大鼠血漿中紅景天苷 UPLC-MS/MS檢測方法的建立及其在藥動(dòng)學(xué)研究中的應(yīng)用

吳 浩， 狄留慶*， 單進(jìn) 軍， 康 安， 祖 強(qiáng)， 周 偉， 鄒 葭 霜，李 晨， 易 偉

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院， 江蘇 南京 210023； 2.江蘇省中藥高效給藥系統(tǒng)工程技術(shù)研究中心， 江蘇南京 210023；3.南京市中藥微丸產(chǎn)業(yè)化工程技術(shù)研究中心， 江蘇 南京 210023； 4.南京中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院， 江蘇 南京 210023）

大鼠血漿中紅景天苷 UPLC-MS/MS檢測方法的建立及其在藥動(dòng)學(xué)研究中的應(yīng)用

吳 浩1，2，3， 狄留慶1，2，3*， 單進(jìn) 軍4， 康 安1， 祖 強(qiáng)2，3， 周 偉1，2，3， 鄒 葭 霜1，2，3，李 晨1，2，3， 易 偉1，2，3

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院， 江蘇 南京 210023； 2.江蘇省中藥高效給藥系統(tǒng)工程技術(shù)研究中心， 江蘇南京 210023；3.南京市中藥微丸產(chǎn)業(yè)化工程技術(shù)研究中心， 江蘇 南京 210023； 4.南京中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院， 江蘇 南京 210023）

目的 建立紅景天苷在大鼠血漿內(nèi)的 UPLC-MS/MS 檢測方法, 研究紅景天苷在大鼠體內(nèi)的生物利用度。 方法以 茶 堿為內(nèi)標(biāo), 運(yùn)用 UPLC-MS/MS 法檢測 大 鼠 灌胃 (20 mg/kg) 和 尾 靜脈注射 (5 mg/kg) 給 藥 后 血 漿中 紅 景 天 苷的血藥濃度, 應(yīng)用 DAS2.1.1 藥動(dòng)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。 結(jié)果 主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù): 口服紅景天苷在大鼠血漿中的消除半衰 期 (t1/2z) 為 (49.56 ±19.26)min； 最 高 血 藥 濃 度 (Cmax) 為 (3.28 ±0.66)mg/L； 平 均 滯 留 時(shí) 間(MRT0-t) 為 (56.84 ±6.61)min； 曲 線 下 面 積 (AUC0-∞) 為 (235.95 ±65.72)mg/(L.min) ； 清 除 率 (CL) 為(0.091 ±0.027)L/(m in.kg)； 經(jīng)劑量校正后, 口服的絕對(duì)生物利用度為 33.17%。 結(jié)論 該方法靈敏度高, 專屬性強(qiáng),適用于紅景天苷在大鼠血漿中血藥濃度的測定。

超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀 (UPLC-MS/MS)； 紅景天苷； 大鼠； 生物利用度

紅景天為紅景 天 科 植物 紅 景 天 Rhodiola rosea Limn.或大花紅景天 R.euryphylla(Ford.)S.H. Fu.的干燥根莖, 享有 “高原人參”、 “雪山仙草” 之美稱［1］, 被當(dāng)代醫(yī)學(xué)界譽(yù)為 “ 東方神 草 ”、被全球醫(yī)藥界喻為 “ 黃金 植物”［2］。 主產(chǎn)于西 藏、四川、吉林等地。其味甘、寒,歸脾、胃經(jīng)。具有健脾益氣, 清肺止咳, 活 血 化 瘀［3］功 能。 現(xiàn)代藥 理 研 究 表 明, 紅 景 天 具 有 抗 衰 老［4-5］、 抗 缺氧［6-7］、 抗疲勞［8-9］、 抗輻射［10］、 抗心律失常、 調(diào)節(jié) 免 疫 功 能 、 抗 癌［11-13］、 解 毒［14］、 保 護(hù) 器 官 免受 自 由 基 損 傷 等 作 用 。 紅 景 天 苷 (Salidroside)是紅景天植物的主要有效成分。對(duì)紅景天苷測定報(bào)道多集中在紅景天藥效上,對(duì)紅景天苷的含量測定報(bào)道很少, 且大多數(shù)采用的是 HPLC進(jìn)行檢查, 靈 敏 度 低 。Mao Yu 等［15］運(yùn) 用 HPLC法 測 定beagle犬血漿 中 紅 景 天 苷 的 含 量, 未 使 用 內(nèi) 標(biāo) 且樣品處理方法較為復(fù)雜。 劉曉暉等［16］以 咖 啡因?yàn)閮?nèi)標(biāo)物, 利用 Waters2996 高效液相色譜儀建立了大鼠血漿中紅景天苷的檢測方法,但是檢測限較高。 筆者運(yùn)用 UPLC-MS/MS 建立了大鼠血漿中紅景天苷的檢測方法,探討研究了紅景天苷在大鼠體內(nèi)的絕對(duì)生物利用,為紅景天苷劑型設(shè)計(jì)和臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀 (UPLC-ZEVO TQD, 美 國 Waters有 限 公 司) ； 實(shí) 驗(yàn) 室超 純 水 機(jī) (Millipore Direct-Q3, 美 國 MERCK MILLIPORE化工技術(shù)有限公司)； 微量高速冷凍離 心 機(jī) (Thermo 21R, 美 國 Thermo科 技 有 限 公司) ； 氮 吹 儀 (DCY-24G可 調(diào) 式 氮 吹 儀, 青 島?？?儀 器 有 限 公 司)； 十 萬 分 之 一 電 子 天 平(CPA225D, 德 國 Sartorius分 析 天 平 有 限 公 司) ；渦 旋 儀 (Vortex Genie 2T, 美 國 Scientific Industries有限公司) ； 微 量 移 液 器 ( 芬 蘭 Biohit實(shí) 驗(yàn)室儀器有限公司)。

1.2 藥品與試劑 紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品 (中國食品藥品 檢 定 研 究 院, 純 度 99.9%, 批 號(hào) 110818-201005)； 茶堿標(biāo)準(zhǔn)品 (中國食品藥品檢定研究院, 純度 100%, 批號(hào) 100121-201104)； 甲醇 (色譜純,Merck 公 司), 乙 腈 ( 色 譜 純,Merck 公司)；其它溶劑均為分析純；氮?dú)狻?/p>

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性 SD大鼠, 體 質(zhì)量 220 ～240 g, 購于南京醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心, 動(dòng)物合格證號(hào) SCXK(蘇)20080033。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分析方法

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制 紅景天苷溶液制備: 取紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品適量,精密稱定,置5 mL棕色量瓶中,加甲醇定容至刻度,制成每1 mL含紅景天苷1mg的溶液, 作為分析用標(biāo)準(zhǔn)品母液。

茶堿溶液制備:取茶堿標(biāo)準(zhǔn)品適量,精密稱定, 置于10 mL棕色量瓶中, 加甲醇定容至刻度,制成每1 mL含 茶 堿 0.1 mg的溶液, 作 為母液冷藏保存。 用前用甲醇稀釋成 200 ng/mL的內(nèi)標(biāo)液。

2.1.2 血漿樣品處理 取大鼠血漿樣品 100 μL置于 1.5 mL離 心 管 中, 加 茶 堿 內(nèi) 標(biāo) 液 10 μL, 用900 μL異丙醇-氯仿 (1 ∶1) 萃取液萃取, 旋渦3 min, 離 心 (4 000 r/min)5 min, 取 上 清 液800 μL, 在37 ℃ 氮?dú)獯蹈? 加 100 μL流動(dòng)相復(fù)溶, 取5μL進(jìn)樣檢測。

2.1.3 檢測條件

色 譜 條 件 Waters C18色 譜 柱 (4.6 mm × 100 mm,1.8 μm)； 流動(dòng) 相 乙 腈-水梯 度 洗 脫 (見表 1)； 體 積 流 量 0.3 m L/min； 進(jìn)樣 量 5 μL； 時(shí) 間3.5 min； 柱溫 30 ℃ 。

表 1 乙腈-水梯度洗脫Tab.1 Acetonitrile-water grad ient elution

質(zhì) 譜 條 件 API-ES 離 子 源,MRM 負(fù) 離 子 模式,紅景天苷和茶堿選擇檢測的負(fù)離子模式分別為［M+COO］-、 ［ M-H］-, 離 子質(zhì)荷比 (m/z) 分別為 344.88 ＞298.94 和 180.06 ＞178.81, 毛 細(xì) 管電壓為3.5 kV, 離子源溫度為150℃, 脫溶劑溫度為 400℃, 脫溶劑 氣 流 為 800 L/Hr, 抗 電 壓分 別 為22 V和 40 V, 碰撞能量 電 壓分別為12 V和16 V。

2.2 藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 供試液配制 紅景天苷溶液制備: 取紅景天苷標(biāo) 準(zhǔn) 品 適 量, 精 密 稱 定, 置 25 m L棕 色 量 瓶中,加生 理 鹽水定容 至 刻 度, 制 成 每1 m L含 紅 景天苷5 mg的溶液, 作為供試液。

2.2.2 血漿樣品采集 灌胃給藥: 隨機(jī)取健康雄性 SD大鼠 6 只, 實(shí)驗(yàn)前禁食 12 h, 自由飲水。口服灌胃給藥紅景天苷 (20 mg/kg), 分別于 給藥后5、 10、 15、 30、 45、 60、 90、 120、 180、 240、300、 360 min 眼 眶 取 血 0.5 m L, 置 于 肝 素 抗 凝 的離心 管 中,4 000 r/min, 離 心 10 min, 取 上 清 血漿, 于-20 ℃低溫保存。

靜脈給藥: 隨機(jī)取健康雄性 SD大鼠6只, 實(shí)驗(yàn)前禁食12 h, 自由飲水。 尾靜脈注射給藥紅景天苷 (5 mg/kg), 分別于給藥后 2、 5、 10、 15、 30、45、 60、 90、 120、 180、240、300 min 眼 眶 取 血0.5 mL, 置于肝 素 抗 凝 的 離 心 管 中,4 000 r/min,離心 10 min, 取上清血漿, 于 -20 ℃ 低 溫 保存。

2.2.3 藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)處理及分析 將所得的藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù), 應(yīng)用 DAS2.1.1 藥動(dòng)學(xué)軟件進(jìn)行分析, 計(jì)算主要的藥 動(dòng) 學(xué)參數(shù)消除 半衰 期 t1/2z, 最 高 血 藥 濃 度Cmax, 平均滯留時(shí)間 MRT0-t,曲線下面積 AUC0-∞及絕對(duì)生物利用度F。

絕對(duì)生物利用度計(jì)算公式為:

其中,AUC0→∞(po) 和 AUC0→∞(iv) 分別為灌胃組和靜脈注射組血藥濃度-時(shí)間曲線下面積, Dose(po) 和 Dose(iv) 分別為灌胃組和靜脈注射組劑量。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 方法學(xué)考察

3.1.1 專屬性考察 將大鼠空白血漿、 加入紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品的血漿、加入茶堿標(biāo)準(zhǔn)品血漿及灌胃給藥后實(shí)驗(yàn)組的血漿, 平行做 3 份, 按 “2.1.2” 項(xiàng)下血漿樣品處理方法處理,分別注入色譜儀中,得到色譜圖 (見圖 1), 從色譜圖可以看出, 血漿中雜質(zhì)峰對(duì)測定無干擾,且紅景天苷與茶堿能夠很好的分離 (紅景天苷峰保留 時(shí) 間 為 1.81 min, 茶 堿峰 保 留 時(shí) 間 為 1.82 min), 因 此 本 方 法 專 屬 性良好。

圖 1 空白 血 漿 （A） 、 空 白 血漿中加 入 紅景天 苷 （B） （400 ng/m L） 、 空 白 血 漿 中 加 入 茶 堿 （ 內(nèi) 標(biāo) ） （30 ng/m L） （C） 、灌胃 給 藥后 （300m in） 血漿 中 紅景天苷 （ D） 、 灌胃給藥 后 （300 m in） 血 漿中茶堿 （ 內(nèi)標(biāo) ） （ E） 色譜 圖Fig.1 （ A） blank p lasma、 （ B） blank p lasma spiked w ith salidroside（400 ng/m L） 、 （ C） blank p lasma spiked w ith theophylline（30 ng/m L） 、 （ D） rat p lasma sam p les after oral adm inistration sp iked w ith salidroside（300 m in） 、 （ E）rat plasma samples after oral adm inistration spiked w ith theophylline（300m in）

3.1.2 基質(zhì)效應(yīng) 取空白血漿加入紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品, 分 別 配 制 低、 中、 高 (10、 500、 5 000 ng/mL)3 種質(zhì)量濃度的紅景天苷血漿樣品, 按“2.1.2” 項(xiàng) 下 血 漿 樣 品 處 理 方 法 處 理, 按 照“2.1.3” 項(xiàng)下檢測條件檢測, 平行做 6 份, 其響應(yīng)值與相同濃度的紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品的甲醇溶液比較, 比 值 分 別 為 95.27%、97.12%、96.73%, RSD分別為 6.72%、 3.89%、7.71%, 符合要求。3.1.3 紅景天苷線性關(guān)系及定量限 取空白血漿100 μL置于 1.5 mL離心管中, 精密加入質(zhì)量濃度為 20、 50、 100、 200、 500、 1 000、 2 000、 5 000、10 000、 20 000、 50 000、100 000 ng/mL紅景 天 苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液 10 μL, 配制成紅景天苷質(zhì)量濃度為 2、5、 10、 20、 50、 100、 200、 500、 1 000、 2 000、5 000、10 000 ng/mL溶 液, 再 加 茶 堿 內(nèi) 標(biāo) 液10 μL, 按 “2.1.2” 項(xiàng) 下 方 法 進(jìn) 行 處 理并 進(jìn) 樣分析。

取配制好的紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液,按照“2.1.3” 項(xiàng)下檢測條件檢測, 以血漿質(zhì)量濃度(C) 為橫坐標(biāo), 紅景天苷與內(nèi)標(biāo)茶堿峰面積的比值 (A) 為縱坐標(biāo), 得到紅景天苷的回歸方程為: A=0.000 6C+0.048 3(R=0.999 2), 其 檢 測 濃度線 性 范 圍 是 2 ～10 000 ng/mL, 最 低 定 量 限 為2 ng/mL, 最后取血點(diǎn)血藥水平均在標(biāo)曲范圍。

3.1.4 精密度、 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 取空白血漿加入紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品, 分別配制低、 中、 高 (10、 500、5 000 ng/mL)3 種 濃 度 的 紅 景 天 苷 血 漿 樣 品, 按“2.1.2” 項(xiàng) 下 血 漿 樣 品 處 理 方 法 處 理, 按 照“2.1.3” 項(xiàng)下檢測條件檢測, 平行做 6 份, 測定血漿中紅景天苷的含量,考察日內(nèi)、日間精密度和準(zhǔn)確度, 結(jié)果見表2。 所得結(jié)果均符合要求, 說明該檢測方法的精密度和準(zhǔn)確度良好。

表 2 精密度和準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果 （n=6）Tab.2 Accuracy and precision for the analysis of salidroside（n=6）

3.1.5 回收率試驗(yàn) 取空白血漿加入紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品, 分 別 配 制 低、 中、 高 (10、 500、 5 000 ng/mL)3 種 濃 度 的 紅 景 天 苷 血 漿 樣 品, 按“2.1.2” 項(xiàng)下血漿樣品處理方法處理, 另取空白血漿同法處理后, 分別以低、 中、 高 (10、500、5 000 ng/mL)3 種 濃 度 紅 景 天 苷 甲 醇 溶 液 復(fù) 溶,按照 “2.1.3” 項(xiàng)下檢測條件檢測, 平行做 6 份,考察其在血漿中的提取回收率, 結(jié)果見表3。 所得結(jié)果均符合要求,說明紅景天苷在血漿中的提取回收率良好。

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果 （n=6）Tab.3 Recovery of salidroside from plasma （ n=6）

3.1.6 穩(wěn)定性 取空白血漿分別加入紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品, 分 別 配 制 低、 中、 高 (10、500、5 000 ng/mL)3 種濃度的紅景天苷血漿樣品, 然后在-20 ℃存放 7 d, 反 復(fù) 凍 融 3 次, 再 按 “2.1.2”項(xiàng)下血漿樣品處理方法處理, 按照 “2.1.3” 項(xiàng)下檢測條件檢測,平行做6份,測定血漿中紅景天苷的含量, 考察期其在血漿中的變化, 結(jié)果見表4。表明在上述條件下紅景天苷在7 d內(nèi)穩(wěn)定。 為確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,應(yīng)在樣品處理后盡快檢測。

表4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 （n=6）Tab.4 Stability of salidroside in rat plasma （ n=6）

3.2 藥動(dòng)學(xué)參數(shù)計(jì)算 將測得的紅景天苷血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)用藥動(dòng)學(xué)軟件 DAS2.1.1 進(jìn)行計(jì)算機(jī)擬合,以統(tǒng)計(jì)矩模型計(jì)算紅景天苷在大鼠體內(nèi)的各項(xiàng)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù), 結(jié)果見表 5, 平均血藥濃度-時(shí)間曲線見圖2。

表5 紅景天苷藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù) （， n=6）Tab.5 Pharmacokinetic parameters of salidroside in rats（， n=6）

表5 紅景天苷藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù) （， n=6）Tab.5 Pharmacokinetic parameters of salidroside in rats（， n=6）

藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù) 單位 靜脈注射藥動(dòng)學(xué)參數(shù)灌胃給藥藥動(dòng)學(xué)參數(shù)t1/2zmin 45.16 ±13.69 49.56 ±19.26 Cmax mg.L-1 9.27 ±2.26 3.28 ±0.66 Tmax min — 17.50 ±3.12 CL L.min-1.kg-1 0.028 ±0.001 0.091 ±0.027 MRT0-t min 29.17 ±5.12 56.84 ±6.61 MRT0-∞ min 30.49 ±5.33 58.01 ±6.67 AUC0-∞ mg.L-1.min-1177.82 ±24.54 235.95 ±65.72 AUC0-t mg.L-1.min-1155.67 ±20.05 230.82 ±63.75 F % 33.17

4 討論

本研究運(yùn)用 UPLC-MS/MS 建立了大鼠血漿樣品中紅景天苷的測定方法,通過檢測紅景天苷和內(nèi)標(biāo)茶堿的離子峰進(jìn)行定量分析,具有較高的專屬性。 每個(gè)樣品的檢 測分析 時(shí)間為 3.5 min, 簡便省時(shí)。 其最低定量限為 2ng/m L, 明顯低于 Sen 等［17］(5ng/mL) 和吳趨凡 等［18］(6.25 ng/m L) 建 立 的LC-MS/MS 方 法。 表 明 該 法 靈 敏、 準(zhǔn) 確, 操 作 簡便,適用于紅景天苷生物樣品的分析要求。

圖 2 紅景天苷靜脈給藥平均血漿濃度-時(shí)間曲線 （A）; 紅景天苷灌胃給藥平均血漿濃度-時(shí)間曲線 （B） （， n=6）Fig.2 Mean plasma concentration-time profiles of salidroside in rats after intravenous（A） and oral（ B） adm inistration（， n=6）

本實(shí)驗(yàn)考察了血漿中紅景天苷用甲醇、乙腈兩種試劑沉淀蛋白效果,氯仿、異丙醇、乙酸乙酯3種試劑萃取的效果,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,選用異丙醇-氯仿 (1 ∶1) 萃取液時(shí), 紅景天苷的提取率最高,血漿干擾較小, 故選用異丙醇-氯仿 (1 ∶1) 作為萃取劑。但是該萃取劑選用了毒性較大的氯仿,對(duì)身體傷害大,對(duì)于萃取劑的選擇還有待進(jìn)一步提高。

本實(shí)驗(yàn)考察了人參皂苷 Rg1、 尼莫地平作為內(nèi)標(biāo),研究發(fā)現(xiàn)該兩種物質(zhì)在此檢測條件下具有較強(qiáng)的離子抑制作用。在選用茶堿作為內(nèi)標(biāo)時(shí),茶堿的離子模式及保留時(shí)間與待測物紅景天苷相近,且沒有干擾,故選用茶堿作為內(nèi)標(biāo)物。

紅景天苷質(zhì)譜條件考察了不同的離子模式。ARM正離子模式, 選擇檢測的正離子模式為 ［M +Na］+, 在此條件下, 血漿基質(zhì)干擾大。MRM負(fù)離子模式, 選擇檢 測 的 負(fù)離子模式 為 ［M-H］-,在此條件下, 血漿干擾大, 檢測限高。 MRM負(fù)離子模式, 選擇檢測的負(fù)離子模式為 ［M+COO］-,離子質(zhì)荷比 (m/z) 為 344.88 ＞298.94, 此時(shí)儀器靈敏度高,方法的重現(xiàn)性好,具有較高的專屬性。

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Development and validation of a UPLC-MS/MS method for determ ination of salidroside in rat p lasm a:Application to the pharm acokinetics study

WU Hao1,2,3, DILiu-qing1,2,3*, SHAN Jin-jun4, KANG An1, ZU Qiang2,3, ZHOUWei1,2,3, ZOU Jia-shuang1,2,3, LIChen1,2,3, YIWei1,2,3

(1.College of Pharmacy,Nanjing University of Traditional Chinese Medicine,Nanjing 210023,China； 2.Jiangsu Provincial TCM Engineering Technology Research Center for Highly EfficientDrug Delivery System(DDS),Nanjing 210023,China； 3.Nanjing Engineering Research Center for Industrialization of TCM Pellets,Nanjing 210023,China； 4.School of Medicine,Nanjing University of Traditional Chinese Medicine,Nanjing 210023,China)

AIM To establish a UPLC-MS/MSmethod to determine salidroside in the rat plasma,and to calculate the pharmacokinetic parametersof salidroside in ratsafter oral administration.METHODS Salidrosidewas administered to the rats(5mg/kg body weight)by intravenous injection or by(20mg/kg body weight)oral gavages.Theophylline was taken as the internal standard.DAS2.1.1 was used to process the pharmacokinetic data. RESULTS The pharmacokinetic parameters of t1/2z,Cmax,MRT0-t,AUC0-∞and CL were as follows:(49.56 ± 19.26)min,(3.28 ±0.66)mg/L,(56.84 ±6.61)min,(235.95 ±65.72)mg/L.min,(0.091 ±0.027)L/ min.kg.After caliberation,the bioavailability of salidroside in rats was33.17%.CONCLUSION An accurate LC-MS/MSmethod with high sensitivity and specificity for determining salidroside has been developed and successfully applied to the pharmacokinetic study of salidroside in rats.

UPLC-MS/MS；salidroside； rats；bioavailability

R969.1

:A

:1001-1528(2014)06-1176-06

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.06.014

2013-09-06

江蘇省優(yōu)勢學(xué)科支持計(jì)劃 (YSXK-2010)

吳 浩 (1987 —), 男, 碩士生。 E-mail:yeeking2008@126.com

*通 信作 者: 狄 留慶, 教授, 博 士 生 導(dǎo) 師, 研 究 方 向: 中 藥 新 劑 型 新 技 術(shù) 應(yīng) 用 與 評(píng) 價(jià)。 Tel:(025)85811230,E-mail:diliuqing928@ 163.com