C-MYC在涎腺腺樣囊性癌中的表達及意義

胡思思 葛明華 凌志強 陸曉筱 鄭傳銘 陳超 譚卓

C-MYC在涎腺腺樣囊性癌中的表達及意義

胡思思 葛明華 凌志強 陸曉筱 鄭傳銘 陳超 譚卓

目的 研究原癌基因C-MYC在涎腺腺樣囊性癌（SACC）中的表達及意義。方法應(yīng)用免疫組化法對54例SACC和20例正常涎腺組織石蠟標(biāo)本中C-MYC表達水平進行檢測并比較。結(jié)果20例正常涎腺組織中C-MYC均呈陰性表達，54例SACC標(biāo)本中C-MYC陽性表達43例，陽性率為79.6%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。有神經(jīng)浸潤、T4期C-MYC陽性率較無神經(jīng)浸潤、T1～3期高（P＜0.05），C-MYC的表達與年齡、性別、腫瘤部位、組織學(xué)類型、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。結(jié)論原癌基因C-MYC在SACC中高表達，與T分期及神經(jīng)侵犯有關(guān)，有望成為SACC進展及預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志之一。

腺樣囊性癌 涎腺腫瘤 C-MYC基因 免疫組化

涎腺腺樣囊性癌（SACC）約占口腔、頜面部總惡性腫瘤的1%，占所有涎腺總惡性腫瘤的21.9%[1]，可以發(fā)生在任何涎腺，其中50%～60%發(fā)生在小涎腺。SACC生長緩慢，易發(fā)生局部浸潤、神經(jīng)浸潤、原位復(fù)發(fā)以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。C-MYC原癌基因位于8q24染色體，與N-MYC、L-MYC共同歸屬于MYC家族[2]。C-MYC蛋白是一種涉及細(xì)胞分化、生長、增殖以及凋亡的轉(zhuǎn)錄因子，并且參與調(diào)節(jié)人類15%的基因[3]。C-MYC原癌基因擴增與腫瘤形成及轉(zhuǎn)歸關(guān)系密切，目前已發(fā)現(xiàn)C-MYC在多種腫瘤中呈現(xiàn)高表達和（或）擴增，如肝癌、乳腺癌、宮頸癌、前列腺癌等[4-7]。有研究發(fā)現(xiàn)MYC基因僅在9%SACC樣本中擴增[8]。本研究選取SACC的手術(shù)標(biāo)本54例，采用免疫組化法觀察組織中C-MYC的表達情況，從而研究C-MYC在SACC的表達水平和臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 選取浙江省腫瘤醫(yī)院2000-10—2009-05收治經(jīng)病理診斷確認(rèn)的SACC患者54例，男23例，女31例，年齡27～76歲，平均（49.0±0.5）歲，其中＜46歲26例，≥46歲28例。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟分期標(biāo)準(zhǔn)（2010年）[9]，T1～3期23例，T4期31例，有神經(jīng)侵犯30例，無神經(jīng)侵犯24例。根據(jù)組織學(xué)類型分型，實性型18例，篩孔型24例，導(dǎo)管型12例。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移8例（經(jīng)影像學(xué)及病理確診均為肺轉(zhuǎn)移），無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移46例。選取同期浙江省腫瘤醫(yī)院20例經(jīng)病理確認(rèn)的正常涎腺組織，男7例，女13例，年齡23～72歲，平均（51.0±0.3）歲。

1.2 方法 將標(biāo)本用甲醛固定、石蠟包埋、切片等一系列處理后進行SP免疫組化染色，包括切片脫蠟，滴加封閉液，依次加一抗（兔抗人C-MYC多克隆抗體，1∶250）、二抗（生物素標(biāo)記的羊抗兔IgG），進行DNB顯色、蘇木素復(fù)染等。將切片置于400倍顯微鏡下觀察并拍照，每張切片隨即選取10個清晰、不重復(fù)的部位，進行圖像分析，若細(xì)胞內(nèi)（細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)）出現(xiàn)棕黃色顆粒，則評定為陽性細(xì)胞，總評分標(biāo)準(zhǔn)同時考慮陽性細(xì)胞百分比和顯色程度：分別將陽性細(xì)胞百分比＜5%、5%～24%、25%～49%、50%～74%、≥75%定為0、1、2、3、4分；按著色深淺分別將無著色、淡黃色、棕黃色、棕褐色定為0、1、2、3分。將兩項分?jǐn)?shù)相加后進行綜合評分，0～2分、3～4分、5～6分、7分分別為陰性（-）、弱陽性（+）、陽性（++）、強陽性（+++）[10]。為了簡化統(tǒng)計，將陰性、弱陽性均歸為陰性（-），將陽性、強陽性均定為陽性（+）。所有切片由2位以上病理科醫(yī)師復(fù)核。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。C-MYC的表達與年齡的關(guān)系采用Pearsonχ2檢驗，C-MYC的表達與組織學(xué)類型的關(guān)系采用對數(shù)似然比法，C-MYC的表達與性別、腫瘤部位、T分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、神經(jīng)侵犯以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系采用Fisher確切概率法。

2 結(jié)果

2.1 C-MYC在SACC中的表達 C-MYC在20例正常涎腺組織中均呈陰性表達，在54例SACC組織中，陽性表達43例，陽性率79.6%（圖1），兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。

2.2 C-MYC表達與SACC生物學(xué)特征的關(guān)系 經(jīng)病理及影像學(xué)確診，8例遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者均為肺轉(zhuǎn)移。在30例有神經(jīng)浸潤的患者中，陽性表達30例；在24例無神經(jīng)浸潤的患者中，陽性表達13例；在T1～3期的23例SACC患者中，C-MYC陽性表達14例，T4期的31例患者中，C-MYC陽性表達29例。有神經(jīng)浸潤、T4期CMYC陽性率較無神經(jīng)浸潤、T1～3高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），C-MYC的表達與年齡、性別、腫瘤部位、組織學(xué)類型、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），詳見表1。

圖1 SACC中C-MYC免疫組織化學(xué)結(jié)果（A：導(dǎo)管型；B：篩孔型；C：實性型；SP染色，×400）

3 討論

C-MYC原癌基因激活方式主要包括基因擴增和染色體易位重排，在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、分化及惡性轉(zhuǎn)化中發(fā)揮作用。在關(guān)于前列腺癌的研究中，人們發(fā)現(xiàn)8號染色體的突變，包括8q24擴增（涵蓋C-MYC癌基因），與前列腺癌進展有關(guān)。Hawksworth等[7]檢測經(jīng)過顯微切割的前列腺癌細(xì)胞和配對的癌旁組織C-MYC mRNA水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)前列腺癌中C-MYC的高表達是具有生物學(xué)相關(guān)性的，所以C-MYC有望成為前列腺癌生物標(biāo)記物。研究還發(fā)現(xiàn)，C-MYC在胰腺癌[11]、神經(jīng)外胚瘤[12]中發(fā)現(xiàn)C-MYC高表達和（或）擴增。Chen等[5]證明C-MYC蛋白是一種乳腺癌易感基因BRCA1的轉(zhuǎn)錄啟動因子。像體內(nèi)很多蛋白一樣，C-MYC蛋白在調(diào)節(jié)蛋白的同時也受到其他蛋白的調(diào)節(jié)，如去泛素（DUBs）[13]。

C-MYC原癌基因具有轉(zhuǎn)化細(xì)胞的能力，這也是CMYC原癌基因發(fā)揮致癌作用的機制之一。Kaposi-Novak等[4]發(fā)現(xiàn)C-MYC原癌基因的活化與肝退變結(jié)節(jié)進展為肝細(xì)胞癌有關(guān)。腺樣囊性癌（ACC）高級別轉(zhuǎn)化（以往稱為去分化）是指低級別ACC向高級別或未分化癌進展轉(zhuǎn)變的一種現(xiàn)象[14]。有研究證明，C-MYC原癌基因與ACC高級別轉(zhuǎn)化有關(guān)[15]。Costa等[15]選取了5例高級別轉(zhuǎn)化ACC患者，采用比較基因組雜交的方法以確定高級別轉(zhuǎn)化腺樣囊性癌的表觀遺傳改變，發(fā)現(xiàn)染色體增多大部分出現(xiàn)在高級別轉(zhuǎn)化區(qū)域，而染色體缺失只出現(xiàn)在一般區(qū)域。有染色體增加的區(qū)域主要包括 8q24、17q11.2-q12、17q23和15q11-13；有染色體丟失的區(qū)域主要包括9q34、4p16、1p36.1和11q22；熒光原位雜交分析顯示C-MYC增加。該研究證明ACC高級別轉(zhuǎn)化過程進程中C-MYC基因擴增。

在54例SACC中，C-MYC原癌基因陽性表達43例，陽性率為79.6%，明顯高于正常涎腺組織。本次研究進行的C-MYC的表達與54例SACC臨床病理因素分析表明，有神經(jīng)浸潤、T4期C-MYC陽性率較無神經(jīng)浸潤、T1～3高（P＜0.05），C-MYC與T分期及神經(jīng)侵犯相關(guān)。涎腺惡性腫瘤的T分期主要依據(jù)腫瘤大小及有無腺體外侵犯，已有研究證明MYC基因擴增與乳腺癌侵襲性相關(guān)[16]，另一項研究表明C-MYC原癌基因的表達與胰腺癌神經(jīng)侵犯有關(guān)[17]，因此在SACC中，C-MYC高表達有利于腫瘤浸潤神經(jīng)，并且向高級別腫瘤進展。同時本研究統(tǒng)計分析顯示C-MYC與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，考慮樣本量太少，尚需進一步驗證。SACC較為經(jīng)典的生物標(biāo)記物包括p53和細(xì)胞周期蛋白D1[18]，C-MYC是否能成為SACC的新的生物標(biāo)記物尚需進一步研究。

表1 C-MYC表達與54例SACC臨床病理因素的相關(guān)性[例（%）]

[1]Godge P,Sharma S,Yadav M.Adenoid cystic carcinoma of the parotid gland[J].Contemp Clin Dent,2012,3(2)：223-226.

[2]Pouryazdanparast P,Brenner A,Haghighat Z,et al.The role of 8q24 copy number gains and c-MYC expression in amelanotic cutaneous melanoma[J].Mod Pathol,2012,25(9)：1221-1226.

[3]Dang C V,O'Donnell K A,Zeller K I,et al.The c-Myc target gene network[J].Semin Cancer Biol,2006,16(4)：253-264.

[4]Kaposi-Novak P,Libbrecht L,Woo H G,et al.Central role of c-Myc during malignant conversion in human hepatocarcinogenesis[J].Cancer Res,2009,69(7)：2775-2782.

[5]Chen Y,Xu J,Borowicz S,et al.c-Myc activates BRCA1 gene expression through distal promoter elements in breast cancer cells[J].BMC Cancer,2011,11：246-259.

[6]Rughooputh S,Manraj S,Eddoo R,et al.Expression of the c-myc oncogene and the presence of HPV 18：possible surrogate markers for cervical cancer[J].Br J Biomed Sci,2009,66(2)：74-78.

[7]Hawksworth D,Ravindranath L,Chen Y,et al.Overexpression of C-MYC oncogene in prostate cancer predicts biochemical recurrence[J].Prostate Cancer Prostatic Dis,2010,13(4)：311-315.

[8]Sequeiros-Santiago G,Garcia-Carracedo D,Fresno M F,et al. Oncogene amplification pattern in adenoid cystic carcinoma of the salivary glands[J].Oncol Rep,2009,21(5)：1215-1222.

[9]Sobin L H,Gospodarowicz M K,Wittekind C.International Union Against Cancer(UICC)：TNM Classification of Malignant Tumours [M].7th.New York：Wiley-Liss,2010：117-126.

[10] 葛明華,凌志強,譚卓,等.表皮生長因子受體在涎腺腺樣囊性癌中的表達及其在腫瘤侵襲中的作用[J].中華腫瘤雜志,2012,34(4)：278-280.

[11]Thakur A,Bollig A,Wu J,et al.Gene expression profiles in primary pancreatic tumors and metastatic lesions of Ela-c-myc transgenic mice[J].Mol Cancer,2008,7：11-27.

[12]Momota H,Shih A H,Edgar M A,et al.c-Myc and beta-catenin cooperate with loss of p53 to generate multiple members of the primitive neuroectodermal tumor family in mice[J].Oncogene, 2008,27(32)：4392-4401.

[13]Sacco J J,Coulson J M,Clague M J,et al.Emerging roles of deubiquitinases in cancer-associated pathways[J].IUBMB Life, 2010,62(2)：140-157.

[14]Costa A F,Altemani A,Hermsen M.Current concepts on dedifferentiation/high-grade transformation in salivary gland tumors [J].Patholog Res Int,2011,2011：325965.

[15]Seethala R R,Cieply K,Barnes E L,et al.Progressive genetic alterations of adenoid cystic carcinoma with high-grade transformation[J].Arch Pathol Lab Med,2011,135(1)：123-130.

[16]Singhi A D,Cimino-Mathews A,Jenkins R B,et al.MYC gene amplification is often acquired in lethal distant breast cancer metastases of unamplified primary tumors[J].Mod Pathol,2012, 25(3)：378-387.

[17]He C,Jiang H,Geng S,et al.Expression of c-Myc and Fas correlates with perineural invasion of pancreatic cancer[J].Int J Clin Exp Pathol,2012,5(4)：339-346.

[18]Wegner A,Wasniewska E,Jarmolowska-Jurczyszyn D,et al. The role of immunohistochemical staining(protein p53,cyclin D1)in the prognosis of adenoid cystic carcinoma salivary gland tumors[J].Otolaryngol Pol,2007,61(4)：423-427.

Expression of C-MYC in salivary adenoid cystic carcinoma and its clinicopathological significance

Objective To investigate the expression of C-MYC in salivary adenoid cystic carcinoma(SACC)and clinicopathological significance.MethodsImmunohistochemisty was used to determine tissue expression of C-MYC in 54 patients with salivary adenoid cystic carcinoma from Zhejiang Provincial Cancer Hospital and 20 samples of normal gland tissue.The clinicopathological significance of C-MYC expression was analyzed.ResultsC-MYC was positively expressed in 43 of 54 SACC tissues and none of 20 normal salivary gland tissues with the positive rate was 79.6%and 0.0%,respectively(P＜0.05).Furthermore,C-MYC expression was higher in stage T4and perineural invasion patients than those with state T1～3 and no perineural invasion patients(P＜0.05).C-MYC expression was not correlated with age,gender,tumor location,lymph node metastasis,distant metastasis and histological type(P＞0.05).ConclusionThe expression of proto-oncogene C-MYC was correlated with T staging and perineural invasion in SACC,incicating that it may be uses as a biological marker for SACC progress and prognosis.

Carcinoma Adenoid cystic salivary gland neoplasms C-MYC Immunohistochemistry

2013-10-15）

（本文編輯：嚴(yán)瑋雯）

浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生平臺重點資助計劃（2012ZDA005）；浙江省衛(wèi)生高層次創(chuàng)新人才培養(yǎng)工程基金資助[浙衛(wèi)發(fā)2008（134）]

325035 溫州醫(yī)科大學(xué)（胡思思、葛明華、陸曉筱）；浙江省腫瘤醫(yī)院、浙江省腫瘤研究所（凌志強），頭頸腫瘤外科（鄭傳銘、陳超、譚卓）

葛明華，E-mail:gemingh@163.com