氣相色譜儀測(cè)定血液中DHA、EPA含量

馮劍軍

摘 要：二十二碳六烯酸（DHA）、二十碳五烯酸（EPA）是人體血液中的兩種物質(zhì)，對(duì)人體的健康有著重要的影響。因此，使用科學(xué)方法對(duì)血液中DHA，EPA進(jìn)行檢測(cè)是非常重要的。使用氣相色譜儀對(duì)血液中的DHA和EPA進(jìn)行檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，詳細(xì)介紹了實(shí)驗(yàn)材料、方法和結(jié)果，最終證實(shí)，氣相色譜儀適用于檢測(cè)血液中的DHA和EPA。

關(guān)鍵詞：氣相色譜儀；血液；DHA；EPA

中圖分類號(hào)：TQ016.51 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：2095-6835（2014）03-0042-02

DHA，即二十二碳六烯酸，俗稱腦黃金，是一種對(duì)人體非常重要的不飽和脂肪酸，屬于Omega-3不飽和脂肪酸家族中的重要成員。EPA ，即二十碳五烯酸，是魚油的主要成分，屬于Ω-3系列多不飽和脂肪酸。目前測(cè)定這兩種脂肪酸的方法有很多種，而氣相色譜儀法是比較常用的一種。通過(guò)對(duì)氣相色譜儀測(cè)定血液中DHA，EPA含量進(jìn)行探討，以期更準(zhǔn)確地測(cè)定血液中DHA和EPA的含量。

1 實(shí)驗(yàn)材料的準(zhǔn)備

儀器：GC112A氣相色譜儀、WYB-Ⅱ靜音無(wú)油空氣泵、SPGN-ⅡA高純氮發(fā)生器、SPGH-300高純氫發(fā)生器、XH-B型漩渦混合器、CF-長(zhǎng)風(fēng)水浴箱、B600A型低速離心機(jī)、TFG-1200通風(fēng)柜。

試劑：甲醇、乙酸乙酯、正己烷等，均為分析純；DHA甲酯標(biāo)準(zhǔn)品、EPA甲酯標(biāo)準(zhǔn)品；內(nèi)標(biāo)溶液（1 mg/mL，正二十三碳烷酸無(wú)水乙醇溶液）；鹽酸甲醇溶液（氯化鈉與濃硫酸反應(yīng)，產(chǎn)生的氯化氫氣體導(dǎo)入甲醇中，經(jīng)標(biāo)定物質(zhì)的量濃度為1.3 mol/L）。

312名來(lái)我院產(chǎn)檢的孕婦，體檢未發(fā)現(xiàn)重大疾病，且無(wú)不良嗜好?？崭钩槿§o脈血2 mL，及時(shí)分離血清，待檢。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇

毛細(xì)管柱：老化過(guò)后毛細(xì)管柱，型號(hào)FFAP，規(guī)格30 m（長(zhǎng)）×0.25 mm（內(nèi)徑）×0.25μm（液膜厚度）。柱溫：初始180 ℃，保持3.0 min，然后2 ℃/min升至250 ℃；汽化室溫度260 ℃；檢測(cè)器溫度300 ℃；分流比1∶60；進(jìn)樣量1.0 μL。

2.2 樣品處理

用定量移液器取200 μL血清放入5 mL尖底具塞試管內(nèi)，加入物質(zhì)的量濃度為4.5 mol/L的濃硫酸2滴酸化，加內(nèi)標(biāo)液10 μL，用漩渦混合器混合3 min；用乙酸乙酯漩渦混合提取2次（1 mL和0.5 mL），3 000 r/min離心3 min，合并提取液放入5 mL尖底具塞試管備用；把乙酸乙酯提取液用小流量高純氮?dú)獯蹈桑患尤胛镔|(zhì)的量濃度為1.3 mol/L的HCL-CH3OH溶液1 mL后密封，置60 ℃恒溫水浴箱中酯化30 min后，冷卻。加入分析純的正己烷1 mL，漩渦混合1 min，靜置3 min，提取正己烷層放置在5 mL尖底具塞試管內(nèi)備用，把正己烷提取液用小流量高純氮?dú)獯蹈桑?0 μL正己烷溶解。

2.3 應(yīng)用及評(píng)價(jià)

2.3.1 色譜分離條件的結(jié)果

經(jīng)過(guò)試驗(yàn)，在色譜條件下人血清游離脂肪酸甲酯達(dá)到完全分離，互不干擾。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制

質(zhì)量濃度為1 mg/mL的脂肪酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別用正己烷將DHA混合準(zhǔn)溶液稀釋成含50 μg/mL、125 μg/mL、250 μg/mL、500 μg/mL、750 μg/mL、1 000 μg/mL系列質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，將EPA混合準(zhǔn)溶液稀釋成含10 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、250 μg/mL系列質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。以各標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度X（mg/mL）為橫坐標(biāo)，對(duì)照品的峰面積Y為縱坐標(biāo)作圖，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果DHA的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.005X+0.004 5，R=0.998；EPA的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y= 0.0062X-0.003 6，R=0.996。

2.3.3 精密度實(shí)驗(yàn)

平行制備6份血清樣品，分別加入高、中、低質(zhì)量濃度（分別為250 μg/mL、100 μg/mL、50 μg/mL）的DHA甲酯、EPA甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，1 d內(nèi)各重復(fù)測(cè)定5次，記錄色譜圖，按峰面積計(jì)算天內(nèi)RSD；每天測(cè)1次，共測(cè)5 d，計(jì)算天間RSD。結(jié)果見(jiàn)表1.

2.3.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

平行制備6份樣品，在1 d內(nèi)測(cè)定2次，按峰面積除以取樣量后所得值計(jì)算RSD。結(jié)果DHA甲酯和EPA甲酯含量的RSD分別為3.00%和2.89%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一份樣品，于開(kāi)始時(shí)、第一天、第三天、第五天進(jìn)行測(cè)定，按峰面積計(jì)算RSD。結(jié)果DHA甲酯和EPA甲酯的RSD分別為2.57%和2.62%，表明該樣品溶液至少5 d內(nèi)可以保持基本穩(wěn)定。

2.3.6 回收率實(shí)驗(yàn)

取已知含量的樣品9份平行分為3組，每組分別加入高、中、低3種質(zhì)量濃度DHA甲酯、EPA甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)氣相色譜分析，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算，以測(cè)得量與添加量計(jì)算平均回收率。結(jié)果見(jiàn)表2.

2.3.7 DHA和EPA含量

取1 μL各樣品注入氣相色譜儀，以內(nèi)標(biāo)法計(jì)算DHA甲酯和EPA甲酯的含量。312名孕婦血液中DHA含量為（14.88±10.54）mg/L，變異系數(shù)（CV）為 31.56 %，EPA含量為（10.54±10.43）mg/L，CV為79.63%.

3 討論

脂肪酸的分析過(guò)程較為復(fù)雜，其中樣品的前期處理過(guò)程非常關(guān)鍵。衍生化過(guò)程中DHA、EPA的酯化效率決定了兩種物質(zhì)含量檢測(cè)的準(zhǔn)確度。目前脂肪酸酯化的方法有三氟化硼酯化法、甲醇—?dú)溲趸浭覝仵セ?、甲醇—?dú)溲趸c加熱回流酯化法和薄層層析法。此次采用了鹽酸/甲醇溶液酯化法，DHA、EPA的萃取效率高，可完全分離，互不干擾，保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性。且以正二十三碳烷酸無(wú)水乙醇溶液為內(nèi)標(biāo)，其保留時(shí)間與DHA，EPA相近，能夠準(zhǔn)確測(cè)定DHA，EPA含量。

這種方法精密度和重復(fù)性良好，短時(shí)間內(nèi)較穩(wěn)定，并且在加標(biāo)回收率試驗(yàn)中，DHA平均回收率為92.0%～93.6%，RSD為3.0%～3.6%，EPA的平均回收率為92.3%～94.0%，RSD為2.8%～4.0%，適用于人血液中DHA，EPA的檢測(cè)。

4 結(jié)束語(yǔ)

氣相色譜儀具有分析速度快、應(yīng)用范圍廣、分離效率和分析靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，常用于測(cè)定血液中DHA和EPA的含量。結(jié)合一系列具體的實(shí)驗(yàn)研究，認(rèn)為氣相色譜儀適用于檢測(cè)血液中的DHA和EPA。相信這種方法在以后會(huì)得到普遍應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]李慶民，陳桂范，高實(shí)，等.氣相色譜外標(biāo)法測(cè)定魚油中EPA和DHA的含量[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1996（04）.

[2]楊玉林，芮振榮，潘希和.毛細(xì)管氣相色譜法分析雞蛋中DHA、EPA和亞麻酸的含量[J].上海預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2001（04）. 〔編輯：陳文強(qiáng)〕

摘 要：二十二碳六烯酸（DHA）、二十碳五烯酸（EPA）是人體血液中的兩種物質(zhì)，對(duì)人體的健康有著重要的影響。因此，使用科學(xué)方法對(duì)血液中DHA，EPA進(jìn)行檢測(cè)是非常重要的。使用氣相色譜儀對(duì)血液中的DHA和EPA進(jìn)行檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，詳細(xì)介紹了實(shí)驗(yàn)材料、方法和結(jié)果，最終證實(shí)，氣相色譜儀適用于檢測(cè)血液中的DHA和EPA。

關(guān)鍵詞：氣相色譜儀；血液；DHA；EPA

中圖分類號(hào)：TQ016.51 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：2095-6835（2014）03-0042-02

DHA，即二十二碳六烯酸，俗稱腦黃金，是一種對(duì)人體非常重要的不飽和脂肪酸，屬于Omega-3不飽和脂肪酸家族中的重要成員。EPA ，即二十碳五烯酸，是魚油的主要成分，屬于Ω-3系列多不飽和脂肪酸。目前測(cè)定這兩種脂肪酸的方法有很多種，而氣相色譜儀法是比較常用的一種。通過(guò)對(duì)氣相色譜儀測(cè)定血液中DHA，EPA含量進(jìn)行探討，以期更準(zhǔn)確地測(cè)定血液中DHA和EPA的含量。

1 實(shí)驗(yàn)材料的準(zhǔn)備

儀器：GC112A氣相色譜儀、WYB-Ⅱ靜音無(wú)油空氣泵、SPGN-ⅡA高純氮發(fā)生器、SPGH-300高純氫發(fā)生器、XH-B型漩渦混合器、CF-長(zhǎng)風(fēng)水浴箱、B600A型低速離心機(jī)、TFG-1200通風(fēng)柜。

試劑：甲醇、乙酸乙酯、正己烷等，均為分析純；DHA甲酯標(biāo)準(zhǔn)品、EPA甲酯標(biāo)準(zhǔn)品；內(nèi)標(biāo)溶液（1 mg/mL，正二十三碳烷酸無(wú)水乙醇溶液）；鹽酸甲醇溶液（氯化鈉與濃硫酸反應(yīng)，產(chǎn)生的氯化氫氣體導(dǎo)入甲醇中，經(jīng)標(biāo)定物質(zhì)的量濃度為1.3 mol/L）。

312名來(lái)我院產(chǎn)檢的孕婦，體檢未發(fā)現(xiàn)重大疾病，且無(wú)不良嗜好?？崭钩槿§o脈血2 mL，及時(shí)分離血清，待檢。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇

毛細(xì)管柱：老化過(guò)后毛細(xì)管柱，型號(hào)FFAP，規(guī)格30 m（長(zhǎng)）×0.25 mm（內(nèi)徑）×0.25μm（液膜厚度）。柱溫：初始180 ℃，保持3.0 min，然后2 ℃/min升至250 ℃；汽化室溫度260 ℃；檢測(cè)器溫度300 ℃；分流比1∶60；進(jìn)樣量1.0 μL。

2.2 樣品處理

用定量移液器取200 μL血清放入5 mL尖底具塞試管內(nèi)，加入物質(zhì)的量濃度為4.5 mol/L的濃硫酸2滴酸化，加內(nèi)標(biāo)液10 μL，用漩渦混合器混合3 min；用乙酸乙酯漩渦混合提取2次（1 mL和0.5 mL），3 000 r/min離心3 min，合并提取液放入5 mL尖底具塞試管備用；把乙酸乙酯提取液用小流量高純氮?dú)獯蹈?；加入物質(zhì)的量濃度為1.3 mol/L的HCL-CH3OH溶液1 mL后密封，置60 ℃恒溫水浴箱中酯化30 min后，冷卻。加入分析純的正己烷1 mL，漩渦混合1 min，靜置3 min，提取正己烷層放置在5 mL尖底具塞試管內(nèi)備用，把正己烷提取液用小流量高純氮?dú)獯蹈?，?0 μL正己烷溶解。

2.3 應(yīng)用及評(píng)價(jià)

2.3.1 色譜分離條件的結(jié)果

經(jīng)過(guò)試驗(yàn)，在色譜條件下人血清游離脂肪酸甲酯達(dá)到完全分離，互不干擾。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制

質(zhì)量濃度為1 mg/mL的脂肪酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別用正己烷將DHA混合準(zhǔn)溶液稀釋成含50 μg/mL、125 μg/mL、250 μg/mL、500 μg/mL、750 μg/mL、1 000 μg/mL系列質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，將EPA混合準(zhǔn)溶液稀釋成含10 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、250 μg/mL系列質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。以各標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度X（mg/mL）為橫坐標(biāo)，對(duì)照品的峰面積Y為縱坐標(biāo)作圖，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果DHA的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.005X+0.004 5，R=0.998；EPA的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y= 0.0062X-0.003 6，R=0.996。

2.3.3 精密度實(shí)驗(yàn)

平行制備6份血清樣品，分別加入高、中、低質(zhì)量濃度（分別為250 μg/mL、100 μg/mL、50 μg/mL）的DHA甲酯、EPA甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，1 d內(nèi)各重復(fù)測(cè)定5次，記錄色譜圖，按峰面積計(jì)算天內(nèi)RSD；每天測(cè)1次，共測(cè)5 d，計(jì)算天間RSD。結(jié)果見(jiàn)表1.

2.3.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

平行制備6份樣品，在1 d內(nèi)測(cè)定2次，按峰面積除以取樣量后所得值計(jì)算RSD。結(jié)果DHA甲酯和EPA甲酯含量的RSD分別為3.00%和2.89%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一份樣品，于開(kāi)始時(shí)、第一天、第三天、第五天進(jìn)行測(cè)定，按峰面積計(jì)算RSD。結(jié)果DHA甲酯和EPA甲酯的RSD分別為2.57%和2.62%，表明該樣品溶液至少5 d內(nèi)可以保持基本穩(wěn)定。

2.3.6 回收率實(shí)驗(yàn)

取已知含量的樣品9份平行分為3組，每組分別加入高、中、低3種質(zhì)量濃度DHA甲酯、EPA甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)氣相色譜分析，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算，以測(cè)得量與添加量計(jì)算平均回收率。結(jié)果見(jiàn)表2.

2.3.7 DHA和EPA含量

取1 μL各樣品注入氣相色譜儀，以內(nèi)標(biāo)法計(jì)算DHA甲酯和EPA甲酯的含量。312名孕婦血液中DHA含量為（14.88±10.54）mg/L，變異系數(shù)（CV）為 31.56 %，EPA含量為（10.54±10.43）mg/L，CV為79.63%.

3 討論

脂肪酸的分析過(guò)程較為復(fù)雜，其中樣品的前期處理過(guò)程非常關(guān)鍵。衍生化過(guò)程中DHA、EPA的酯化效率決定了兩種物質(zhì)含量檢測(cè)的準(zhǔn)確度。目前脂肪酸酯化的方法有三氟化硼酯化法、甲醇—?dú)溲趸浭覝仵セ?、甲醇—?dú)溲趸c加熱回流酯化法和薄層層析法。此次采用了鹽酸/甲醇溶液酯化法，DHA、EPA的萃取效率高，可完全分離，互不干擾，保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性。且以正二十三碳烷酸無(wú)水乙醇溶液為內(nèi)標(biāo)，其保留時(shí)間與DHA，EPA相近，能夠準(zhǔn)確測(cè)定DHA，EPA含量。

這種方法精密度和重復(fù)性良好，短時(shí)間內(nèi)較穩(wěn)定，并且在加標(biāo)回收率試驗(yàn)中，DHA平均回收率為92.0%～93.6%，RSD為3.0%～3.6%，EPA的平均回收率為92.3%～94.0%，RSD為2.8%～4.0%，適用于人血液中DHA，EPA的檢測(cè)。

4 結(jié)束語(yǔ)

氣相色譜儀具有分析速度快、應(yīng)用范圍廣、分離效率和分析靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，常用于測(cè)定血液中DHA和EPA的含量。結(jié)合一系列具體的實(shí)驗(yàn)研究，認(rèn)為氣相色譜儀適用于檢測(cè)血液中的DHA和EPA。相信這種方法在以后會(huì)得到普遍應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]李慶民，陳桂范，高實(shí)，等.氣相色譜外標(biāo)法測(cè)定魚油中EPA和DHA的含量[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1996（04）.

[2]楊玉林，芮振榮，潘希和.毛細(xì)管氣相色譜法分析雞蛋中DHA、EPA和亞麻酸的含量[J].上海預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2001（04）. 〔編輯：陳文強(qiáng)〕

摘 要：二十二碳六烯酸（DHA）、二十碳五烯酸（EPA）是人體血液中的兩種物質(zhì)，對(duì)人體的健康有著重要的影響。因此，使用科學(xué)方法對(duì)血液中DHA，EPA進(jìn)行檢測(cè)是非常重要的。使用氣相色譜儀對(duì)血液中的DHA和EPA進(jìn)行檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，詳細(xì)介紹了實(shí)驗(yàn)材料、方法和結(jié)果，最終證實(shí)，氣相色譜儀適用于檢測(cè)血液中的DHA和EPA。

關(guān)鍵詞：氣相色譜儀；血液；DHA；EPA

中圖分類號(hào)：TQ016.51 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：2095-6835（2014）03-0042-02

DHA，即二十二碳六烯酸，俗稱腦黃金，是一種對(duì)人體非常重要的不飽和脂肪酸，屬于Omega-3不飽和脂肪酸家族中的重要成員。EPA ，即二十碳五烯酸，是魚油的主要成分，屬于Ω-3系列多不飽和脂肪酸。目前測(cè)定這兩種脂肪酸的方法有很多種，而氣相色譜儀法是比較常用的一種。通過(guò)對(duì)氣相色譜儀測(cè)定血液中DHA，EPA含量進(jìn)行探討，以期更準(zhǔn)確地測(cè)定血液中DHA和EPA的含量。

1 實(shí)驗(yàn)材料的準(zhǔn)備

儀器：GC112A氣相色譜儀、WYB-Ⅱ靜音無(wú)油空氣泵、SPGN-ⅡA高純氮發(fā)生器、SPGH-300高純氫發(fā)生器、XH-B型漩渦混合器、CF-長(zhǎng)風(fēng)水浴箱、B600A型低速離心機(jī)、TFG-1200通風(fēng)柜。

試劑：甲醇、乙酸乙酯、正己烷等，均為分析純；DHA甲酯標(biāo)準(zhǔn)品、EPA甲酯標(biāo)準(zhǔn)品；內(nèi)標(biāo)溶液（1 mg/mL，正二十三碳烷酸無(wú)水乙醇溶液）；鹽酸甲醇溶液（氯化鈉與濃硫酸反應(yīng)，產(chǎn)生的氯化氫氣體導(dǎo)入甲醇中，經(jīng)標(biāo)定物質(zhì)的量濃度為1.3 mol/L）。

312名來(lái)我院產(chǎn)檢的孕婦，體檢未發(fā)現(xiàn)重大疾病，且無(wú)不良嗜好。空腹抽取靜脈血2 mL，及時(shí)分離血清，待檢。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇

毛細(xì)管柱：老化過(guò)后毛細(xì)管柱，型號(hào)FFAP，規(guī)格30 m（長(zhǎng)）×0.25 mm（內(nèi)徑）×0.25μm（液膜厚度）。柱溫：初始180 ℃，保持3.0 min，然后2 ℃/min升至250 ℃；汽化室溫度260 ℃；檢測(cè)器溫度300 ℃；分流比1∶60；進(jìn)樣量1.0 μL。

2.2 樣品處理

用定量移液器取200 μL血清放入5 mL尖底具塞試管內(nèi)，加入物質(zhì)的量濃度為4.5 mol/L的濃硫酸2滴酸化，加內(nèi)標(biāo)液10 μL，用漩渦混合器混合3 min；用乙酸乙酯漩渦混合提取2次（1 mL和0.5 mL），3 000 r/min離心3 min，合并提取液放入5 mL尖底具塞試管備用；把乙酸乙酯提取液用小流量高純氮?dú)獯蹈?；加入物質(zhì)的量濃度為1.3 mol/L的HCL-CH3OH溶液1 mL后密封，置60 ℃恒溫水浴箱中酯化30 min后，冷卻。加入分析純的正己烷1 mL，漩渦混合1 min，靜置3 min，提取正己烷層放置在5 mL尖底具塞試管內(nèi)備用，把正己烷提取液用小流量高純氮?dú)獯蹈桑?0 μL正己烷溶解。

2.3 應(yīng)用及評(píng)價(jià)

2.3.1 色譜分離條件的結(jié)果

經(jīng)過(guò)試驗(yàn)，在色譜條件下人血清游離脂肪酸甲酯達(dá)到完全分離，互不干擾。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制

質(zhì)量濃度為1 mg/mL的脂肪酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別用正己烷將DHA混合準(zhǔn)溶液稀釋成含50 μg/mL、125 μg/mL、250 μg/mL、500 μg/mL、750 μg/mL、1 000 μg/mL系列質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，將EPA混合準(zhǔn)溶液稀釋成含10 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、250 μg/mL系列質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。以各標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度X（mg/mL）為橫坐標(biāo)，對(duì)照品的峰面積Y為縱坐標(biāo)作圖，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果DHA的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.005X+0.004 5，R=0.998；EPA的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y= 0.0062X-0.003 6，R=0.996。

2.3.3 精密度實(shí)驗(yàn)

平行制備6份血清樣品，分別加入高、中、低質(zhì)量濃度（分別為250 μg/mL、100 μg/mL、50 μg/mL）的DHA甲酯、EPA甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，1 d內(nèi)各重復(fù)測(cè)定5次，記錄色譜圖，按峰面積計(jì)算天內(nèi)RSD；每天測(cè)1次，共測(cè)5 d，計(jì)算天間RSD。結(jié)果見(jiàn)表1.

2.3.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

平行制備6份樣品，在1 d內(nèi)測(cè)定2次，按峰面積除以取樣量后所得值計(jì)算RSD。結(jié)果DHA甲酯和EPA甲酯含量的RSD分別為3.00%和2.89%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一份樣品，于開(kāi)始時(shí)、第一天、第三天、第五天進(jìn)行測(cè)定，按峰面積計(jì)算RSD。結(jié)果DHA甲酯和EPA甲酯的RSD分別為2.57%和2.62%，表明該樣品溶液至少5 d內(nèi)可以保持基本穩(wěn)定。

2.3.6 回收率實(shí)驗(yàn)

取已知含量的樣品9份平行分為3組，每組分別加入高、中、低3種質(zhì)量濃度DHA甲酯、EPA甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)氣相色譜分析，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算，以測(cè)得量與添加量計(jì)算平均回收率。結(jié)果見(jiàn)表2.

2.3.7 DHA和EPA含量

取1 μL各樣品注入氣相色譜儀，以內(nèi)標(biāo)法計(jì)算DHA甲酯和EPA甲酯的含量。312名孕婦血液中DHA含量為（14.88±10.54）mg/L，變異系數(shù)（CV）為 31.56 %，EPA含量為（10.54±10.43）mg/L，CV為79.63%.

3 討論

脂肪酸的分析過(guò)程較為復(fù)雜，其中樣品的前期處理過(guò)程非常關(guān)鍵。衍生化過(guò)程中DHA、EPA的酯化效率決定了兩種物質(zhì)含量檢測(cè)的準(zhǔn)確度。目前脂肪酸酯化的方法有三氟化硼酯化法、甲醇—?dú)溲趸浭覝仵セā⒓状肌獨(dú)溲趸c加熱回流酯化法和薄層層析法。此次采用了鹽酸/甲醇溶液酯化法，DHA、EPA的萃取效率高，可完全分離，互不干擾，保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性。且以正二十三碳烷酸無(wú)水乙醇溶液為內(nèi)標(biāo)，其保留時(shí)間與DHA，EPA相近，能夠準(zhǔn)確測(cè)定DHA，EPA含量。

這種方法精密度和重復(fù)性良好，短時(shí)間內(nèi)較穩(wěn)定，并且在加標(biāo)回收率試驗(yàn)中，DHA平均回收率為92.0%～93.6%，RSD為3.0%～3.6%，EPA的平均回收率為92.3%～94.0%，RSD為2.8%～4.0%，適用于人血液中DHA，EPA的檢測(cè)。

4 結(jié)束語(yǔ)

氣相色譜儀具有分析速度快、應(yīng)用范圍廣、分離效率和分析靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，常用于測(cè)定血液中DHA和EPA的含量。結(jié)合一系列具體的實(shí)驗(yàn)研究，認(rèn)為氣相色譜儀適用于檢測(cè)血液中的DHA和EPA。相信這種方法在以后會(huì)得到普遍應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]李慶民，陳桂范，高實(shí)，等.氣相色譜外標(biāo)法測(cè)定魚油中EPA和DHA的含量[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1996（04）.

[2]楊玉林，芮振榮，潘希和.毛細(xì)管氣相色譜法分析雞蛋中DHA、EPA和亞麻酸的含量[J].上海預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2001（04）. 〔編輯：陳文強(qiáng)〕