遮蔭對(duì)水稻冠層葉片SPAD值及光合、 形態(tài)特性參數(shù)的影響

楊 虎, 戈長(zhǎng)水， 應(yīng) 武， 楊京平*， 李金文， 何俊俊

(1 浙江大學(xué)環(huán)境與資源學(xué)院， 浙江杭州 310058； 2 杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院， 浙江杭州 310024)

光照是影響作物生長(zhǎng)和產(chǎn)量的重要因素之一。Kobata[1]發(fā)現(xiàn)水稻在輕度遮蔭下生長(zhǎng)狀態(tài)受影響不大，然而在重度遮蔭下產(chǎn)量會(huì)下降。長(zhǎng)江中下游地區(qū)是中國(guó)水稻的主要產(chǎn)區(qū)之一，該地區(qū)陰雨天氣對(duì)水稻的生長(zhǎng)發(fā)育會(huì)造成一定的影響，導(dǎo)致水稻產(chǎn)量的下降。實(shí)踐證明，水稻開花期和灌漿期光照充足，結(jié)實(shí)率和千粒重提高，產(chǎn)量增加; 反之，多陰雨寡光照，結(jié)實(shí)率和千粒重下降，產(chǎn)量降低[2]?？梢姽庹諏?duì)提高水稻產(chǎn)量、 發(fā)揮品種生產(chǎn)潛力具有重要作用。因此，探討水稻對(duì)不同光照條件的適應(yīng)性機(jī)理，對(duì)充分發(fā)揮其高產(chǎn)特性、 提高其高產(chǎn)生態(tài)穩(wěn)定性具有重要的科學(xué)意義。本文研究了未遮蔭及遮蔭后光照對(duì)水稻葉片光合形態(tài)生理特性的影響，探討了水稻對(duì)環(huán)境光照的適應(yīng)機(jī)理。通過對(duì)未遮蔭和遮蔭條件下，冠層葉片SPAD值、 光合形態(tài)指標(biāo)、 快速葉綠素?zé)晒庹T導(dǎo)動(dòng)力學(xué)曲線的分析，深入了解光照因素對(duì)水稻冠層葉片葉綠素?zé)晒鈪?shù)光系統(tǒng)II(PSⅡ)的影響以及光合特征參數(shù)對(duì)環(huán)境的適應(yīng)機(jī)制，為不同光照條件下，研究利用SPAD值與葉綠素?zé)晒鈪?shù)之間的關(guān)系，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)水稻生長(zhǎng)與光照效應(yīng)奠定良好的基礎(chǔ)，進(jìn)一步為水稻的高效栽培和增產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

實(shí)驗(yàn)在浙江大學(xué)華家池校區(qū)溫室進(jìn)行，水稻品種為甬優(yōu)9號(hào)(YY9雜交稻)和丙9363(B9363粳稻)。人工氣候室內(nèi)育秧，2009年2月10日將帶有5片葉的秧苗移栽塑料桶中，桶內(nèi)裝土，土表面積為0.051 m2，每個(gè)塑料桶3叢，每叢2株幼苗，每個(gè)品種10桶，共計(jì)20桶。施氮量為225 kg/hm2(常規(guī)施肥量)，3次施肥(分蘗肥20%、 孕穗肥50%、 抽穗肥30%)，過磷酸鈣(225 kg/hm2)和氯化鉀(75 kg/hm2)在移栽的時(shí)候施入，另外75 kg/hm2的氯化鉀在移栽后40天施入。2月20日用遮陽網(wǎng)分別將每個(gè)品種的水稻5桶遮蔭，遮蔭時(shí)間為45天。未遮蔭和遮蔭處理環(huán)境的光合光量子通量密度(PPFD)和溫度見圖1。盆栽土壤取自杭州市農(nóng)科院實(shí)驗(yàn)農(nóng)場(chǎng)，土壤質(zhì)地為壤土，有機(jī)質(zhì)和總氮含量分別為35.50 g/kg和2.05 g/kg。

圖1 未遮蔭和遮蔭條件下光合光量子通量密度(PPFD)和溫度的動(dòng)態(tài)變化Fig.1 The dynamics of PPFD and temperature under unshaded or shaded condition

1.2 測(cè)定和分析

1.2.2 葉片厚度和SPAD值的測(cè)量 葉片厚度利用中國(guó)計(jì)量學(xué)院計(jì)量與測(cè)試學(xué)院開發(fā)的YI-20010A型葉片厚度測(cè)量?jī)x測(cè)量。利用數(shù)顯千分尺，間接標(biāo)定法進(jìn)行，千分尺推動(dòng)植物葉片厚度儀的傳感器測(cè)頭運(yùn)動(dòng)，記錄千分尺移動(dòng)距離與被標(biāo)定儀器YI-20010A與葉片參數(shù)儀之間的位移變化關(guān)系曲線，并對(duì)正、 返程進(jìn)行了測(cè)試。由于溫度的變化會(huì)引起葉片厚度的變化[3]，因此，在葉片厚度的測(cè)量過程中保持環(huán)境溫度一致。利用SPAD-502計(jì)從2月23日起連續(xù)測(cè)量頂部完全展開葉的SPAD值，間隔時(shí)間大約為10天(根據(jù)天氣)，每個(gè)處理共測(cè)量15片葉。

1.2.3 葉片葉綠素含量的測(cè)量 待測(cè)葉片放入裝有水的塑料瓶中，一起放入4℃冰箱中。測(cè)定之前，先將葉鞘剪掉，稱重后把葉片剪碎放入25 mL比色管中，加入少許的碳酸鈣，并加適量的96%酒精浸提。將比色管放入恒溫振蕩箱中，在40℃下放置過夜后，待葉片完全變白后，將剩余的葉片過濾掉，并用酒精對(duì)葉片殘?jiān)M(jìn)行洗脫，然后再用96%的酒精標(biāo)定到25 mL，最后在665nm和649nm處測(cè)定吸光度 (LAMBDA 45, 140 PerkinElmer, USA)。葉綠素a和b的計(jì)算公式為[4]：

Chlorophyll a=13.95A665-6.88A649

(1)

Chlorophyll b=24.96A649-7.32A665

(2)

Total chlorophyll=6.63A665+18.08A649

(3)

根據(jù)葉片鮮重和葉片的面積，計(jì)算水稻葉片單位面積(chlorophyll content based on per unit area)與單位鮮重(chlorophyll content based on per unit fresh weight)的葉綠素含量。

1.2.4 葉片光合特征數(shù)據(jù)測(cè)量 3月23日利用Li-6400便攜式光合測(cè)定系統(tǒng)(Li-Cor, Lincoln, NE, USA)測(cè)定葉片的凈光合速率(Net photosynthetic rate, Pn), 使用開放氣路, 測(cè)定前, 葉片在光合作用飽和光強(qiáng)下誘導(dǎo)大約30 min。測(cè)定時(shí)使用大氣CO2濃度, 用6400-02B LED紅藍(lán)光源控制光強(qiáng), 依次設(shè)定PPFD為1200、 1000、 800、 600、 400、 200、 100、 50、 25、 0 μmol/(m2·s), 每一光強(qiáng)下停留200 s。

1.2.5 葉綠素?zé)晒鈪?shù)的測(cè)量 利用配置大探頭IMAG-MAX/L的調(diào)制熒光成像系統(tǒng)MAX- IMAGING-PAM(WALZ,德國(guó))測(cè)量全葉片葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力學(xué)。主要葉綠素?zé)晒鈪?shù)如下[5]：

Fo， 固定熒光或初始熒光產(chǎn)量；

Fv， 可變熒光產(chǎn)量；

Fm， 最大熒光產(chǎn)量，F(xiàn)m=Fo+Fv；

ΦPS II， 實(shí)際光化學(xué)效率，ΦPSII=(Fm′-F)/Fm′。

相對(duì)電子傳遞速率(electron transport rate, ETR)：ETR=ΦPSII·PPFD·0.5×0.84，其中0.5是假設(shè)吸收的光被兩個(gè)光系統(tǒng)均分得到的參數(shù),0.84是吸光系數(shù)。

ETR隨PPFD的變化圖像為光響應(yīng)曲線，即使光化光的持續(xù)時(shí)間短至10 s，也可得出典型的光響應(yīng)曲線，這被稱為快速光曲線(rapid light curve, RLC)。為了測(cè)定不同光照梯度下葉片的RLC，設(shè)置光照梯度為0、 20、 55、 110、 185、 280、 395、 460、 541、 602、 700、 800和925μmol/(m2·s)，間隔時(shí)間為10 s。為對(duì)RLC進(jìn)行量化描述，根據(jù)Plaat[6]等的方程進(jìn)行曲線擬合：

P=Pm·(1-ea·PPFD/Pm)·e-β·PPFD/Pm

(4)

其中，P是相對(duì)電子傳遞速率； Pm是潛在的最大光合速率； a為初始斜率，反映了光能的利用效率； β為光抑制參數(shù)，高光強(qiáng)下下降部分的斜率。

1.2.6 數(shù)據(jù)分析 未遮蔭或遮蔭處理下葉片生理形態(tài)數(shù)據(jù)利用SPSS16.0 (SPSS for windows, Version 16.0, USA) 單因素方差分析進(jìn)行0.05水平的Duncan’s-test統(tǒng)計(jì)分析，曲線擬合采用SPSS的Nonlinear模塊和Origin8.0進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 遮蔭對(duì)水稻冠層葉片SPAD值、 葉綠素含量和生理形態(tài)特征的影響

圖2 未遮蔭和遮蔭條件下甬優(yōu)9號(hào)(A)和丙9363(B)葉片SPAD值的動(dòng)態(tài)變化Fig.2 The dynamics of SPAD readings of YY 9 (A) and B 9363(B) under unshaded and shaded condition

表1 不同光照處理甬優(yōu)9號(hào)和丙9363的比葉重(g/m2)、 葉片厚度(μm)、 葉綠素含量和葉綠素a/b

2.2 遮蔭對(duì)水稻冠層葉片光合特征的影響

遮蔭使得兩個(gè)品種的最大凈光合均顯著下降(表2)，遮蔭條件下，丙9363的氣孔導(dǎo)度無顯著變化，表明丙9363氣孔導(dǎo)度對(duì)遮蔭有一定的補(bǔ)償作用,但是甬優(yōu)9號(hào)的氣孔導(dǎo)度卻顯著下降。同樣，遮蔭對(duì)丙9363胞間CO2和蒸騰速率無顯著影響，但卻顯著降低了甬優(yōu)9號(hào)胞間CO2濃度和蒸騰速度，可能是氣孔導(dǎo)度與胞間CO2濃度和蒸騰速率密切相關(guān)，蒸騰速率的下降會(huì)導(dǎo)致胞間CO2濃度和氣孔導(dǎo)度的下降，從而導(dǎo)致了最大凈光合的下降。

表2 未遮蔭和遮蔭條件下甬優(yōu)9號(hào)和丙9363葉片光合交換特征

圖3表明，隨著PPFD的增加，兩個(gè)水稻品種的葉片光響應(yīng)曲線逐漸增大，遮蔭顯著降低了最大凈光合速率(Pmax)，量子效率，光補(bǔ)償點(diǎn)和光飽和點(diǎn)，表明遮蔭導(dǎo)致水稻的光合能力下降(表3)。葉片的呼吸速率下降是為了適應(yīng)弱光照環(huán)境，大幅度減少了自身的呼吸消耗，以增加對(duì)有限光能的利用。遮蔭時(shí)，Pn的降低是光照強(qiáng)度、 葉綠素含量、 氣孔和光系統(tǒng)光能分配自我調(diào)節(jié)共同作用的結(jié)果。遮蔭后葉片光補(bǔ)償點(diǎn)和光飽和點(diǎn)降低，表明遮蔭導(dǎo)致葉片光合系統(tǒng)的暗反應(yīng)效率下降，對(duì)光能的需求降低[10]。

圖3 未遮蔭和遮蔭甬優(yōu)9號(hào)(A)與丙9363(B)的光響應(yīng)曲線Fig.3 Light response curve of YY9 and B 9363 under shading or unshading conditions

表3 未遮蔭和遮蔭條件下甬優(yōu)9號(hào)和丙9363的光響應(yīng)曲線擬合結(jié)果

圖4 甬優(yōu)9號(hào)(A)和丙9363(B)的快速光曲線Fig.4 Rapid light curves of YY 9 (A) and B 9363 (B)

2.3 遮蔭對(duì)水稻冠層葉片葉綠素?zé)晒鈪?shù)的影響

2.3.1 未遮陰與遮陰條件下水稻冠層葉片的快速光曲線 由圖4可知，遮蔭對(duì)快速光曲線的初始斜率的影響不大，說明遮蔭對(duì)水稻捕光系統(tǒng)無明顯影響。由表4可知，未遮蔭與遮蔭條件下，光抑制系數(shù)均非常小，說明光抑制發(fā)生不明顯。然而遮蔭條件下，潛在最大電子傳遞速率顯著下降，說明遮蔭使電子傳遞能力減弱，這可能是葉片光合能力下降的原因。ΦPSII不僅與碳同化有關(guān),也與光呼吸及依賴O2的電子流有關(guān)，代表線性電子傳遞的量子效率[11]。

表4 圖4擬合的結(jié)果

2.3.2 未遮蔭和遮蔭條件下水稻冠層葉片PS II的最大量子產(chǎn)量(Fv/Fm) 遮蔭條件下，兩個(gè)水稻品種F0均較高(圖5A)， 這同牟會(huì)榮等[12](2008)研究的結(jié)果類似。遮蔭降低了兩個(gè)水稻品種的Fm和Fv/Fm(圖5B,C)，F(xiàn)v/Fm值下降表明遮蔭降低了葉片最大光化學(xué)效率。光照過弱會(huì)使PSII原初光能轉(zhuǎn)化效率下降，抑制了水稻光合作用的原初反應(yīng)，進(jìn)而影響光合作用整個(gè)過程。遮蔭降低了Fm(圖5C)，說明遮蔭對(duì)PSII的電子傳遞產(chǎn)生影響，F(xiàn)m是暗適應(yīng)的光合機(jī)構(gòu)全部PSⅡ反應(yīng)中心處于完全關(guān)閉時(shí)的熒光產(chǎn)量，F(xiàn)m反映PSⅡ的電子傳遞情況[13]。

2.3.3 不同光照水平下水稻冠層葉片SPAD值與PS IIFv/Fm之間的關(guān)系 通過對(duì)不同光照水平下，兩個(gè)水稻品種冠層葉片SPAD值與PS II的Fv/Fm之間關(guān)系的擬合發(fā)現(xiàn)，隨著SPAD值的增大，PS II的Fv/Fm呈現(xiàn)出先增大后趨向于穩(wěn)定的現(xiàn)象，形成了指數(shù)式模型關(guān)系式(圖6)。光合作用過程中，F(xiàn)v/Fm與O2轉(zhuǎn)化的量子產(chǎn)量成正相關(guān)關(guān)系，其最大值在0.85左右說明PS II正處于高效的激發(fā)能狀態(tài)，此時(shí)葉片處于未遮蔭狀態(tài)，葉片SPAD值相對(duì)較高。根據(jù)兩個(gè)品種的SPAD值與Fv/Fm擬合的回歸模型計(jì)算結(jié)果可知，SPAD值大約為35時(shí)，F(xiàn)v/Fm開始出現(xiàn)明顯下降的趨勢(shì)，所以，當(dāng)SPAD 值小于35時(shí)，葉片PS II可能處于受損狀態(tài)中。Kumagai等[14]研究水稻葉片SPAD值與Fv/Fm之間的回歸模型發(fā)現(xiàn)當(dāng)SPAD值在30左右，PS II可能處于受損的狀態(tài)，這可能是由于不同水稻品種和生長(zhǎng)環(huán)境產(chǎn)生的差異。由圖6可知，未遮蔭條件下，水稻冠層葉片的SPAD值可以作為PS II的Fv/Fm的指示。

圖5 未遮蔭和遮蔭情況下甬優(yōu)9號(hào)和丙9363的F0(A)、 Fv/Fm(B)和Fm(C) Fig.5 F0 (A), Fv/Fm (B) and Fm(C) of YY9 and B9363 under different shading treatments

圖6 未遮蔭和遮蔭條件下水稻冠層葉片SPAD值與PSII的Fv/Fm之間的關(guān)系(A: YY9; B: B9363) Fig.6 Correlation between the SPAD readings and Fv/Fm of PSII in canopy leaves of rice plants in different lighting conditions (A: YY9; B: B9363)

3 討論和結(jié)論

對(duì)于光照的響應(yīng)，不同品種的水稻葉片SPAD值不同。有的品種對(duì)于光照的時(shí)間具有一定的耐受性，同時(shí)要考慮種植密度對(duì)葉片SPAD值的影響?？傊?，不管什么水稻品種，遮蔭都會(huì)顯著降低其冠層葉片SPAD值，延緩其生長(zhǎng)，只是個(gè)別品種耐蔭強(qiáng)，其冠層葉片SPAD值變化較小。葉片SPAD值與葉綠素含量成正比，而葉片葉綠素含量又與氮含量密切相關(guān)，通常SPAD值被用來衡量葉片氮含量的高低[14-15]。遮蔭條件下，水稻葉片變薄，葉綠素a/b和最大凈光合速率下降，導(dǎo)致CO2同化速率和氮的吸收率降低[16-17]，進(jìn)一步解釋了SPAD值變小的原因。由此可見，SPAD值可以反映由光照時(shí)間的不同引起的葉片氮素含量的高低。葉綠素a/b值同葉片所接受的光照密切相關(guān)，遮蔭條件下，葉片葉綠素a/b降低(表1)。可見，葉綠素a/b可以反映冠層葉片的光照情況。大豆葉片中，葉綠素a/b值在品種間存在一些差異[18]，然而不同水稻品種間，葉綠素a/b是否存在顯著差異，還需要大量的田間試驗(yàn)給予證實(shí)。葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力學(xué)方法可以快速、 靈敏、 無損傷地探測(cè)光照對(duì)植物光合生理的影響，光照條件與植物熒光參數(shù)Fv/Fm、 Fv/Fo、 ΦPSII等的受抑制程度密切相關(guān)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，遮蔭降低了甬優(yōu)9號(hào)和丙9363葉片的ΦPSII，這可能是促使ETR降低的原因，也可能是改變光合特征的重要原因之一。遮蔭對(duì)水稻葉綠素?zé)晒鈪?shù)ETR有不同程度的降低(圖4)，說明遮蔭條件下，水稻葉片吸收的光能往往達(dá)不到其固定CO2所需的能量，從而降低其所產(chǎn)生激發(fā)能。這些激發(fā)能滿足不了自身體內(nèi)細(xì)胞活動(dòng)的基本需求，無法產(chǎn)生足夠的活性氧，從而降低了PSII的反應(yīng)中心和原初光化學(xué)反應(yīng)。結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，葉綠素?zé)晒饧夹g(shù)可以簡(jiǎn)便、 快速地測(cè)定出植株光合作用的變化，從而尋找到植物生長(zhǎng)發(fā)育最適宜的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境。

Fv/Fm是光化學(xué)效率的指標(biāo)，非環(huán)境脅迫下其極少變化，而且不受物種和自身?xiàng)l件的影響，通常在0.8左右，遭受光抑制后，葉片的Fv/Fm明顯下降。本試驗(yàn)表明水稻葉片SPAD值與Fv/Fm表現(xiàn)出指數(shù)式回歸關(guān)系，這同Kumagai等[14]對(duì)水稻的研究結(jié)果類似，Netto等[19]在對(duì)咖啡樹的研究中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)SPAD值小于40的時(shí)候，F(xiàn)v/Fm值顯著下降，這也表明水稻葉片SAPD值可以間接地用于水稻冠層葉片光合能力的指示。這是因?yàn)槿~片F(xiàn)v/Fm與二磷酸核酮糖羧化酶含量表現(xiàn)出指數(shù)式回歸關(guān)系，而二磷酸核酮糖羧化酶與葉片同化CO2的能力正相關(guān)，而葉片同化CO2的能力又與PSII中的光合電子傳遞功能密切相關(guān)[14,17]。然而，本文只研究了未遮蔭和遮蔭下水稻冠層葉片SPAD值與葉綠素?zé)晒鈪?shù)(Fv/Fm)之間粗略的關(guān)系，以及葉片葉綠素?zé)晒鈪?shù)和生理生態(tài)特征的變化情況，至于在不同強(qiáng)度和時(shí)長(zhǎng)的光照條件下，水稻冠層葉片葉綠素?zé)晒鈪?shù)和其他生理生態(tài)特征會(huì)發(fā)生怎樣的變化，是否能通過SPAD計(jì)對(duì)葉綠素?zé)晒鈪?shù)進(jìn)行精準(zhǔn)的預(yù)測(cè)，還需要進(jìn)一步的研究探討。

參考文獻(xiàn):

[1] Kobata T, Sugawara M, Sadanori T. Shading during the early grain filling period does not affect potential grain dry matter increase in rice [J]. Agronomy Journal, 2000, 92: 411-417.

[2] 李林, 姚永康, 劉敏華, 等. 水稻開花灌漿期陰天影響產(chǎn)量構(gòu)成的光質(zhì)環(huán)境分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 1997, 13: 139-142.

Li L, Yao Y K, Liu M Hetal. Analysis of the environment of light quality for the effects of cloudy days on rice yield formation during flowering-filling period [J]. Jiangsu Journal of Agriculture Science, 1997, 13: 139-142.

[3] Schroeder C A. Diurnal changes in leaf thickness of Avocado [M]. Yearbook: California Avocado Society, 1980. 143-145.

[4] Arnon D I, Whatley F R. Factors influencing oxygen production by illuminated chloroplast fragments[J]. Archives of Biochemistry, 1949, 23: 141-156.

[5] 張守仁. 葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力學(xué)參數(shù)的意義及討論[J].植物學(xué)通報(bào), 1999, 16: 444-448.

Zhang S R. A discussion on chlorophyll fluorescence kinetics parameters and their significance [J]. Chinese Bulletin of Botany, 1999, 16: 444-448.

[6] Platt T, Gallegos C L, Harrison W G. Photo inhibition of photosynthesis in natural assemblages of marine phytoplankton [J]. Journal Marine Research, 1980, 38: 687-701.

[7] Bond B J, Farnsworth B T, Coulombe R A, Winner W E. Foliage physiology and biochemistry in response to light gradients in conifers with varying shade tolerance [J]. Oecologia, 1999, 120: 183-192.

[8] Pandey S, Kushwaha R. Leaf anatomy and photosynthetic acclimation inValerianaJatamansiL. grown under high and low irradiance [J]. Photosynthetica, 2005, 43: 85-90.

[9] Fitter A H, Hay R K M. Environmental physiology of plants [M]. Academic Press, London, 1981, 35-38.

[10] 張坤, 萬永善, 劉風(fēng)珍, 等. 花生幼苗的光合特性對(duì)弱光的響應(yīng)[J]. 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào), 2009, 20: 2989-2995.

Zhang K, Wan Y S, Liu F Zetal. Response of photosynthetic characteristics of peanut seedlings leaves to low light [J]. Chinese Journal of Applied Ecology, 2009, 20: 2989-2995.

[11] 陳建明, 俞曉平, 程家安. 葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力學(xué)及其在植物抗逆生理研究中的應(yīng)用[J]. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2006, 18: 51-55.

Chen J M, Yu X P, Cheng J A. The application of chlorophyll fluorescence kinetics in the study of physiological responses of plants to environmental stresses [J]. Acta Agriculture Zhejiangensis, 2006, 18: 51-55.

[12] 牟會(huì)榮, 姜東, 戴延波, 等. 遮蔭對(duì)小麥旗葉光合及葉綠素?zé)晒馓匦缘挠绊慬J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué), 2008, 41: 599-606.

Mou H R, Jiang D, Dai Y Betal. Effect of shading on photosynthesis and chlorophyll fluorescence characters in wheat flag leaves [J]. Scientia Agricultura Sinica, 2008, 41: 599-606.

[13] Lichtenthaler H K, Rinderle U. The role of chlorophyll fluorescence in the detection of stress conditions in plants [J]. Critical Reviews in Analytical Chemistry, 1988, 19: S29-S85.

[14] Kumagai E, Araki T, Kubota F. Correlation of chlorophyll meter readings with gas exchange and chlorophyll fluorescence in flag leaves of rice (OryzasativaL.) plant [J]. Plant Production Science, 2009, 12: 50-53.

[15] Lin F F, Qiu L F, Deng J Setal. Investigation of SPAD meter-based indices for estimating rice nitrogen status [J]. Computers and Electronics in Agriculture, 2010, 71S: S60-S65.

[16] 李金文. 基于水稻葉片生理生態(tài)學(xué)特征的氮營(yíng)養(yǎng)診斷[D]. 浙江杭州: 浙江大學(xué)博士學(xué)位論文, 2005.

Li J W. The diagnosis of rice N status based on leaf physioecological characteristics [D]. Zhejiang Hangzhou: PhD dissertation of Zhejiang University, 2005.

[17] Warren C R, Adams M R. Distribution of N, rubisco, and photosynthesis in Pinuspinaster and acclimation to light [J]. Plant, Cell and Environment, 2001, 24: 597-609.

[18] Fritschi F B, Ray J D. Soybean leaf nitrogen, chlorophyll content, and chlorophyll a/b ratios [J]. Photosynthetica, 2007, 45: 92-98.

[19] Netto A T, Campostrini E, Oliveira J Getal. Photosynthetic pigments, nitrogen, chlorophyll a fluorescence and SPAD-502 readings in coffee leaves [J]. Scientia Horticulture, 2005, 104: 199-209.