中男性68例，女性60例，年齡介于3個(gè)月～18歲，中位年齡為13月齡。依據(jù)患者年齡將患者分為＜0．5歲組、0．5～2歲組以及2歲以上組。診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］糞便常規(guī)鏡檢結(jié)果WBC≥5／HP、RBC≥10／HP，收集上述患者的糞便，細(xì)致觀察糞便性狀后，進(jìn)行細(xì)菌鑒定、藥敏試驗(yàn)以及HRV檢測(cè)。

1.2 儀器與試劑HRV診斷試劑盒（ELISA法），由蘭州生研所提供，菌株和藥敏鑒定的培養(yǎng)基由廣州迪景公司提供，氨芐西林由吉林濟(jì)邦顯鋒藥業(yè)有限公司提供，磺胺甲噁唑由上海新亞藥業(yè)閔行有限公司提供，環(huán)丙沙星由山西津華暉星制藥有限公司提供，氯霉素由青島市新興藥業(yè)有限公司提供，頭孢曲松由上海羅氏制藥有限公司提供，左氧氟沙星由常州蘭陵制藥有限公司提供，診斷血清由蘭州生研所提供。質(zhì)控菌株：大腸埃希菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATC25923由甘肅省臨床檢驗(yàn)中心提供。

1.3 方法采用ELISA法檢測(cè)患者糞便樣本中的HRV含量，所有操作均嚴(yán)格按照酶標(biāo)儀及試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行；細(xì)菌分離鑒定以及藥敏實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、執(zhí)行均分別按照第3版《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》和臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）更新版規(guī)則及標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行［4，5］。

2 結(jié)果

2.1 糞便HRV及細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果在所有的128份樣本中，HRV檢測(cè)陽(yáng)性率為64．06%（82／128），細(xì)菌檢測(cè)陽(yáng)性率為53．91%（69／128），HRV及細(xì)菌均為陽(yáng)性的陽(yáng)性率為53．91%（69／128）。其中0．5～2歲患兒HRV及細(xì)菌檢測(cè)陽(yáng)性率均呈較高水平，見(jiàn)表1。

表1 不同年齡組患兒糞便HRV及細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果［n（%）］

2.2 糞便性狀觀察結(jié)果69份HRV與細(xì)菌檢測(cè)均陽(yáng)性的糞便外觀均呈膿血便、黏液便或水樣便，其中有36份糞便呈水樣便兼黏液便或者血便，見(jiàn)表2。

表2 HRV合并細(xì)菌性腹瀉患者糞便性狀辨析結(jié)果

2.3 糞便細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果69株陽(yáng)性菌株依次為27株金黃色葡萄球菌，25株非傷寒沙門(mén)菌（11株腸炎沙門(mén)菌，7株都伯林沙門(mén)菌，7株沙門(mén)菌B群），7株志賀菌，4株大腸埃希菌以及6份同時(shí)檢出2種細(xì)菌樣本（2份為沙門(mén)菌B群合并志賀菌，4份為金黃色葡萄球菌合并沙門(mén)菌B群）。

2.4 藥敏結(jié)果4株大腸埃希菌對(duì)所選6種抗菌藥物均呈較高耐藥性，其中對(duì)氨芐西林、左氧氟沙星完全耐藥；25株非傷寒沙門(mén)菌及7株志賀菌對(duì)氨芐西林、頭孢曲松以及左氧氟沙星呈較高的耐藥性；合并2種菌感染的標(biāo)本中的沙門(mén)菌B群對(duì)本研究所用6種抗菌藥都呈較高耐藥性，其中對(duì)磺胺甲噁唑及頭孢曲松完全耐藥；金黃色葡萄球菌對(duì)頭孢曲松及氨芐西林呈較高的耐藥性，但對(duì)環(huán)丙沙星及氯霉素較敏感，見(jiàn)表3。

3 討論

在經(jīng)臨床初步診斷為細(xì)菌性腹瀉的128例患者中，共有69例患者糞便樣本HRV及細(xì)菌檢測(cè)結(jié)果均呈陽(yáng)性，陽(yáng)性率高達(dá)53．91%。這表明在腹瀉患者中，HRV合并細(xì)菌感染患者并不少見(jiàn)，應(yīng)引起臨床醫(yī)生的重視。上述合并HRV及細(xì)菌感染的患者糞便性狀均呈膿血便、黏液便或水樣便，部分糞便呈水樣便兼黏液便或者血便，這表明這些感染患者的糞便兼有細(xì)菌感染和病毒感染的特性，可以幫助臨床進(jìn)行初步診斷。

表3 細(xì)菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果

當(dāng)機(jī)體處于健康狀態(tài)時(shí)，腸道的微生態(tài)菌群可以抑制病原菌的過(guò)度繁殖。但當(dāng)機(jī)體感染HRV后，腸道的微生態(tài)菌群會(huì)處于失衡狀態(tài)［6－8］，不再對(duì)機(jī)體具有保護(hù)作用，從而導(dǎo)致腸道病原微生物過(guò)度繁殖。本文研究結(jié)果顯示，0．5～2歲腹瀉患兒HRV陽(yáng)性率及細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性率均呈現(xiàn)較高水平，可能與此年齡段兒童來(lái)自母體的免疫因子已消耗殆盡，同時(shí)自身免疫系統(tǒng)及消化系統(tǒng)均發(fā)育不完善有關(guān)，因而較易發(fā)生感染。由于HRV感染機(jī)制的特點(diǎn)，當(dāng)機(jī)體再次發(fā)生HRV感染時(shí)，免疫系統(tǒng)會(huì)激活記憶而使機(jī)體處于受保護(hù)狀態(tài)，從而不會(huì)出現(xiàn)明顯臨床癥狀，故HRV感染一般不會(huì)成為成人腹瀉的病因［9，10］。

本文研究結(jié)果顯示，陽(yáng)性菌株以金黃色葡萄球菌和非傷寒沙門(mén)菌為主，這可能與樣本多為0．5～2歲兒童糞便樣本有關(guān)。小兒的食物來(lái)源主要為奶制品，奶制品存放不當(dāng)、未使用熱水消毒、喂養(yǎng)不注意等因素均極易導(dǎo)致小兒發(fā)生金黃色葡萄球菌感染。且此階段小兒多以爬行為主，喜好抓食、吃手等，容易使沙門(mén)菌進(jìn)入體內(nèi)導(dǎo)致腹瀉。

本文藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，糞便中的菌株對(duì)頭孢曲松、左氧氟沙星等常規(guī)抗菌藥物均表現(xiàn)出一定程度的耐藥性。此外，非傷寒沙門(mén)菌、志賀菌、金黃色葡萄球菌對(duì)氨芐西林均呈較高耐藥性。上述藥敏試驗(yàn)結(jié)果提示，不同類型菌種對(duì)臨床常用抗生素的敏感程度差異很大，在制定臨床治療方案時(shí)應(yīng)針對(duì)不同類型細(xì)菌感染采用不同的抗菌藥物，以達(dá)到更好的治療效果。

此外，在全部69例HRV合并細(xì)菌性腹瀉患者中，有6例患者糞便樣本中同時(shí)檢測(cè)出2種細(xì)菌，其中包括對(duì)所有常用抗菌藥物均具有較高耐藥性的沙門(mén)菌B群。這不僅意味著我們需要改變臨床用藥方案，同時(shí)也提示我們?cè)谶M(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)在得到一種感染菌種后，應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行細(xì)致的觀察和驗(yàn)證是否存在其他的感染菌種，避免漏診，以期為臨床提供準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)，提升臨床用藥合理性。

綜上所述，對(duì)疑似細(xì)菌感染性腹瀉患者同時(shí)進(jìn)行HRV及細(xì)菌感染檢查是十分必要的，尤其在HRV流行季節(jié)應(yīng)提倡對(duì)腹瀉患兒常規(guī)進(jìn)行HRV檢測(cè)。這不僅能夠準(zhǔn)確了解患者的致病原因，更有助于制定切實(shí)有效的治療方案，加速患者的康復(fù)進(jìn)程，減少耐藥菌株的產(chǎn)生。

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The laboratory examination and clinical significance of pathogen detection of rotavirus combine bacterial diarrhea

YU Lin－pu．Departmentof Clinical Laboratory，EnshiAutonomous Prefecture for Disease Controland Prevention Center，Enshi445000，China

ObjectiveTo investigate the incidence rate ofhuman rotavirus（HRV）combine bacterial diarrhea，and provide laboratory base for clinical therapy．MethodsFaecesof128 cases diagnosed bacterial diarrhea patients from March 2012 to December2013 in ourhospitalwere collected．Bacteria identification and drug sensitive testwere doneafter the traitwereobserved．The HRVwere detected at the same time．The results wereanalyzed statistically．ResultsIn all 128 samples，the positive rate of HRV was 64．06％（82 ／128），the positive rate of bacteria was 53．91％（69／128），the positive rate of both HRV and bacteria all positive was53．91%（69／128），69 cases bacteria positive strains including 27 cases Staphylococcus aureus，25 cases non－Salmonella typhi，7 casesShigella，4 casesEscherichia coli，and 6 cases found two kinds bacteria simultaneously．Escherichia colishown higher drug resistance to all 6 kinds antibiotics，and were completely resistant to ampicillin and levofloxacin．25 cases non－Salmonella typhiand 7 casesShigellashowed higher drug resistance to ampicillin，ceftriaxone and levofloxacin．Salmonellagroup B detected from merge two kinds bacterial infections shown higher drug resistance to all 6 kinds antibiotics，and were completely resistant to sulfamethoxazole and ceftriaxone．The trait of faeces which with HRV and bacteria both positive showed pus and blood stool，mucous stool，mucousstool，liquidstool，liquid stool，and including 36 cases showed liquid stool combined mucous stool or blood stool．ConclusionThe incidence rate of HRV combined bacterial diarrhea show higher．HRV and bacterial resistance detecting all have important value to therapeutic schedule formulating．

Rotavirus；Bacterialdiarrhea；Etiologicaldetection；Drug resistance

10．3969／j．issn．1674－7151．2014．01．009

2014－02－04）

（本文編輯：張志成）

445000 恩施市，恩施土家族苗族自治州疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科