• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    黃瓜白粉病拮抗細(xì)菌的篩選鑒定及其生防效果

    2019-03-22 12:56:56王海利張曉慷王瀅秀韓金濤張新剛
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年24期
    關(guān)鍵詞:生防白粉病防治效果

    王海利,張曉慷,王瀅秀,韓金濤,張新剛

    (山東省農(nóng)藥科學(xué)研究院/山東省化學(xué)農(nóng)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東濟(jì)南 250100)

    白粉病別稱白毛病,是一種廣泛發(fā)生的世界性病害。在我國(guó),夏秋露地和春保護(hù)地黃瓜每年都因白粉病的發(fā)生造成大量減產(chǎn)[1]。黃瓜白粉病是由葫蘆科白粉菌(Erysiphecucur bitacearum)或單絲殼白粉菌(Sphacrotheca fuliginea)引起的[2],病原菌主要通過氣流傳播,具有潛育期短、再侵染頻繁、流行性強(qiáng)等特點(diǎn)[3]。目前,防治白粉病的主要手段是化學(xué)殺菌劑,但由于白粉病病菌繁殖率很高,同一流行季節(jié)可繁殖多代,加之內(nèi)吸性殺菌劑大多作用位點(diǎn)單一,病菌在藥劑的選擇壓力下極易產(chǎn)生抗藥性,國(guó)內(nèi)外已有黃瓜白粉病病菌對(duì)苯并咪唑類、甾醇生物合成抑制劑類(EBIs)、有機(jī)磷類、羥基嘧啶類、甲氧基丙烯酸酯類、苯氧基喹啉等6類殺菌劑產(chǎn)生抗藥性的研究報(bào)道[4]。隨著環(huán)境法規(guī)制定普及和公眾環(huán)保意識(shí)的加強(qiáng),減少化學(xué)農(nóng)藥的使用,減輕生態(tài)環(huán)境壓力保持農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展是未來農(nóng)業(yè)的發(fā)展趨勢(shì)[5]。

    近年來,利用微生物防治黃瓜白粉病的研究國(guó)內(nèi)外均有報(bào)道,Romero等研究3種微生物對(duì)黃瓜白粉病的防效,結(jié)果表明,枯草芽孢桿菌對(duì)瓜類白粉病的防治效果接近于2種重寄生菌和醚菊農(nóng)藥對(duì)照[6]。芽孢桿菌作為重要的生防資源已廣泛用于防治植物病害[7-11]。本研究通過對(duì)1株具有黃瓜白粉病生防效果的細(xì)菌進(jìn)行初步鑒定,確定其遺傳地位。并對(duì)盆栽黃瓜白粉病的防治效果進(jìn)行試驗(yàn)驗(yàn)證,分別與商品化生物農(nóng)藥進(jìn)行對(duì)比,以期為該產(chǎn)品的進(jìn)一步開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    供試黃瓜品種為寶楊5號(hào),為易感病品種,購(gòu)自上海種子市場(chǎng)。

    1.1.2 培養(yǎng)基 菌種分離篩選和活化培養(yǎng)基:3 g牛肉膏,10 g蛋白胨,5 g NaCl,15 g瓊脂,1 000 mL自來水,pH值為7.2~7.4。

    種子菌液制備和菌種發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基:3 g牛肉膏,10 g蛋白胨,5 g NaCl,1 000 mL自來水,pH值為7.2~7.4。

    1.1.3 對(duì)照藥劑 100億CFU/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑,購(gòu)自美國(guó)拜沃股份有限公司。

    1.1.4 試驗(yàn)儀器 主要儀器有搖床、培養(yǎng)箱、潔凈工作臺(tái)、高壓滅菌鍋,均購(gòu)自上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 拮抗細(xì)菌的分離純化 采用梯度稀釋平板涂布法分離黃瓜白粉病根際土壤中的細(xì)菌[12],根據(jù)平板上菌落形態(tài)、顏色等挑取單菌落進(jìn)行純培養(yǎng)。

    1.2.2 種子菌液的制備 將分離保存的菌種轉(zhuǎn)接到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板上,在28℃溫度條件下培養(yǎng)48 h進(jìn)行活化,活化后挑取部分菌落接于裝液量為100 mL的250 mL錐形瓶的種子菌液制備培養(yǎng)基中,30℃,180 r/min振蕩培養(yǎng)48 h即為種子菌液。

    1.2.3 發(fā)酵液的制備 將發(fā)酵好的種子液按5%(體積比)的比例接種到裝有200 mL菌種發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基的500 mL錐形瓶中,30℃,180 r/min振蕩培養(yǎng)72 h備用。

    1.2.4 拮抗細(xì)菌的篩選 以黃瓜白粉病病原菌為指示菌,采用活體生測(cè)法,篩選對(duì)其有效的拮抗細(xì)菌。在溫室條件下,挑選飽滿的黃瓜種子播種到小花盆里,保濕,置于25℃室溫下光照培養(yǎng)。待黃瓜幼苗長(zhǎng)出2張真葉時(shí),挑選長(zhǎng)勢(shì)一致的黃瓜苗,將分離篩選的細(xì)菌發(fā)酵液濃度調(diào)至1010CFU/mL,噴灑于黃瓜葉片上,待藥液晾干后接種孢子濃度大概為10萬個(gè)/mL左右的懸浮液,用接種噴霧器在黃瓜苗上均勻噴霧接種,大概接種2 h(為確定篩選的拮抗細(xì)菌是否具有預(yù)防效果,于接種白粉病菌前24 h進(jìn)行發(fā)酵液的噴灑)后試材自然風(fēng)干,然后移至恒溫(24℃左右)室燈光下,培養(yǎng)期間每天保溫、保濕。于1、2周后按黃瓜白粉病的常規(guī)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)及方法計(jì)算病情指數(shù)和防治效果,每個(gè)處理重復(fù)3次。對(duì)照藥劑為枯草芽孢桿菌可濕性粉劑,以清水作為空白對(duì)照。

    醬油主要由大豆、淀粉、和小麥粉經(jīng)過發(fā)酵而成,這些成分在被人體吃下之后都會(huì)變成無色的氨基酸和多肽混合物,而其黑色來源于其中所含的焦糖色素,并不會(huì)促進(jìn)黑色素形成也不會(huì)沉積在皮膚或傷口上,不必?fù)?dān)心變黑。

    1.2.5 生防菌株SDNY-038對(duì)黃瓜白粉病溫室盆栽生物活性的檢測(cè) 采取盆栽的方法,檢測(cè)生防菌株SDNY-038試驗(yàn)樣品對(duì)黃瓜白粉病的活體抑制效果。檢測(cè)方法同拮抗細(xì)菌的篩選。

    1.2.6 生防菌株SDNY-038的鑒定

    1.2.6.1 生防菌株SDNY-038的培養(yǎng)性狀與形態(tài)特征 在活化培養(yǎng)基上觀察菌株SDNY-038的生長(zhǎng)情況,菌落形態(tài)采用革蘭氏染色,按常規(guī)操作試驗(yàn)[13]。

    1.2.6.2 生防菌株SDNY-038的16S rDNA片段的擴(kuò)增與序列分析 菌株基因組DNA的提取參照Sambrook等的方法[14];引物為擴(kuò)增細(xì)菌16S rDNA的通用引物[15],正向引物:5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′,反向引物:5′-ACGGCTA CCTTGTTACGACT-3′。PCR產(chǎn)物由山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院測(cè)序中心進(jìn)行測(cè)序,將結(jié)果在GenBank中進(jìn)行Blast同源序列檢索。采用ClustalX 2.0軟件進(jìn)行多序列匹配排列,用系統(tǒng)發(fā)生推斷軟件包MEGA 3.1轉(zhuǎn)化成Mega格式后進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析。采用Kimura-2-Parameter模型,用鄰接法(neighborjoining,簡(jiǎn)稱NJ)法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,自舉分析10 000次重復(fù)檢測(cè)分子系統(tǒng)樹的置信度,最后確定菌株SDNY-038的分類地位。

    1.3 數(shù)據(jù)分析

    采用Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析以及差異性分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 拮抗細(xì)菌的分離篩選

    采用活體生測(cè)方法對(duì)土壤中分離得到的細(xì)菌進(jìn)行篩選,對(duì)黃瓜白粉病致病菌有防效的菌株相對(duì)較少,拮抗能力較強(qiáng)的菌株只占2.5%左右,有較弱拮抗作用的菌株占5%,其他均無防效。選取拮抗能力較強(qiáng)的1株拮抗細(xì)菌編號(hào)為SDNY-038,經(jīng)過多次復(fù)篩,均表現(xiàn)出較好的生防效果,提前2 h噴灑和提前24 h噴灑與清水對(duì)照相比均具有顯著性差異,提前2 h噴灑在7、14 d后的防治效果分別為87.45%、87.35%,提前24 h噴灑在7、14 d后的防治效果分別為57.84%、41.70%,提前2 h噴灑比提前24 h噴灑在7、14 d后分別提高29.61、45.65百分點(diǎn)(圖1)。

    2.2 生防菌株SDNY-038對(duì)黃瓜白粉病盆栽防治效果

    盆栽測(cè)定結(jié)果顯示,對(duì)生防菌株SDNY-038在施藥7 d后的噴施效果進(jìn)行調(diào)查,生防菌株SDNY-038的病情指數(shù)和防治效果分別為3.31、78.00%,防治效果比陽性對(duì)照藥劑高出59.93百分點(diǎn),14 d后的病情指數(shù)和防治效果分別為12.11、84.67%,防治效果比陽性對(duì)照藥劑高出66.37百分點(diǎn),病情指數(shù)與防治效果與空白對(duì)照相比均呈顯著性差異(圖2)。

    2.3 生防菌株SDNY-038的形態(tài)特征以及生理生化鑒定結(jié)果

    生防菌株SDNY-038在基礎(chǔ)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)迅速,菌落呈圓形,乳白色,不透明,無皺褶,邊緣不規(guī)則,菌落表面光滑,濕潤(rùn),經(jīng)革蘭氏染色鑒定為革蘭氏陽性菌,能水解淀粉和還原硝酸鹽,葡萄糖、木糖、甘露糖以及檸檬酸鹽生長(zhǎng)試驗(yàn)反應(yīng)均為陽性。

    2.4 生防菌株SDNY-038的16S rDNA的序列分析和系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建

    經(jīng)測(cè)序,生防菌株SDNY-038的16S rDNA全長(zhǎng)序列為1 471 bp,在GenBank數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行Blast比對(duì),結(jié)合進(jìn)化樹(圖3)分析,結(jié)果顯示其與芽孢桿菌屬(Bacillus sp.)相關(guān)家族親緣關(guān)系最為接近,同源性達(dá)到99%。結(jié)合相關(guān)的形態(tài)特征以及生理生化鑒定結(jié)果,可以初步判斷生防菌株SDNY-038為芽孢桿菌。

    3 討論與結(jié)論

    近幾年,隨著國(guó)家對(duì)環(huán)境安全越來越重視,化學(xué)農(nóng)藥新品種的登記以及產(chǎn)品生產(chǎn)的門檻越來越高,生物農(nóng)藥的研制成為大勢(shì)所趨,發(fā)掘高效低毒的生物農(nóng)藥并不容易,盡管過去幾年人們開發(fā)的生物農(nóng)藥數(shù)不勝數(shù),但真正有較好防治效果的產(chǎn)品是少之又少。對(duì)黃瓜白粉病具有防效的生防菌在國(guó)內(nèi)外有不少的報(bào)道[16-18],說明生防菌用于黃瓜白粉病的防治具有較大的發(fā)掘潛力。

    通過對(duì)黃瓜白粉病根際土壤菌進(jìn)行分離純化,以及活體黃瓜白粉生測(cè)試驗(yàn)篩選,發(fā)現(xiàn)1株對(duì)白粉病具有較好防治效果的生防細(xì)菌,通過對(duì)該菌株16S rDNA進(jìn)行鑒定,結(jié)合相關(guān)的生理生化特征,發(fā)現(xiàn)其與芽孢桿菌屬于同一屬,具有較好的預(yù)防保護(hù)效果,在對(duì)幼苗處理7、14 d后的防效分別達(dá)到78.00%、84.67%,持效期較長(zhǎng),具有較好的應(yīng)用開發(fā)前景。

    猜你喜歡
    生防白粉病防治效果
    用料不當(dāng)致牛病 如何防治效果好
    一到春季就流行 蔬菜白粉病該咋防
    20%啶蟲脒可溶液劑對(duì)蘋果繡線菊蚜防治效果
    河北果樹(2020年4期)2020-11-26 06:04:46
    生防芽孢桿菌產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)的特性與純化方法的研究進(jìn)展
    拉薩設(shè)施月季白粉病的發(fā)生與防治
    西藏科技(2016年8期)2016-09-26 09:00:21
    巨大芽孢桿菌L2菌株生防機(jī)制的初步研究
    黃瓜白粉病的發(fā)生與防治
    縮宮素聯(lián)合米索前列醇用于引產(chǎn)后出血的防治效果觀察
    不同殺菌劑對(duì)梨樹腐爛病的防治效果
    八十三團(tuán)紅提葡萄白粉病的發(fā)生與防治
    夜夜爽天天搞| 黄色日韩在线| 91久久精品电影网| 日日撸夜夜添| 精品久久久久久久末码| 欧美国产日韩亚洲一区| 成年版毛片免费区| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 99九九线精品视频在线观看视频| 99热6这里只有精品| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产午夜福利久久久久久| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 日韩成人av中文字幕在线观看 | 小说图片视频综合网站| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 最近中文字幕高清免费大全6| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲第一电影网av| 97超碰精品成人国产| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 亚洲av.av天堂| 丝袜美腿在线中文| 亚洲美女搞黄在线观看 | 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 午夜福利成人在线免费观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 3wmmmm亚洲av在线观看| 亚洲高清免费不卡视频| 国产久久久一区二区三区| 黄色配什么色好看| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 深爱激情五月婷婷| 男人狂女人下面高潮的视频| 亚洲欧美日韩东京热| 国产精品无大码| 激情 狠狠 欧美| 亚洲人与动物交配视频| 日韩欧美在线乱码| 亚洲乱码一区二区免费版| 淫秽高清视频在线观看| 国产精品一二三区在线看| 午夜视频国产福利| 人人妻人人澡欧美一区二区| 一级毛片久久久久久久久女| 成熟少妇高潮喷水视频| 五月玫瑰六月丁香| 日韩高清综合在线| 国产在线精品亚洲第一网站| 一进一出抽搐gif免费好疼| 天堂动漫精品| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 成人欧美大片| 午夜福利在线在线| 亚洲av第一区精品v没综合| 啦啦啦啦在线视频资源| 99久久九九国产精品国产免费| 美女大奶头视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清| aaaaa片日本免费| 久久久久久久久中文| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 少妇的逼好多水| 成人av在线播放网站| 欧美潮喷喷水| 亚洲真实伦在线观看| 床上黄色一级片| 日韩av在线大香蕉| 日本一二三区视频观看| 99久久精品国产国产毛片| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 婷婷色综合大香蕉| 欧美激情在线99| 在线看三级毛片| 91狼人影院| 村上凉子中文字幕在线| 免费看美女性在线毛片视频| 中出人妻视频一区二区| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲五月天丁香| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 欧美最新免费一区二区三区| 国产一区亚洲一区在线观看| 一进一出抽搐动态| 日韩在线高清观看一区二区三区| 婷婷色综合大香蕉| 国产亚洲av嫩草精品影院| 最近最新中文字幕大全电影3| 插逼视频在线观看| 亚洲av免费在线观看| 久久午夜亚洲精品久久| 日韩欧美在线乱码| 一区福利在线观看| 久久久久国内视频| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲欧美日韩无卡精品| 午夜老司机福利剧场| 十八禁国产超污无遮挡网站| 97碰自拍视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 成人亚洲精品av一区二区| 精品福利观看| 欧美精品国产亚洲| 99热这里只有是精品在线观看| 成人永久免费在线观看视频| 日韩制服骚丝袜av| 给我免费播放毛片高清在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 久久国产乱子免费精品| 一区二区三区免费毛片| 麻豆一二三区av精品| 国产av在哪里看| 日韩欧美免费精品| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 观看美女的网站| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产精品乱码一区二三区的特点| 久久精品国产清高在天天线| 在现免费观看毛片| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 日本五十路高清| 欧美日韩乱码在线| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| or卡值多少钱| 亚洲人成网站在线播| 日本成人三级电影网站| 天堂动漫精品| 免费看日本二区| 网址你懂的国产日韩在线| 99热网站在线观看| 美女 人体艺术 gogo| 在线播放无遮挡| 少妇被粗大猛烈的视频| 精品欧美国产一区二区三| 18+在线观看网站| 国产精品福利在线免费观看| 久久久久国内视频| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲乱码一区二区免费版| 99久久无色码亚洲精品果冻| 99久久精品一区二区三区| 99国产极品粉嫩在线观看| av视频在线观看入口| 老女人水多毛片| 男女啪啪激烈高潮av片| 欧美在线一区亚洲| av在线老鸭窝| 色在线成人网| 亚洲精品国产av成人精品 | 69av精品久久久久久| 99久久成人亚洲精品观看| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲七黄色美女视频| 99久久成人亚洲精品观看| 国产高清视频在线播放一区| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲av不卡在线观看| 在线a可以看的网站| 亚洲18禁久久av| 最近的中文字幕免费完整| 搞女人的毛片| 国产亚洲91精品色在线| 特大巨黑吊av在线直播| 国产高潮美女av| 天美传媒精品一区二区| 国内精品久久久久精免费| 神马国产精品三级电影在线观看| 日韩欧美精品免费久久| 国产激情偷乱视频一区二区| 五月伊人婷婷丁香| 成人性生交大片免费视频hd| 一级黄色大片毛片| 观看美女的网站| 久久人妻av系列| 大型黄色视频在线免费观看| 99riav亚洲国产免费| 可以在线观看毛片的网站| 久久人人精品亚洲av| 午夜老司机福利剧场| 久久久久久久久中文| 成人国产麻豆网| 日韩亚洲欧美综合| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 五月玫瑰六月丁香| 最近手机中文字幕大全| 亚洲成人久久性| 国产精品三级大全| 中文字幕免费在线视频6| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 亚洲最大成人av| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲av中文av极速乱| 欧美zozozo另类| 淫妇啪啪啪对白视频| 欧美又色又爽又黄视频| 亚洲av免费高清在线观看| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲自偷自拍三级| 中文字幕免费在线视频6| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产成人a区在线观看| 国产男靠女视频免费网站| 一边摸一边抽搐一进一小说| 91在线观看av| 国产男人的电影天堂91| 老司机午夜福利在线观看视频| 久久精品91蜜桃| 俄罗斯特黄特色一大片| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 一级黄色大片毛片| 黄片wwwwww| 久久久国产成人免费| 黄色配什么色好看| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 久久人妻av系列| 亚洲成人精品中文字幕电影| 亚洲四区av| 国产精品亚洲美女久久久| 久久久久久久久久黄片| 欧美极品一区二区三区四区| av天堂在线播放| 99riav亚洲国产免费| 色5月婷婷丁香| 久久中文看片网| 性欧美人与动物交配| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 亚洲欧美清纯卡通| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 欧美成人精品欧美一级黄| 国产极品精品免费视频能看的| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲在线自拍视频| 美女免费视频网站| 精品人妻熟女av久视频| 亚洲国产高清在线一区二区三| 九九热线精品视视频播放| 色尼玛亚洲综合影院| 人人妻人人澡欧美一区二区| 一进一出抽搐动态| 99久久九九国产精品国产免费| 久久精品国产清高在天天线| av国产免费在线观看| av中文乱码字幕在线| 久久久精品欧美日韩精品| 免费在线观看成人毛片| 国产伦一二天堂av在线观看| 婷婷精品国产亚洲av在线| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲欧美成人精品一区二区| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 18禁在线播放成人免费| 国产v大片淫在线免费观看| 伊人久久精品亚洲午夜| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产单亲对白刺激| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 此物有八面人人有两片| 欧美性感艳星| 欧美成人精品欧美一级黄| 两个人的视频大全免费| 国产亚洲av嫩草精品影院| 日韩精品中文字幕看吧| 免费大片18禁| 18+在线观看网站| 国产精品人妻久久久影院| 成熟少妇高潮喷水视频| 一级a爱片免费观看的视频| 最近的中文字幕免费完整| 欧美三级亚洲精品| 一边摸一边抽搐一进一小说| 亚洲av五月六月丁香网| 狠狠狠狠99中文字幕| 18+在线观看网站| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产精品一区二区免费欧美| 色吧在线观看| 校园春色视频在线观看| 精华霜和精华液先用哪个| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国模一区二区三区四区视频| 黄色日韩在线| 男女视频在线观看网站免费| 日韩精品中文字幕看吧| 亚洲av熟女| 91狼人影院| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 成年av动漫网址| 欧美日韩在线观看h| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产成人精品久久久久久| 天天躁日日操中文字幕| 色综合色国产| 久久韩国三级中文字幕| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 午夜亚洲福利在线播放| 一个人看视频在线观看www免费| 国产精品爽爽va在线观看网站| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 高清日韩中文字幕在线| 午夜久久久久精精品| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产视频内射| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 欧美xxxx性猛交bbbb| 悠悠久久av| 俺也久久电影网| 国语自产精品视频在线第100页| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲,欧美,日韩| 中文字幕熟女人妻在线| 亚洲中文日韩欧美视频| a级毛片免费高清观看在线播放| 日韩大尺度精品在线看网址| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 亚洲三级黄色毛片| 国产成年人精品一区二区| 高清毛片免费看| 成人三级黄色视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 此物有八面人人有两片| aaaaa片日本免费| 又粗又爽又猛毛片免费看| 精品一区二区三区视频在线| 国内精品美女久久久久久| 午夜福利视频1000在线观看| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 一级a爱片免费观看的视频| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲真实伦在线观看| 51国产日韩欧美| 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久九九热精品免费| 在线天堂最新版资源| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲色图av天堂| 岛国在线免费视频观看| 人人妻人人看人人澡| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 哪里可以看免费的av片| 成人一区二区视频在线观看| 床上黄色一级片| 青春草视频在线免费观看| 免费电影在线观看免费观看| 老女人水多毛片| 99久久中文字幕三级久久日本| 在线播放国产精品三级| 在线免费观看的www视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 黑人高潮一二区| 亚洲人成网站高清观看| 久久精品影院6| 中文字幕久久专区| 亚洲国产欧美人成| 看黄色毛片网站| 久久久精品94久久精品| 午夜日韩欧美国产| 免费观看人在逋| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 精品日产1卡2卡| 日韩中字成人| 亚洲图色成人| 国产私拍福利视频在线观看| 成人二区视频| 国产免费一级a男人的天堂| 搡老岳熟女国产| 男人舔女人下体高潮全视频| 春色校园在线视频观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 色哟哟·www| 成人一区二区视频在线观看| 露出奶头的视频| 赤兔流量卡办理| 久久久久久久午夜电影| 国产午夜精品论理片| 免费观看人在逋| 亚洲最大成人中文| 欧美成人一区二区免费高清观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 精品免费久久久久久久清纯| 精品福利观看| 99久久精品国产国产毛片| 日本黄大片高清| 国产淫片久久久久久久久| 插逼视频在线观看| 精品一区二区三区视频在线| 男人舔奶头视频| 久久99热6这里只有精品| 欧美日韩在线观看h| 99久国产av精品| 黄片wwwwww| 内地一区二区视频在线| 日日撸夜夜添| 99精品在免费线老司机午夜| 综合色av麻豆| 久久久久久久久久成人| 夜夜爽天天搞| 亚洲欧美精品自产自拍| 美女 人体艺术 gogo| 欧美日本亚洲视频在线播放| 校园春色视频在线观看| 免费电影在线观看免费观看| av专区在线播放| 久久久精品欧美日韩精品| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲五月天丁香| 女同久久另类99精品国产91| 在现免费观看毛片| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲一区高清亚洲精品| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 精品久久久久久久久久久久久| 国产精品av视频在线免费观看| 国产精品伦人一区二区| 男女啪啪激烈高潮av片| 老司机影院成人| 亚洲国产精品成人久久小说 | 亚洲欧美日韩高清在线视频| 一个人看视频在线观看www免费| 久久久精品94久久精品| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲精品色激情综合| 国产乱人偷精品视频| eeuss影院久久| 成人鲁丝片一二三区免费| 婷婷精品国产亚洲av在线| a级毛色黄片| 欧美三级亚洲精品| 99久久精品国产国产毛片| 久久精品91蜜桃| 99久国产av精品国产电影| 网址你懂的国产日韩在线| 男女之事视频高清在线观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 十八禁网站免费在线| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲乱码一区二区免费版| 秋霞在线观看毛片| 一区二区三区高清视频在线| 一级毛片我不卡| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 深夜精品福利| 亚洲国产精品国产精品| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 久久精品91蜜桃| 国产精品永久免费网站| 亚洲成人精品中文字幕电影| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 我的女老师完整版在线观看| 真人做人爱边吃奶动态| 两个人视频免费观看高清| 九九在线视频观看精品| 一进一出抽搐动态| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲人成网站高清观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 麻豆av噜噜一区二区三区| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 色综合亚洲欧美另类图片| 国产精品电影一区二区三区| 一级毛片久久久久久久久女| 女同久久另类99精品国产91| 国产麻豆成人av免费视频| 国产精品无大码| 国产乱人偷精品视频| 亚洲内射少妇av| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 最近手机中文字幕大全| 国产av在哪里看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 亚洲性久久影院| 午夜福利在线观看吧| 老熟妇仑乱视频hdxx| 91精品国产九色| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 国产一级毛片七仙女欲春2| 韩国av在线不卡| 热99在线观看视频| 99热精品在线国产| 日日干狠狠操夜夜爽| 精品熟女少妇av免费看| 色视频www国产| 99热网站在线观看| 18+在线观看网站| 毛片一级片免费看久久久久| 成人av一区二区三区在线看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产精品一区二区三区四区久久| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产精华一区二区三区| 村上凉子中文字幕在线| av在线老鸭窝| 免费大片18禁| 精品熟女少妇av免费看| 干丝袜人妻中文字幕| 久久中文看片网| 亚洲欧美成人精品一区二区| 成人无遮挡网站| 精品人妻偷拍中文字幕| 亚洲美女搞黄在线观看 | 久久久久国产网址| 国内精品宾馆在线| 久久国产乱子免费精品| 午夜精品一区二区三区免费看| 日韩欧美免费精品| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 色视频www国产| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲久久久久久中文字幕| 长腿黑丝高跟| 婷婷亚洲欧美| 麻豆成人午夜福利视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产伦精品一区二区三区四那| 欧美在线一区亚洲| 国产乱人视频| 免费黄网站久久成人精品| 国产av不卡久久| 亚洲国产精品合色在线| 乱系列少妇在线播放| 精品国产三级普通话版| 久久久久久久久中文| 久久午夜福利片| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国国产精品蜜臀av免费| 国产精品1区2区在线观看.| 午夜激情福利司机影院| 久久精品国产清高在天天线| 欧美日韩国产亚洲二区| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产男靠女视频免费网站| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 日本免费a在线| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 免费看日本二区| 久久人人爽人人爽人人片va| 天天一区二区日本电影三级| 日韩亚洲欧美综合| 男人舔女人下体高潮全视频| 成人精品一区二区免费| 最后的刺客免费高清国语| 国产精品福利在线免费观看| 成人美女网站在线观看视频| av在线播放精品| 国产爱豆传媒在线观看| 99热这里只有是精品在线观看| 人人妻人人澡欧美一区二区| 99久国产av精品| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产精品一及| 国内精品久久久久精免费| 色哟哟·www| 日韩成人伦理影院| 精品免费久久久久久久清纯| 国产高清视频在线播放一区| 日本在线视频免费播放| 黄色视频,在线免费观看| 国产一级毛片七仙女欲春2| 亚洲av电影不卡..在线观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 免费av不卡在线播放| 久久99热6这里只有精品| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产日本99.免费观看| 亚洲av免费在线观看| 黄色一级大片看看| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 国产精品久久久久久久久免| 国产精品日韩av在线免费观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 性欧美人与动物交配| 精品久久久久久久久av| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲国产欧美人成| 国产熟女欧美一区二区| 老司机福利观看| 中文字幕熟女人妻在线| 国内精品美女久久久久久| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产精品女同一区二区软件| 国产精品综合久久久久久久免费| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 亚洲欧美成人精品一区二区| 日本欧美国产在线视频| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 午夜视频国产福利| 美女cb高潮喷水在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 在线播放无遮挡| av女优亚洲男人天堂| 香蕉av资源在线| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 欧美日韩国产亚洲二区|