• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    免疫活性肽的酶法制備及其活性機制研究進展

    2014-04-06 20:13:48卜漢萍程云輝
    食品與機械 2014年3期
    關(guān)鍵詞:酶法分子量蛋白酶

    卜漢萍 王 璐 許 宙 程云輝

    BU Han-ping WANG Lu XU ZhouCHENG Yun-h(huán)ui

    (長沙理工大學(xué)化學(xué)與生物工程學(xué)院,湖南 長沙 410114)

    (College of Chemistry and Biology Engineering,Changsha University of Science and Technology,Changsha,Hunan 410114,China)

    近年來,隨著人們生活方式的轉(zhuǎn)變,人體免疫能力受到諸多因素的影響與挑戰(zhàn),老齡化、肥胖癥、飲食不當(dāng)、生活壓力與不良生活習(xí)慣皆可導(dǎo)致機體免疫力下降而引發(fā)各種疾病,尋求適宜的免疫調(diào)節(jié)劑來提高人體免疫能力,成為了人類社會的迫切需要。

    傳統(tǒng)的藥物免疫調(diào)節(jié)劑對機體有一定的毒副作用,而免疫活性肽作為安全無副作用的免疫調(diào)節(jié)劑在食品、藥品與飼料等領(lǐng)域已顯出其獨特優(yōu)勢,免疫活性肽可通過促進免疫細胞增殖、提高巨噬細胞活性、增強自噬細胞(NK)機能、促進細胞因子生成[1,2]等來提高機體免疫力。

    目前,國外學(xué)者[3-5]雖然已從多種動植物蛋白中獲得了氨基酸序列和結(jié)構(gòu)明確的肽段,并對其活性機理做了系統(tǒng)研究,但工業(yè)化制備的免疫活性肽并不多見;國內(nèi)學(xué)者[6-8]對免疫活性肽的研究主要集中在制備方法與分離純化工藝研究方面,具有明確氨基酸序列和結(jié)構(gòu)的免疫活性肽的報道較少。要對免疫活性肽進行生理活性、結(jié)構(gòu)及其構(gòu)效關(guān)系的研究,首先必須富集得到較高純度的活性肽,然后再深入研究其免疫活性機制。因此,研究高純度免疫活性肽的高效制備方法與免疫活性機制皆具重要意義。文章對免疫活性肽的酶法制備、分離純化和活性機制進行了綜述,可為肽類免疫調(diào)節(jié)劑的開發(fā)提供理論參考。

    1 免疫活性肽的酶法制備

    目前主流的制備免疫活性肽的方法主要有酶解法、微生物發(fā)酵法、化學(xué)合成法等,因生產(chǎn)條件溫和、安全性較高、價格低廉且可得到特定功能的活性肽等優(yōu)點,酶解法已成為從蛋白質(zhì)中釋放生物活性肽的最常用方法。

    雖然食源性蛋白在生物體內(nèi)的消化過程中也可酶解成氨基酸與多肽類物質(zhì),但體內(nèi)酶解具有不完全性和不確定性,不能有目的地釋放出具有特定生物活性的肽段。近年來研究[9]發(fā)現(xiàn)蘊藏于蛋白質(zhì)多肽鏈中的肽類物質(zhì)的生理活性往往還強于其母體蛋白,若選擇適當(dāng)?shù)牡鞍酌阁w外水解蛋白,就有可能釋放出母體蛋白質(zhì)中有生理活性的肽段,按工業(yè)化規(guī)模制備出具特定生理功能的活性肽。

    1.1 酶法制備免疫活性肽的底物蛋白

    研究表明體外酶解有可能釋放出母體蛋白質(zhì)中有活性的肽段[6],母體蛋白的氨基酸組成[10]、亞基序列[11,12]與空間結(jié)構(gòu)[13]皆影響著肽的免疫活性。從大量免疫活性肽的研究[14,15]中發(fā)現(xiàn),免疫活性肽通常具有疏水性氨基酸,如Ala、Val、Met、Phe、Ile、Leu、Pro、Trp等。因此,對制備免疫活性肽的蛋白,有必要對其氨基酸組成與結(jié)構(gòu)進行分析。

    目前,制備免疫活性肽的蛋白主要來源于動物與植物蛋白。以動物蛋白作為酶法制備免疫活性肽底物蛋白的研究報道較多,Jolles等[16]采用胰蛋白酶酶解乳蛋白,分離純化后獲得一個具有免疫活性的肽段,研究表明從α-乳白蛋白中獲得的免疫活性肽Tyr-Gly與Tyr-Gly-Gly能在體外有效促進人外周血細胞的增殖,增殖率分別為90%和35%,促進細胞代謝過程中蛋白合成(25%)[17]。Jairo Duarte等[18]采用太平洋無須鱈魚蛋白為原料,利用酵母代謝酶發(fā)酵鱈魚蛋白,探討發(fā)酵物的免疫活性,研究結(jié)果表明0.3 mg/m L發(fā)酵物連續(xù)灌喂小鼠7 d后能有效促進腹腔巨噬細胞的吞噬能力,Ig A+細胞數(shù)量在小腸固有層增加,IL-4、IL-6和IL-10細胞數(shù)量在相同位置有顯著性增加,此外,IFNγ和TNFaα促炎因子含量也得到增加,因此發(fā)酵物能增強小鼠機體的非特異性免疫能力。丁進峰等[19]采用響應(yīng)面優(yōu)化的木瓜蛋白酶酶解海蜇膠原蛋白工藝制備免疫活性肽,研究發(fā)現(xiàn)在1%加酶量、55℃,p H 6.5,酶解時間180 min的條件下,海蜇膠原蛋白肽能顯著促進小鼠免疫器官脾臟指數(shù)(4.857 mg/g)和胸腺指數(shù)(2.083 mg/g),并且能提高小鼠巨噬細胞的各項吞噬指標(biāo),如碳廓清指數(shù)0.033、吞噬指數(shù)6.645、伴刀球蛋白指數(shù)0.220。

    以植物蛋白作為酶法制備免疫活性肽底物蛋白的研究報道涉及大米蛋白、大豆蛋白和小麥蛋白。Takahashi M等[20]采用胰蛋白酶水解可溶性大米蛋白,其水解物分離純化后獲得具有免疫調(diào)節(jié)功能的肽段為 Gly-Tyr-Pro-Met-Tyr-Pro-Leu-Pro-Arg,此九肽能引起豚鼠回腸收縮,具有提高白細胞吞噬功能,吞噬指數(shù)為1.5。陳季旺等[21]采用胰蛋白酶酶解米糠,凝膠過濾和RP—HPLC對酶解物進行分離純化,獲得 一 個 氨 基 酸 序 列 為 Asp-Gly-Ser-Val-Arg 的 阿 片 活性肽。

    1.2 酶法制備免疫活性肽的酶種

    蛋白酶的種類決定了酶解的作用位點和酶解程度,從而可獲得具有不同氨基酸組成和分子量的肽段。

    胰蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶與復(fù)合蛋白酶常用于制備免疫活性肽。房新平[22]、Hu Hou等[23]以淋巴細胞增殖活性為考察指標(biāo),采用胰蛋白酶分別對牛胎盤蛋白、阿拉斯加鱈魚進行酶解,皆獲得具有免疫活性功能的肽段。JingJiao Ma等[24]用堿性蛋白酶酶解乳清蛋白,以淋巴細胞增殖活性作為檢測指標(biāo),研究發(fā)現(xiàn)酶解物較母體蛋白能更顯著地促進細胞增殖,脾淋巴細胞增殖指數(shù)為1.71。馬儷珍等[25]以脾淋巴細胞增殖指數(shù)為指標(biāo),采用正交試驗考察了酶(木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶與堿性蛋白酶)、底物濃度、酶解時間和加酶量等因素的影響,研究發(fā)現(xiàn)采用木瓜蛋白酶在加酶量1 600 U/g,4 h,底物濃度1∶4.5(m∶m)條件下,能夠獲得較高免疫活性的多肽。

    1.3 水解度對酶法制備免疫活性肽的影響

    水解度(DH)可以反映蛋白質(zhì)被水解的程度,在相同條件下它與酶的種類及活力、底物種類有關(guān)。DH越高,蛋白質(zhì)水解得越徹底,獲得的分子量較小的肽段就越多,免疫活性肽的分子量大多小于2 k Da,但過高DH將產(chǎn)生較多的游離氨基酸??梢酝ㄟ^水解度來控制酶解反應(yīng)的進程,但僅用DH作為考察指標(biāo)是不完善的,通常應(yīng)結(jié)合生理活性指標(biāo)來考察制備免疫活性肽的工藝條件。

    曾珍等[26]選用不同蛋白酶酶解兔骨粉,以DH和小鼠淋巴細胞增殖指數(shù)(SI)作為指標(biāo),篩選較適宜的蛋白酶,并優(yōu)化酶解工藝,研究結(jié)果表明,采用胰蛋白酶酶解兔骨粉,DH對SI有顯著影響,隨著DH不斷提高,SI值的變化趨勢是先增大后減小,可能是因為隨著DH提高,具有免疫活性的肽段被進一步降解了。Xiang Zhen Kong等[27]比較了 DH對3種大豆蛋白(InSP、SPI與SSP)水解物分子量的影響,相同條件下,InSP的DH較其它兩種蛋白高,獲得的水解物分子量最小為655.3 Da;以InSP為底物,考察不同條件對SI、腹腔巨噬細胞吞噬能力與DH的影響,研究發(fā)現(xiàn)在60℃獲得的酶解物的DH最高,此時SI值與吞噬能力也最強。

    2 免疫活性肽的分離純化

    酶法制備的活性肽中,因蛋白酶酶切位點具有一定的隨機性和不確定性,導(dǎo)致酶解過程中產(chǎn)生了大量分子量大小相近但氨基酸序列不同的肽段。因此,要對酶法制備的活性肽進行生物活性、結(jié)構(gòu)及其構(gòu)效關(guān)系的研究,就必須對酶解產(chǎn)物進行分離純化,以富集得到較高純度的生物活性肽。

    在生物活性肽常用的分離純化方法中,膜分離、等電點分離、離子交換樹脂分離和親和色譜分離已在工業(yè)化生產(chǎn)中得到了較廣泛的應(yīng)用,凝膠色譜、聚丙烯酰胺凝膠電泳、毛細管色譜、高壓液相色譜、質(zhì)譜等分離技術(shù)則在實驗室規(guī)模上得到了較普遍的使用。

    2.1 膜分離

    鑒于目前國內(nèi)外研究[6]報道的免疫活性肽的相對分子量大多在2 k Da以下,因此,按分子量對肽進行分離純化是一種有效可行的方法,并且適用于工業(yè)化生產(chǎn)。膜分離技術(shù)基于膜本身孔徑的大小,比其孔徑大的物質(zhì)被截留在膜上,而直徑較孔徑小的物質(zhì)可以透過膜,依據(jù)此原理可對不同分子量大小的活性肽進行分離純化。

    Bingjun Qian等[28]采用超濾膜對乳酸桿菌發(fā)酵液進行分離純化,研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)肽的分子量范圍為3~5 k Da時,其抗氧化活性比較高;繼續(xù)分離純化則可得到一個具有免疫活性的F6組分,此組分對小鼠脾淋巴細胞增殖指數(shù)為0.729。Milda Stuknyte等[29]采用超濾膜按分子量大小對牛乳乳酸菌發(fā)酵液進行分離純化,研究發(fā)現(xiàn)分子量小于3 k Da的分離組分能顯降低Caco-2細胞中NF-κB因子的活性,具有免疫調(diào)節(jié)的作用。

    2.2 色譜分離

    2.2.1 離子交換色譜分離 離子交換色譜的分離原理是基于活性肽帶有不同性質(zhì)電荷和不同電荷量,先使活性肽與帶有相反電荷的離子交換劑結(jié)合,再通過電荷強度不同的洗脫液與活性肽競爭結(jié)合,從而將帶有不同電荷量的物質(zhì)分離開。離子交換色譜因成本低、效率高和易再生等特點而成為蛋白質(zhì)和寡肽分離純化中最常用手段,在蛋白質(zhì)和寡肽純化方案中的使用率達到75%左右,工業(yè)化應(yīng)用前景良好。

    房新平等[30]以體外淋巴細胞增殖活性為考察指標(biāo),采用DEAE Sepharose CL-6B陰離子交換色譜、凝膠色譜和反相高效液相色譜對牛胎盤蛋白胰蛋白酶酶解物進行分離純化,牛胎盤免疫活性肽含量達93%,并經(jīng)分離純化獲得氨基酸序列為 Tyr-X-Phe-Leu-Gly-Leu-Pro-Gly-X-Thr的免疫活性肽。張亞飛等[31]利用離子交換色譜法對小麥蛋白堿性蛋白酶酶解物進行分離,研究結(jié)果表明使巨噬細胞增殖效果較好的是p H 8與p H 10的洗脫組分。吳綿斌等[32]采用陰離子和陽離子兩種交換色譜對小牛胸腺酶解物進行分離純化得到的組分具有較高的肽含量。

    2.2.2 大孔吸附樹脂色譜分離 大孔吸附樹脂的分離原理是基于吸附和分子篩,主要是通過分子間作用力如范德華引力或氫鍵等對被吸附的分子進行吸附,吸附劑表面的親水或疏水性質(zhì)決定了其具有不同的吸附特性;同時本身的多孔性結(jié)構(gòu)亦決定其具有一定的分子篩作用。因樹脂與被分離成分之間的吸附為物理吸附,被吸附的活性肽較易洗脫,因而具有成本低、效率高、穩(wěn)定性好和易再生等特點。

    侯虎等[33]比較了6種大孔吸附樹脂對鱈魚免疫活性肽的分離效果,其中DA201-C樹脂對鱈魚免疫活性肽的吸附能力最強,其吸附率、脫鹽率與回收率分別為84.7%,98.1%,90.3%,脫鹽后的鱈魚免疫活性肽對小鼠脾淋巴細胞增殖能力有劑量依賴性。

    2.2.3 凝膠色譜分離 凝膠色譜是利用凝膠的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),據(jù)分子大小、形狀差異進行分離的方法。凝膠色譜因具有設(shè)備簡單、操作方便、分離條件溫和、重復(fù)性好和樣品回收率高等特點而廣泛應(yīng)用于活性肽的分離純化,但因上樣量小,只適合在活性肽分離純化后期使用。紀(jì)麗娜[34]以小鼠脾淋巴細胞增殖指數(shù)為考察指標(biāo),采用葡聚糖凝膠色譜Sephadex G-25與Sephadex G-15對分子量范圍為5~10 k Da的金槍魚頭酶解物進行分離純化,獲得3個洗脫峰,研究結(jié)果顯示TIP3C組分主要由200~800 Da的肽構(gòu)成,低劑量的金槍魚頭酶解物即可顯著促進細胞增殖和增強巨噬細胞吞噬能力。Assad Sila等[35]聯(lián)用凝膠過濾色譜Sephadex G-25、反相高效液相色譜(RP—HPLC)與電噴霧質(zhì)譜(ESI)對堿性蛋白酶魚蛋白酶解物進行分離純化,在一個活性較高的組分中檢測出具有 抗 菌 活 性 的 3 條 肽 Ala-Ala-Ala-Leu、Ala-Ala-Gly-Gly-Val和 Ala-Ala-Val-Lys-Met。

    Hu Hou等[24]以淋巴細胞增殖活性為指標(biāo),采用離子交換色譜、凝膠過濾色譜與RP—HPLC對阿拉斯加鱈魚胰蛋白酶酶解物進行分離純化,獲得 Asn-Gly-Met-Thr-Tyr、Asn-Gly-Leu-Ala-Pro與 Trp-Thr 3條肽,其淋巴細胞增殖活性分別為35.92%,32.96%,31.35%。

    2.3 電泳分離

    電泳法分離蛋白質(zhì)、肽、氨基酸等兩性物質(zhì)能得到較純的組分,但處理量較小,不適用于工業(yè)化生產(chǎn)。常規(guī)Tris-Glycine-SDS-PAGE對10 kDa以下的小分子肽分辨率低,并且易出現(xiàn)擴散丟失和無著色帶等現(xiàn)象。Schagger等[36]用Tricine代替?zhèn)鹘y(tǒng)甘氨酸,在常規(guī)SDS—PAGE分離膠與濃縮膠基礎(chǔ)上增加一層間隙凝膠,并減小電流、延長電泳時間,實現(xiàn)了對5~20 k Da肽段的分離,并能觀察到不太清晰的1 kDa肽段的色帶。曹佐武[37]采用5%濃度的聚丙烯酰胺凝膠,并在分離膠中加入尿素,發(fā)現(xiàn)1 kDa的小分子肽段的帶型也能清晰顯示。

    3 免疫活性肽的作用機制

    免疫系統(tǒng)由非特異性免疫與特異性免疫組成,非特異性免疫是多細胞生物經(jīng)過進化形成的防御系統(tǒng),它由皮膚黏膜組織、巨噬細胞、NK細胞等組成,是機體抵抗和消滅抗原的第一戰(zhàn)線;特異性免疫是隨著機體的個體發(fā)育,與抗原接觸后獲得的防御功能,它包含體液免疫和細胞免疫。免疫活性肽可以促進淋巴細胞的增殖、提高巨噬細胞活性、增強自噬細胞(NK)機能、促進細胞因子生成[2,38]等,通過這些功能來鞏固機體防御能力、提高機體免疫力。

    3.1 免疫活性肽與非特異性免疫

    3.1.1 免疫活性肽與巨噬細胞 巨噬細胞是非特異性免疫的重要組成部分,巨噬細胞存在于各種器官和組織中,它能無特異性的識別抗原,釋放出大量的細胞因子IL-1、IL-6、IL-8與TNF-α等,激發(fā)免疫反應(yīng)。同時巨噬細胞能活化增殖、吞噬并消化抗原,也能將抗原傳遞給T淋巴細胞與B淋巴細胞,進入細胞免疫階段。

    龔吉軍等[39]采用環(huán)磷酰胺構(gòu)建小鼠免疫力低下模型,研究了油茶粕多肽對小鼠免疫能力的影響,發(fā)現(xiàn)油茶粕多肽能增強小鼠巨噬細胞的吞噬能力,減輕小鼠耳腫脹度,提高小鼠的免疫功能。Berthaou等[40]用合成的α-乳白蛋白免疫活性肽Gly-Leu-Leu研究其對小鼠的體液免疫活性,發(fā)現(xiàn)此3肽能顯著促進巨噬細胞吞噬綿羊紅細胞的能力,并能保護小鼠抵抗肺炎克雷伯氏菌的感染。Gattegno等[41]還發(fā)現(xiàn)此3肽能劑量依賴性地促進人單核巨噬細胞與衰老的紅細胞的結(jié)合,并增強此類巨噬細胞的吞噬能力。

    3.1.2 免疫活性肽對自然殺傷NK細胞的作用 NK細胞是人體體液免疫的第一道防線,屬于非特異性免疫的范疇,它能分泌胞毒因子、腫瘤促死因子與穿孔素等,選擇性地殺死靶細胞。NK細胞較T淋巴細胞、B淋巴細胞來說其特異性識別功能是較弱的。通??蓮腘K細胞生物活性變化來考察機體免疫功能。周涌等[42]采用蛙皮生物活性肽作用于小鼠,通過NK細胞增殖試驗、變態(tài)反應(yīng)和碳廓清試驗考察哺乳動物細胞的免疫功能,發(fā)現(xiàn)蛙皮活性肽可明顯促進NK細胞的免疫活性,NK細胞活性為77.4%。傅煒昕等[43]采用凝膠過濾層析與陰離子交換色譜分離純化低分子地龍肽,并考察分離組分對自然殺傷NK細胞活性的影響,發(fā)現(xiàn)分子量在13 kDa以下的組分能明顯提高NK細胞活性和殺傷率。

    3.2 免疫活性肽與特異性免疫

    3.2.1 免疫活性肽與T細胞 T細胞表面有能識別“非己”的抗原決定簇,這些抗原決定簇由糖蛋白組成,具有特異性的識別功能。T細胞的主要功能是介導(dǎo)細胞免疫,T細胞能消滅一些被感染的細胞,提高其他細胞的免疫作用與釋放記憶細胞,抵御抗原的再次入侵。張智宇等[44]采用胰蛋白酶酶解豆粕,考察酶解工藝參數(shù)與小鼠T淋巴細胞增殖指數(shù)之間的關(guān)系,研究發(fā)現(xiàn)在一定的劑量關(guān)系內(nèi),豆粕酶解物對小鼠T淋巴細胞有顯著增殖作用,刺激指數(shù)為1.189 4。Javier Rodríguez-Carrio等[45]采用膜過濾對β-乳球蛋白酶解物進行分離純化,研究發(fā)現(xiàn)富集大量酸性氨基酸的組分能誘導(dǎo)Th1應(yīng)答,分子量較小的組分能刺激單核細胞分泌TNF-α,另一個分子量較小的組分還能引導(dǎo)TGFβ分泌與調(diào)控T細胞分化,可能是由于從β-乳球蛋白獲得的段能削弱過敏與炎癥反應(yīng)。

    3.2.2 免疫活性肽與B細胞 B淋巴細胞是從骨髓干細胞分化而來的,屬于體液免疫細胞,主要分布在淋巴結(jié)和脾臟中。當(dāng)B細胞受到外界刺激時,能夠分化成為漿細胞,漿細胞可以產(chǎn)生抗體,參與體液免疫;也可以分化為記憶細胞。劉賓等[46]用計算機推測大豆蛋白酸性多肽具有刺激B細胞抗原表位的結(jié)構(gòu),并能引起B(yǎng)細胞產(chǎn)生特異性免疫,從而激活體液免疫。方廖瓊[47]研究了羊胎盤免疫調(diào)節(jié)肽GPIF對體液免疫的影響,發(fā)現(xiàn)GPIF能顯著促進B細胞增殖與抗體分泌,提高脾淋巴B細胞與骨髓B細胞數(shù)量,促進骨髓干細胞向B淋巴細胞分化,表明GPIF具有促進小鼠體液免疫的能力;GPIF還能促進60Co-γ射線免疫損傷小鼠免疫功能的恢復(fù)。

    4 展望

    免疫活性肽的主流制備方法為酶解法,因蛋白酶酶切位點具有一定的隨機性和不確定性,導(dǎo)致酶解過程中產(chǎn)生大量分子量大小相近但氨基酸序列不同的肽段。酶解產(chǎn)物是由蛋白質(zhì)、肽和氨基酸混合的復(fù)雜體系,這大大增加了工業(yè)化生產(chǎn)和實驗室分離純化免疫活性肽的成本,選擇高效率、低成本的分離純化方法已成為酶法制備的免疫活性肽大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)的關(guān)鍵所在。

    免疫涉及到機體的體液、組織和器官,且各免疫細胞之間還將直接或間接的依靠多種信號分子進行信息傳遞,因而導(dǎo)致不同免疫活性肽作用的方式也各不相同,這使得免疫活性肽作用機制的研究變得更為復(fù)雜,目前還沒有研究開發(fā)出簡便有效的免疫活性評價方法。因此,進一步探索免疫活性肽的作用機制,揭示免疫活性肽功能與活性之間的關(guān)系,可為免疫活性肽類功能性食品的研究開發(fā)提供重要的理論依據(jù)。

    1 Fitzgerald R J,Murray B A.Bioactive peptides and lactic fermentations[J].International Journal of Dairy Technology,2006,59(2):118~125.

    2 Horiguchi N,Horiguchi H,Suzuki Y.Effect of wheat gluten hydrolysate on the immune system in healthy human subjects[J].Bioscience Biotechnology and Biochemistry,2005,69(12):2 445.

    3 Werner G H,F(xiàn)loc'h F,Migliore-Samour D,et al.Immunomodulating peptides[J].Experientia,1986,42(5):521~531.

    4 Agyei D,Danquah M K.Rethinking food-derived bioactive peptides for antimicrobial and immunomodulatory activities[J].Trends in Food Science & Technology,2012,23(2):62~69.

    6 呂學(xué)澤,王雪敏,梁玉榮,等.免疫活性肽的研究進展[J].中國畜牧獸醫(yī),2011,38(4):170~172.

    7 張貴川,袁呂江.食源性生物活性肽的研究進展[J].中國糧油學(xué)報,2009(9):157~162.

    8 王秋韞,龐廣昌.免疫活性肽的研究進展與展望[J].食品科學(xué),2002,23(7):136~139.

    9 程云輝,曾知音,郭建偉,等.抗氧化肽的酶法制備及其構(gòu)效關(guān)系的研究進展[J].食品與機械,2009,25(6):174~180.

    10 Staroscik K,Janusz M,Zimecki M,et al.Immunologically active nonapeptide fragment of a proline-rich polypeptide from ovine colostrum:amino acid sequence and immunoregulatory properties[J].Molecular immunology,1983,20 (12):1 277~1 282.

    11 Gill H S,Doull F,Rutherfurd K J,et al.Immunoregulatory peptides in bovine milk[J].British Journal of Nutrition,2000,84(S1):111~117.

    12 Meisel H,F(xiàn)itzGerald R J.Opioid peptides encrypted in intact milk protein sequences[J].British Journal of Nutrition,2000,84(S1):27~31.

    13 Lai Y,Gallo R L.AMPed up immunity:how antimicrobial peptides have multiple roles in immune defense[J].Trends in immunology,2009,30(3):131~141.

    14 Hancock R E W,Sahl H G.Antimicrobial and host-defense peptides as new anti-infective therapeutic strategies[J].Nature biotechnology,2006,24(12):1 551~1 557.

    15 Easton D M,Nijnik A,Mayer M L,et al.Potential of immu-nomodulatory host defense peptides as novel anti-infectives[J].Trends in biotechnology,2009,27(10):582~590.

    16 Jollès P,Caen J P.Parallels between milk clotting and blood clotting:opportunities for milk-derived products[J].Trends in food science &technology,1991(2):42~43.

    17 Kayser H,Meisel H.Stimulation of human peripheral blood lymphocytes by bioactive peptides derived from bovine milk proteins[J].FEBS letters,1996,383(1):18~20.

    18 Duarte J,Vinderola G,Ritz B,et al.Immunomodulating capacity of commercial fish protein hydrolysate for diet supplementation[J].Immunobiology,2006,211(5):341~350.

    19 丁進鋒,蘇秀榕,李妍妍,等.海蜇膠原蛋白肽的免疫活性的研究[J].水產(chǎn)科學(xué),2011,30(6):359~361.

    20 Takahashi M,Moriguchi S,Yoshikawa M,et al.Isolation and characterization of oryzatensin:a novel bioactive peptide with ileum-contracting and immunomodulating activities derived from rice albumin[J].Biochemistry and molecular biology international,1994,33(6):1 151~1 158.

    21 陳季旺,陶冠軍,姚惠源,等.米糠類阿片拮抗肽的氨基酸序列分析[J].食品科學(xué),2005,26(12):107~110.

    22 房新平.牛胎盤免疫活性肽提取與酶法制備研究 [D].無錫:江南大學(xué),2007.

    23 Hou H,F(xiàn)an Y,Li B,et al.Purification and identification of immunomodulating peptides from enzymatic hydrolysates of Alaska pollock frame[J].Food Chemistry,2012,134(2):821~828.

    24 Ma J J,Mao X Y,Wang Q,et al.Effect of spray drying and freeze drying on the immunomodulatory activity,bitter taste and hygroscopicity of hydrolysate derived from whey protein concentrate[J].LWT-Food Science and Technology,2014,56(2):296~302.

    25 馬儷珍,甄潤英,張建榮,等.具免疫活性的鯰魚膠原多肽酶解工藝研究[J].食品工業(yè)科技,2008(4):152~155.

    26 曾珍,李天歌,李誠,等.不同蛋白酶的兔骨酶解液對小鼠脾淋巴細胞的增殖作用[J].食品工業(yè)科技,2013,34(22):310~314.

    27 Kong X Z,Guo M M,Hua Y F,et al.Enzymatic preparation of immunomodulating hydrolysates from soy proteins[J].Bioresource technology,2008,99(18):8 873~8 879.

    28 Qian B,Xing M,Cui L,et al.Antioxidant,antihypertensive,and immunomodulatory activities of peptide fractions from fermented skim milk with Lactobacillus delbrueckii ssp.bulgaricus LB340[J].Journal of Dairy Research,2011,78(1):72~79.

    29 Stuknyte M,De Noni I,Guglielmetti S,et al.Potential immunomodulatory activity of bovine casein hydrolysates produced after digestion with proteinases of lactic acid bacteria[J].International dairy journal,2011,21(10):763~769.

    30 房新平,夏文水,生慶海,等.多級色譜純化牛胎盤免疫調(diào)節(jié)多肽及性質(zhì)測定[J].北京化工大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2006,33(6):42~45.

    31 張亞飛,樂國偉,施用暉,等.小麥蛋白Alcalase水解物免疫活性肽的研究[J].食品與機械,2006,22(3):44~46.

    32 吳綿斌,徐銀君,孫明.胸腺肽β4分離與純化工藝的研究[J].中國新藥雜志,2008,17(22):1 945~1 947.

    33 侯虎,趙雪,張朝輝,等.孔聚苯乙烯吸附樹脂對鱈魚排免疫活性肽的脫鹽[J].過程工程學(xué)報,2010,10(5):899~904.

    34 紀(jì)麗娜.金槍魚頭酶解物免疫活性肽的分離及對小鼠腹腔巨噬細胞功能的影響[D].湛江:廣東海洋大學(xué),2012.

    35 Sila A,Nedjar-Arroume N,Hedhili K,et al.Antibacterial peptides from barbel muscle protein hydrolysates:Activity against some pathogenic bacteria[J].LWT-Food Science and Technology,2014,55(1):183~188.

    36 Schagger H,Jagow G.Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa[J].Anal Biochem.,1987(166):368~379.

    37 曹佐武.有效分離1 k Da小肽的Tricine-SDS-PAGE方法[J].中國生物工程雜志,2004,24(1):74~76.

    38 Fitzgerald R J,Murray B A.Bioactive peptides and lactic fermentations[J].International Journal of Dairy Technology,2006,59(2):118~125.

    39 龔吉軍,黃衛(wèi)文,鐘海雁,等.油茶粕多肽對小鼠免疫調(diào)節(jié)功能的影響[J].中國食品學(xué)報,2013(12):21~27.

    40 Berthou J,Migliore-Samour D,Lifchitz A,et al.Immunostimulating properties and three-dimensional structure of two tripeptides from human and cow caseins[J].FEBS Letters,1987,218(1):55~58.

    41 Gattegno L,Migliore-Samour D,Saffar L,et al.Enhancement of phagocytic activity of human monocytic-macrophagic cells by immunostimulating peptides from human casein[J].Immunology Letters,1988,18(1):27~31.

    42 周涌,杜鵑.林蛙皮生物活性肽對小鼠免疫功能的影響[J].中國老年學(xué)雜志,2012,32(10):2 107~2 108.

    43 傅煒昕,董占雙,李鐵英,等.免疫活性地龍肽的制備及其對小鼠NK細胞活性的影響[J].中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2008,36(6):650~652.

    44 張智宇,朱秀清,任為聰.水解條件對擠壓膨化高溫豆粕酶解物免疫活性的影響[J].食品科學(xué),2011,32(21):161~164.

    45 Rodríguez-Carrio J,F(xiàn)ernández A,Riera F A,et al.Immunomodulatory activities of wheyβ-lactoglobulin tryptic-digested fractions[J].International Dairy Journal,2014,34(1):65~73.

    46 劉賓,滕達,楊雅麟,等.大豆球蛋白A3酸性多肽的原核表達及B細胞表位分析[J].中國食品學(xué)報,2012,12(3):13~20.

    47 方廖瓊.羊胎盤免疫調(diào)節(jié)因子的免疫促進作用及其機理研究[D].重慶:第三軍醫(yī)大學(xué),2005.

    猜你喜歡
    酶法分子量蛋白酶
    加入超高分子量聚合物的石墨烯纖維導(dǎo)電性優(yōu)異
    思鄉(xiāng)與蛋白酶
    文苑(2018年22期)2018-11-19 02:54:30
    改良的Tricine-SDS-PAGE電泳檢測胸腺肽分子量
    多胚蛋白酶 高效養(yǎng)畜禽
    不同對照品及GPC軟件對右旋糖酐鐵相對分子量測定的影響
    α-生育酚琥珀酸酯的酶法合成研究進展
    低分子量丙烯酰胺對深部調(diào)驅(qū)采出液脫水的影響
    酶法制備大豆多肽及在醬油發(fā)酵中的應(yīng)用
    中國釀造(2016年12期)2016-03-01 03:08:07
    Sn-2二十二碳六烯酸甘油單酯的酶法合成
    IgA蛋白酶在IgA腎病治療中的潛在價值
    制服人妻中文乱码| 国产黄频视频在线观看| 国产片内射在线| 国产精品国产三级国产专区5o| 久久99蜜桃精品久久| 在线精品无人区一区二区三| 波野结衣二区三区在线| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲,欧美,日韩| 成人亚洲欧美一区二区av| 久久免费观看电影| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产高清国产精品国产三级| 国产老妇伦熟女老妇高清| 婷婷成人精品国产| 男女无遮挡免费网站观看| 国产成人一区二区在线| 久久久亚洲精品成人影院| 国产 一区精品| 亚洲av.av天堂| 亚洲情色 制服丝袜| 精品国产国语对白av| 精品久久久精品久久久| 国产精品国产三级国产专区5o| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 一级黄片播放器| 成人二区视频| 少妇熟女欧美另类| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 午夜影院在线不卡| 久久久久久久久久久免费av| 国产福利在线免费观看视频| 亚洲国产日韩一区二区| 高清黄色对白视频在线免费看| 日本免费在线观看一区| 超色免费av| 少妇人妻久久综合中文| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产精品嫩草影院av在线观看| 亚洲精品在线美女| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 欧美日本中文国产一区发布| 国产福利在线免费观看视频| 视频在线观看一区二区三区| 国产一区亚洲一区在线观看| 久久97久久精品| 五月天丁香电影| 三级国产精品片| 十八禁高潮呻吟视频| 蜜桃在线观看..| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 久久这里有精品视频免费| 久久久久久久久久久免费av| 午夜av观看不卡| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 日韩av在线免费看完整版不卡| 亚洲av男天堂| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 一本久久精品| 国产深夜福利视频在线观看| 丝袜喷水一区| 色播在线永久视频| 日韩欧美精品免费久久| 国产成人一区二区在线| 性色avwww在线观看| 国产极品天堂在线| 亚洲成人一二三区av| 叶爱在线成人免费视频播放| 久久韩国三级中文字幕| 国产成人精品无人区| 亚洲精品av麻豆狂野| 日韩一本色道免费dvd| 国产免费福利视频在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 一区福利在线观看| 亚洲精品在线美女| 日本av免费视频播放| 久久精品久久久久久久性| 久久久国产精品麻豆| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲五月色婷婷综合| a级毛片黄视频| 久久久久网色| 2021少妇久久久久久久久久久| 亚洲精品av麻豆狂野| 日韩av在线免费看完整版不卡| 在线天堂中文资源库| 一级爰片在线观看| 飞空精品影院首页| 欧美人与善性xxx| 亚洲一码二码三码区别大吗| 婷婷色综合大香蕉| 国产高清国产精品国产三级| 久久精品夜色国产| 亚洲少妇的诱惑av| 天美传媒精品一区二区| 日韩一区二区视频免费看| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产1区2区3区精品| 综合色丁香网| 天堂8中文在线网| 男女国产视频网站| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 久久久久国产一级毛片高清牌| 成人亚洲欧美一区二区av| 在线看a的网站| 亚洲第一青青草原| 国产在线一区二区三区精| 欧美成人午夜精品| 不卡av一区二区三区| 欧美少妇被猛烈插入视频| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 久久鲁丝午夜福利片| 午夜福利视频在线观看免费| 啦啦啦啦在线视频资源| 黄色毛片三级朝国网站| av天堂久久9| 成年女人毛片免费观看观看9 | 亚洲一区二区三区欧美精品| 精品酒店卫生间| 色94色欧美一区二区| 国产精品.久久久| 天堂中文最新版在线下载| 一区二区三区精品91| 成人亚洲精品一区在线观看| 久久亚洲国产成人精品v| 久久99一区二区三区| 美女中出高潮动态图| av在线老鸭窝| 美女午夜性视频免费| 久久狼人影院| 一边摸一边做爽爽视频免费| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲人成网站在线观看播放| 欧美精品一区二区大全| 中国三级夫妇交换| 毛片一级片免费看久久久久| 18禁观看日本| 黄色一级大片看看| 日本色播在线视频| 最近中文字幕高清免费大全6| 我要看黄色一级片免费的| 久久久精品区二区三区| 十八禁高潮呻吟视频| 亚洲国产日韩一区二区| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 精品午夜福利在线看| 好男人视频免费观看在线| av卡一久久| 久久久精品区二区三区| 亚洲,欧美精品.| 久久久久久久久久久久大奶| 中文字幕色久视频| 99久久精品国产国产毛片| 999久久久国产精品视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产免费现黄频在线看| 一区二区av电影网| 曰老女人黄片| 男女无遮挡免费网站观看| 热99久久久久精品小说推荐| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 观看av在线不卡| 国产一区二区 视频在线| 中国国产av一级| 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲四区av| 美女视频免费永久观看网站| 欧美日韩亚洲高清精品| 超碰成人久久| 人妻系列 视频| 欧美97在线视频| 在线天堂中文资源库| 久久精品国产自在天天线| 色吧在线观看| 丰满迷人的少妇在线观看| 在线 av 中文字幕| 男男h啪啪无遮挡| 久久久久久久久免费视频了| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 成年人午夜在线观看视频| 精品久久久久久电影网| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 美女主播在线视频| 一边亲一边摸免费视频| 制服人妻中文乱码| 毛片一级片免费看久久久久| 精品国产国语对白av| 丝袜脚勾引网站| 中文字幕制服av| 久久久久久久亚洲中文字幕| 在线精品无人区一区二区三| 满18在线观看网站| 欧美日韩一级在线毛片| 超碰成人久久| 国产不卡av网站在线观看| 欧美日韩视频精品一区| 久久97久久精品| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 中文天堂在线官网| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 下体分泌物呈黄色| 叶爱在线成人免费视频播放| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 看免费av毛片| 另类精品久久| 欧美人与善性xxx| 久久99精品国语久久久| 久久精品久久精品一区二区三区| 熟妇人妻不卡中文字幕| 波野结衣二区三区在线| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产人伦9x9x在线观看 | 男女免费视频国产| 久久这里有精品视频免费| 日韩在线高清观看一区二区三区| 国产av码专区亚洲av| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产毛片在线视频| 午夜免费男女啪啪视频观看| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 欧美av亚洲av综合av国产av | 日韩精品免费视频一区二区三区| 99国产精品免费福利视频| 国产有黄有色有爽视频| 久久人妻熟女aⅴ| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲视频免费观看视频| 婷婷色av中文字幕| 亚洲精品一区蜜桃| 宅男免费午夜| 日韩人妻精品一区2区三区| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲天堂av无毛| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 99久久精品国产国产毛片| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 2022亚洲国产成人精品| 午夜日韩欧美国产| 精品视频人人做人人爽| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 搡女人真爽免费视频火全软件| 日本wwww免费看| av不卡在线播放| 久久久精品免费免费高清| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 亚洲三区欧美一区| 久久精品夜色国产| 激情视频va一区二区三区| 在线观看www视频免费| 亚洲欧美色中文字幕在线| 成年动漫av网址| 90打野战视频偷拍视频| 精品人妻偷拍中文字幕| 久久精品国产亚洲av高清一级| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 中国国产av一级| 日韩免费高清中文字幕av| 韩国av在线不卡| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 18禁动态无遮挡网站| 婷婷色av中文字幕| 国产淫语在线视频| 美女午夜性视频免费| 亚洲人成77777在线视频| 免费观看a级毛片全部| 日本vs欧美在线观看视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 大码成人一级视频| 黄片播放在线免费| 卡戴珊不雅视频在线播放| 久久国内精品自在自线图片| 久久人人爽人人片av| 日本91视频免费播放| 在线天堂中文资源库| 交换朋友夫妻互换小说| 成人亚洲欧美一区二区av| 伊人亚洲综合成人网| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 在线天堂中文资源库| 亚洲av.av天堂| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产在线一区二区三区精| 成人毛片60女人毛片免费| 一边亲一边摸免费视频| 日韩欧美精品免费久久| 亚洲精品中文字幕在线视频| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 伊人久久国产一区二区| 精品国产一区二区三区四区第35| tube8黄色片| 精品少妇黑人巨大在线播放| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产 一区精品| 日本wwww免费看| 国产免费视频播放在线视频| 国产成人欧美| kizo精华| 午夜福利视频在线观看免费| 90打野战视频偷拍视频| 街头女战士在线观看网站| 一本色道久久久久久精品综合| 久久人人爽av亚洲精品天堂| av电影中文网址| 18禁动态无遮挡网站| 在线观看人妻少妇| 美女午夜性视频免费| 最近中文字幕2019免费版| 波多野结衣一区麻豆| av天堂久久9| 中国三级夫妇交换| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 最近的中文字幕免费完整| 精品人妻一区二区三区麻豆| 成年人免费黄色播放视频| 日日撸夜夜添| 国产av国产精品国产| 国产亚洲精品第一综合不卡| 免费高清在线观看视频在线观看| 一二三四中文在线观看免费高清| 丝袜喷水一区| 国产精品国产av在线观看| 国产又爽黄色视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 人体艺术视频欧美日本| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产成人精品无人区| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产av码专区亚洲av| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲精品自拍成人| 男的添女的下面高潮视频| 国产精品国产三级专区第一集| 久久精品国产自在天天线| 有码 亚洲区| 综合色丁香网| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 欧美 日韩 精品 国产| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 日韩,欧美,国产一区二区三区| videosex国产| 在线看a的网站| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 日韩av免费高清视频| 国产精品成人在线| 高清黄色对白视频在线免费看| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| www.熟女人妻精品国产| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 婷婷色综合www| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 少妇熟女欧美另类| 乱人伦中国视频| 另类亚洲欧美激情| 精品国产露脸久久av麻豆| 只有这里有精品99| 亚洲欧洲国产日韩| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产伦理片在线播放av一区| 国产探花极品一区二区| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 街头女战士在线观看网站| 中文字幕色久视频| 亚洲综合色网址| tube8黄色片| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲男人天堂网一区| 成人亚洲精品一区在线观看| 婷婷色麻豆天堂久久| 一本色道久久久久久精品综合| 久久影院123| 男人爽女人下面视频在线观看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲三级黄色毛片| 亚洲第一av免费看| 欧美人与善性xxx| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 日韩一本色道免费dvd| 亚洲av.av天堂| 久久97久久精品| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久久精品区二区三区| videos熟女内射| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲中文av在线| 大陆偷拍与自拍| 青草久久国产| 亚洲av福利一区| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 午夜激情av网站| 亚洲国产精品成人久久小说| 成人二区视频| 赤兔流量卡办理| 18+在线观看网站| 亚洲第一区二区三区不卡| 日本午夜av视频| 日韩三级伦理在线观看| 亚洲精品久久午夜乱码| 18在线观看网站| 满18在线观看网站| 久久久久久人妻| 9191精品国产免费久久| 国精品久久久久久国模美| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 日韩av免费高清视频| 国产精品久久久久久av不卡| 九色亚洲精品在线播放| 丝袜脚勾引网站| 韩国精品一区二区三区| 免费在线观看完整版高清| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 秋霞在线观看毛片| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲欧美精品综合一区二区三区 | 精品亚洲成a人片在线观看| 国产xxxxx性猛交| 91在线精品国自产拍蜜月| 最黄视频免费看| 少妇被粗大猛烈的视频| av片东京热男人的天堂| 嫩草影院入口| 久久久国产欧美日韩av| 女的被弄到高潮叫床怎么办| www.av在线官网国产| 亚洲av欧美aⅴ国产| 美女大奶头黄色视频| 久久99一区二区三区| 一级毛片 在线播放| 国产麻豆69| 国产免费一区二区三区四区乱码| 青春草亚洲视频在线观看| 99香蕉大伊视频| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 久久久国产一区二区| 多毛熟女@视频| 色视频在线一区二区三区| 自线自在国产av| 欧美人与善性xxx| 五月开心婷婷网| 电影成人av| 精品亚洲成国产av| 久久久久精品性色| 中文字幕制服av| av线在线观看网站| 久久久国产欧美日韩av| av在线app专区| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产午夜精品一二区理论片| 九色亚洲精品在线播放| 日韩成人av中文字幕在线观看| 成人影院久久| 91久久精品国产一区二区三区| 久久久久久伊人网av| 26uuu在线亚洲综合色| 性少妇av在线| a级毛片在线看网站| 最黄视频免费看| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 中文字幕色久视频| 久久ye,这里只有精品| 成人二区视频| 搡老乐熟女国产| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 交换朋友夫妻互换小说| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 最黄视频免费看| 男女高潮啪啪啪动态图| 观看美女的网站| 波多野结衣一区麻豆| 日本wwww免费看| 午夜福利视频精品| 亚洲 欧美一区二区三区| 欧美日韩一级在线毛片| 久久久久久伊人网av| 99九九在线精品视频| 伊人久久国产一区二区| 国产乱人偷精品视频| 国产精品一二三区在线看| 欧美成人精品欧美一级黄| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产精品久久久久久精品古装| 999精品在线视频| av电影中文网址| 一区二区三区四区激情视频| 一级a爱视频在线免费观看| 日韩成人av中文字幕在线观看| 男女午夜视频在线观看| 丁香六月天网| av电影中文网址| 久久久国产欧美日韩av| 成人毛片a级毛片在线播放| 在线看a的网站| 一级片'在线观看视频| 久久久久网色| av视频免费观看在线观看| 一级,二级,三级黄色视频| 中文字幕色久视频| 亚洲综合精品二区| 人妻少妇偷人精品九色| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 97人妻天天添夜夜摸| kizo精华| 五月伊人婷婷丁香| 卡戴珊不雅视频在线播放| 精品卡一卡二卡四卡免费| 在线观看免费高清a一片| 亚洲一区中文字幕在线| 人妻少妇偷人精品九色| av女优亚洲男人天堂| xxxhd国产人妻xxx| 亚洲精品国产av成人精品| 如何舔出高潮| 999久久久国产精品视频| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产精品.久久久| 桃花免费在线播放| 人人澡人人妻人| 天堂俺去俺来也www色官网| 免费看不卡的av| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产精品无大码| 看免费av毛片| 亚洲国产精品国产精品| 午夜免费男女啪啪视频观看| 免费高清在线观看视频在线观看| 亚洲精品久久午夜乱码| 熟妇人妻不卡中文字幕| 日韩免费高清中文字幕av| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲经典国产精华液单| 26uuu在线亚洲综合色| 亚洲av中文av极速乱| a级毛片在线看网站| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 日韩大片免费观看网站| 人人澡人人妻人| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产成人aa在线观看| 午夜福利,免费看| 黄色一级大片看看| 一区福利在线观看| 日本欧美视频一区| 国产又爽黄色视频| 欧美日本中文国产一区发布| 国产高清不卡午夜福利| 国产成人一区二区在线| 亚洲天堂av无毛| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| av天堂久久9| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 国产老妇伦熟女老妇高清| 伦精品一区二区三区| 亚洲视频免费观看视频| 久久久国产精品麻豆| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 搡老乐熟女国产| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 男女下面插进去视频免费观看| 母亲3免费完整高清在线观看 | 晚上一个人看的免费电影| 熟妇人妻不卡中文字幕| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲欧美色中文字幕在线| 日本av免费视频播放| 国产精品三级大全| 丰满少妇做爰视频| 国产亚洲一区二区精品| 18+在线观看网站| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产精品女同一区二区软件| 一本久久精品| 亚洲国产精品国产精品| av国产精品久久久久影院| 久久久久久久久免费视频了| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 丝袜在线中文字幕| 午夜福利,免费看| 激情五月婷婷亚洲| 日本vs欧美在线观看视频| 婷婷色麻豆天堂久久| 大片电影免费在线观看免费| 黄色怎么调成土黄色| 在线 av 中文字幕| 久久精品国产综合久久久| 一个人免费看片子| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产极品天堂在线| 国产极品天堂在线| 极品人妻少妇av视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲精品一区蜜桃| 黄色配什么色好看| 日本wwww免费看| 国产免费福利视频在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9 | 少妇人妻 视频| 毛片一级片免费看久久久久| 欧美黄色片欧美黄色片| 日本wwww免费看|