痛風(fēng)患者血清P2X7R水平的檢測(cè)及其與炎癥因子的相關(guān)性研究

彭勇 陳勇 鄔秀娣 張振 于靜雅 龔瓊瑤

痛風(fēng)患者血清P2X7R水平的檢測(cè)及其與炎癥因子的相關(guān)性研究

彭勇 陳勇 鄔秀娣 張振 于靜雅 龔瓊瑤

目的 通過(guò)檢測(cè)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者血清中嘌呤能受體（P2X7R）及痛風(fēng)相關(guān)炎癥因子的水平，并分析P2X7R與痛風(fēng)相關(guān)炎癥因子的相關(guān)性，探討P2X7R在痛風(fēng)發(fā)病中的作用。 方法 采用ELISA法檢測(cè)20例痛風(fēng)初次發(fā)作患者（痛風(fēng)組，包括急性發(fā)作期和完全緩解期）、20例高尿酸血癥患者（高尿酸血癥組）及20例健康志愿者（健康對(duì)照組）血清中P2X7R、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8及IL-18水平，比較痛風(fēng)組患者急性發(fā)作期和完全緩解期各指標(biāo)間的差異，以及痛風(fēng)組患者急性發(fā)作期和完全緩解期與其他兩組間的差異；分析各組P2X7R水平與血沉、C反應(yīng)蛋白、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8及IL-18水平的相關(guān)性。 結(jié)果 痛風(fēng)組患者急性發(fā)作期的P2X7R、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8及IL-18水平均顯著高于完全緩解期、高尿酸血癥組及健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0．05）；而痛風(fēng)組患者完全緩解期、高尿酸血癥組及健康對(duì)照組的P2X7R、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8及IL-18水平組間比較均無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＞0．05）。P2X7R表達(dá)與血沉、C反應(yīng)蛋白、IL-1β及IL-18均呈正相關(guān)（均P＜0．05），而與TNF-α、IL-6及IL-8無(wú)明顯相關(guān)（P＞0．05）。 結(jié)論 痛風(fēng)患者急性發(fā)作期血清中的P2X7R表達(dá)水平升高且與血沉、C反應(yīng)蛋白、IL-1β及IL-18炎癥指標(biāo)密切相關(guān)，推測(cè)P2X7R可能是痛風(fēng)急性發(fā)作的一個(gè)關(guān)鍵因素，并可能成為預(yù)防痛風(fēng)的急性發(fā)作的新靶點(diǎn)。

痛風(fēng) 嘌呤能受體 高尿酸血癥 白細(xì)胞介素

痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎是一種由高尿酸血癥引起單鈉尿酸鹽（MSU）沉積所致的晶體相關(guān)性關(guān)節(jié)病，屬自身炎癥性疾病[1]。痛風(fēng)的發(fā)病機(jī)制盡管目前尚未十分明確，但近年來(lái)多數(shù)研究均認(rèn)為MSU晶體可以與胞膜Toll樣（TLRs）受體以及胞內(nèi)的NALP3炎癥體結(jié)合，然后通過(guò)一系列信號(hào)傳導(dǎo)途徑誘導(dǎo)白細(xì)胞介素（IL）-1β前體及IL-18等炎癥因子的轉(zhuǎn)錄、成熟及釋放從而引起痛風(fēng)的急性發(fā)作[2-4]。這雖然可以解釋MSU晶體誘發(fā)痛風(fēng)發(fā)作的機(jī)制，但并非所有高尿酸血癥的患者或者有MSU晶體沉積的患者就一定會(huì)發(fā)展為痛風(fēng)，說(shuō)明單一因素的MSU晶體沉積并不一定能誘發(fā)痛風(fēng)急性炎癥的發(fā)生。因此，近年來(lái)有學(xué)者提出嘌呤能受體（P2X7R）可能是痛風(fēng)急性發(fā)作的一個(gè)潛在調(diào)節(jié)器[5]。Eleftheriadis等[6]發(fā)現(xiàn)P2X7R抑制劑可以抑制MSU晶體誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞IL-1β的分泌和增殖。筆者通過(guò)檢測(cè)痛風(fēng)患者血清中P2X7R及痛風(fēng)相關(guān)炎癥因子的水平，分析P2X7R與各炎癥指標(biāo)的相關(guān)性，探討P2X7R與痛風(fēng)相關(guān)炎癥因子的關(guān)系及其在痛風(fēng)發(fā)病過(guò)程中的作用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 收集2013-06—2014-01我院風(fēng)濕免疫科門診和住院20例初次發(fā)病的痛風(fēng)患者及20例高尿酸血癥患者，痛風(fēng)組患者均符合1977年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)痛風(fēng)的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]，并分為急性發(fā)作期和完全緩解期兩個(gè)階段，急性發(fā)作期符合以下條件：（1）痛風(fēng)初次發(fā)作0～48h內(nèi)，臨床表現(xiàn)為寡關(guān)節(jié)腫脹疼痛，患者主訴疼痛程度評(píng)分（VRS-4法）＞5分；（2）炎癥指標(biāo)（血沉和C反應(yīng)蛋白）升高。完全緩解期為初次急性發(fā)作經(jīng)正規(guī)抗炎治療7～14 d后且符合以下條件：患者主訴疼痛程度評(píng)分＜1分，炎癥指標(biāo)（血沉和C反應(yīng)蛋白）降至正常范圍。所有患者血清尿酸水平均高于正常范圍，其中男性＞420μmol/L，女性＞360μmol/L。選取同期在我院健康體檢中心常規(guī)體檢的健康志愿者20例作為健康對(duì)照組。所有受試者均排除合并有心血管系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤、肝病、腎功能障礙、高血壓、糖尿病、其他急慢性炎癥、感染及自身免疫性疾病等其他疾病病史者。本研究得到寧波市倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有受試者均知情同意。

1.2 標(biāo)本采集 所有受試者均空腹8h以上，晨起抽取外周靜脈血5ml。室溫下待血液凝固后，3 000 r/min離心10min，收集上清液，于-80℃冰箱保存待測(cè)。痛風(fēng)組急性發(fā)作期患者采血前未進(jìn)行任何治療；痛風(fēng)組完全緩解期患者為急性發(fā)作期患者經(jīng)非甾體抗炎藥和秋水仙堿或激素正規(guī)治療7～14d后，痛風(fēng)完全緩解后取血。同時(shí)記錄3組留血當(dāng)日在我院進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室化驗(yàn)的血沉、C反應(yīng)蛋白及血尿酸水平等一般資料。

1.3 監(jiān)測(cè)方法和指標(biāo) 采用ELISA法檢測(cè)痛風(fēng)組（急性發(fā)作期和完全緩解期）、高尿酸血癥組和健康對(duì)照組血清中P2X7R、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8及IL-18水平，并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所有ELISA檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自北京索萊寶生物公司，操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SAS 9.2統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料采用表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK法。P2X7R與各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)的關(guān)系采用Pearson相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 3組間一般資料的比較 3組間年齡、性別構(gòu)成的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。痛風(fēng)急性發(fā)作期患者的血沉、C反應(yīng)蛋白及血尿酸水平均高于完全緩解期（P＜0.05），高尿酸血癥組患者血尿酸水平高于健康對(duì)照組（P＜0.05），詳見表1。

表1 3組間一般資料的比較

2.2 痛風(fēng)組患者各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)結(jié)果的比較 痛風(fēng)組患者急性發(fā)作期血清中P2X7R水平顯著高于完全緩解期，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；痛風(fēng)組患者急性發(fā)作期血清中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8及IL-18等炎癥因子水平也均顯著高于完全緩解期，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳見圖1。

2.3 3組各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)結(jié)果的比較 痛風(fēng)組患者急性發(fā)作期血清中P2X7R、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8及IL-18水平均顯著高于高尿酸血癥組和健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；而痛風(fēng)組患者完全緩解期血清中P2X7R、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8及IL-18水平與高尿酸血癥組及健康對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），詳見表2。

2.4 P2X7R與其他炎癥指標(biāo)的相關(guān)性 相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，各組P2X7R水平與血沉、C反應(yīng)蛋白、IL-1β及IL-18水平呈正相關(guān)（r=0.58、0.671、0.451、0.796，均P＜0.05），而與TNF-α、IL-6及IL-8水平均無(wú)明顯相關(guān)性（r= 0.305、0.373、0.420，均P＞0.05）。

3 討論

圖1 痛風(fēng)組急性發(fā)作期與完全緩解期各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)結(jié)果的比較

表2 3組間各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)結(jié)果的比較（pg/ml）

早在20世紀(jì)60年代有學(xué)者發(fā)現(xiàn)在人和狗的關(guān)節(jié)內(nèi)注射MSU晶體后，注射關(guān)節(jié)會(huì)出現(xiàn)類似于痛風(fēng)急性發(fā)作的臨床表現(xiàn)，MSU晶體沉積也因此被認(rèn)為是痛風(fēng)的關(guān)鍵致病因素。目前的研究已證實(shí)長(zhǎng)期血尿酸增高而引起的MSU晶體沉積可以被NALP3炎癥體識(shí)別，然后誘導(dǎo)體內(nèi)IL-1β的轉(zhuǎn)錄、成熟及釋放從而誘發(fā)痛風(fēng)；而IL-1β則被認(rèn)為是痛風(fēng)炎癥發(fā)生的核心因子[8]。但一項(xiàng)來(lái)自歐洲的流行病學(xué)調(diào)查顯示血尿酸水平＞590μmol/L的高尿酸血癥患者痛風(fēng)5年累積患病風(fēng)險(xiǎn)也僅為30.5%[9]。臨床上發(fā)現(xiàn)相當(dāng)一部分高尿酸血癥患者甚至有MSU沉積的患者也并沒有發(fā)展為痛風(fēng)，說(shuō)明單一因素的MSU沉積還不足以誘導(dǎo)足夠數(shù)量的IL-1β釋放來(lái)誘發(fā)痛風(fēng)的急性發(fā)作。因此，痛風(fēng)急性發(fā)作可能還需要其他因素的共同參與。

目前普遍觀點(diǎn)認(rèn)為劇烈運(yùn)動(dòng)、寒冷刺激、酗酒及暴飲暴食等誘因是通過(guò)引起血液中血尿酸水平升高而誘發(fā)痛風(fēng)急性發(fā)作，但目前有學(xué)者提出這些誘因可能是通過(guò)引起體內(nèi)ATP水平劇烈變化而參與痛風(fēng)急性發(fā)作，而并非通過(guò)提高血尿酸水平[5]。ATP可以與其天然受體P2X7R結(jié)合促使通道開放引起K+外流，與NALP3炎癥體共同作用刺激IL-1β的大量成熟及釋放[10-11]。P2X7R作為一個(gè)配體門控離子通道受體，且大量表達(dá)于巨噬細(xì)胞及單核細(xì)胞等炎癥細(xì)胞。目前已經(jīng)在多種疾病研究中發(fā)現(xiàn)P2X7R參與了包括IL-1β、TNF-α、IL-6及IL-18等炎癥因子的產(chǎn)生和釋放[12-14]，而這些炎癥因子也參與痛風(fēng)炎癥過(guò)程。

本次研究通過(guò)檢測(cè)痛風(fēng)組（急性發(fā)作期和完全緩解期）、高尿酸血癥組和健康對(duì)照組血清中P2X7R水平發(fā)現(xiàn)，痛風(fēng)患者初次急性發(fā)作期P2X7R水平顯著高于完全緩解期，同時(shí)也顯著高于高尿酸血癥組和健康對(duì)照組，推測(cè)P2X7R可能參與了痛風(fēng)的急性發(fā)作。此外，對(duì)P2X7R與各個(gè)炎癥指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)分析，分析結(jié)果表明P2X7R與血沉及C反應(yīng)蛋白呈正相關(guān)，這進(jìn)一步表明P2X7R可能參與痛風(fēng)炎癥過(guò)程。同時(shí)，筆者還發(fā)現(xiàn)P2X7R水平與IL-1β及IL-18水平呈正相關(guān)，而與TNF-α、IL-6及IL-8則無(wú)明顯相關(guān)，推測(cè)P2X7R可能與IL-1β及IL-18的產(chǎn)生及釋放有關(guān)。

綜上所述，P2X7R在痛風(fēng)急性發(fā)作期的表達(dá)升高且與痛風(fēng)炎癥密切相關(guān)，還可能參與了IL-1β及IL-18等痛風(fēng)相關(guān)炎癥因子的產(chǎn)生和釋放；因此，推測(cè)P2X7R可能在痛風(fēng)發(fā)病過(guò)程起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。本研究為進(jìn)一步研究P2X7R在痛風(fēng)發(fā)病過(guò)程中的意義提供了實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)，也為急性痛風(fēng)發(fā)作的臨床防治提供了一條可行的新策略。本文對(duì)P2X7R在痛風(fēng)發(fā)病過(guò)程中的作用僅進(jìn)行初步研究，且樣本量較小，故仍需進(jìn)一步進(jìn)行大樣本及機(jī)制方面的深入研究。

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Serum P2X7receptor levels and its correlation with inflammatory factors in gout patients

Objective To determine serum levels of P2X7receptor and inflammatory factors and to analyze their correlation in gout patients．Methods Serum levels of P2X7receptor,IL-1β,TNF-α,IL-6,IL-8 and IL-18 were detected by ELISA method in 20 patents with gout,20 patents with hyperuricemia and 20 healthy subjects,the correlations of serum P2X7receptor with inflammatory factors were analyzed．Results P2X7receptor,IL-1β,TNF-α,IL-6,IL-8 and IL-18 levels in gout patients of acute attack stage were significantly higher than those in complete remission period(P＜0．05),and also higher than those in hyperuricemia group and healthy control group(P＜0．05)．There were no significant differences in P2X7receptor,IL-1β,TNF-α, IL-6,IL-8 and IL-18 among patients with complete remission period,hyperuricemia and healthy controls(P＞0．05)．The level of serum P2X7receptor was positively correlated with ESR,CRP,IL-1β and IL-18(P＜0．05),but not correlated with TNF-α,IL-6 and IL-8(P＞0．05)． Conclusion The levels of P2X7receptor in gout patients of acute attack stage are elevated,and closely correlated with inflammatory factors,indicating that P2X7receptor may be a key factor in acute attack stage of gout,and may become a new target for prevention of acute attack in gout patients．

Gout P2X7receptor Hyperuricemia Interleukin

2014-08-26）

（本文編輯：嚴(yán)瑋雯）

（本文由浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)風(fēng)濕病學(xué)分會(huì)推薦）

315010 寧波市第二醫(yī)院風(fēng)濕免疫科通信作者：陳勇，E-mail：nbdeyycy@163.com