帕金森病中藥干預(yù)實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展

錢 凱，胡玉英

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)2011級碩士研究生，廣西 南寧530001；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院腦病科，廣西 南寧530023）

帕金森?。≒arkinson’s disease，PD）是中老年常見神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病之一，PD從診斷到死亡的平均生存期為15年［1］。現(xiàn)將中藥干預(yù)PD動物實(shí)驗(yàn)研究綜述如下。

1 改善氧化應(yīng)激

氧化應(yīng)激是PD發(fā)病的一個重要過程。許多實(shí)驗(yàn)研究表明PD患者的神經(jīng)元內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)異常和自由基清除過多。自由基包括超氧化物自由基、過氧化物自由基、羥自由基。自由基可被超氧化物岐化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）及谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）清除。正常生理狀態(tài)下，其生成和清除保持平衡。PD大鼠其腦組織GSH含量顯著減少，對自由基的清除能力下降，啟動LPO及其代謝產(chǎn)物MDA生成增多，導(dǎo)致神經(jīng)元變性死亡。段凱等［2］制備6-羥多巴（6-OHDA）帕金森病大鼠模型，監(jiān)測大鼠腦皮質(zhì)部分及血清中超氧化物歧化酶（SOD）、還原性谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、過氧化氫（H2O2）的含量，發(fā)現(xiàn)半夏生物堿可改變大鼠腦皮質(zhì)部分SOD、MDA的含量，抑制MDA、H2O2的產(chǎn)生，改善大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，對抗大鼠神經(jīng)系統(tǒng)退行性變。程為平等［3］研究發(fā)現(xiàn)中藥補(bǔ)髓健腦方（由何首烏、黃精、天麻、葛根、延胡索、當(dāng)歸、石斛等藥組成）可降低PD小鼠腦內(nèi)NO含量，從而改善自由基的代謝，減少神經(jīng)元的損傷和神經(jīng)毒性，減少其凋亡、壞死，進(jìn)而保護(hù)黑質(zhì)內(nèi)神經(jīng)元。張雪倩等［4］用MPTP腹腔注射造模，通過行為學(xué)檢測、免疫組化技術(shù)等測定色釘菇粗多糖的抗氧化活性，結(jié)果顯示色釘菇粗多糖能顯著改善PD模型小鼠的行為癥狀、降低MPTP所致的小鼠DA能神經(jīng)元的凋亡，具有神經(jīng)保護(hù)作用。

2 調(diào)節(jié)線粒體功能紊亂

線粒體是細(xì)胞能量代謝的主要場所，其內(nèi)膜上酶復(fù)合體Ⅰ-Ⅴ組成線粒體呼吸鏈氧化磷酸化系統(tǒng)，產(chǎn)生能量，維持細(xì)胞的正常功能。線粒體不僅是細(xì)胞的能量工廠，也是體內(nèi)氧自由基產(chǎn)生的重要部位，其功能失調(diào)必然導(dǎo)致ATP合成不足，細(xì)胞內(nèi)外離子失衡，鈣離子內(nèi)流增加，激活細(xì)胞內(nèi)蛋白酶、脂肪酶及核酸內(nèi)切酶，介導(dǎo)興奮性氨基酸的細(xì)胞毒性損傷作用，造成細(xì)胞損傷和凋亡。和欣等［5］采用腹腔注射MPTP建立PD模型，測定腦內(nèi)線粒體酶復(fù)合物I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性，證實(shí)大補(bǔ)陰丸、牽正散及合方能保護(hù)PD小鼠腦線粒體復(fù)合酶的活性，進(jìn)而對維持正常線粒體功能發(fā)揮作用。

3 抑制細(xì)胞凋亡

腦細(xì)胞死亡有壞死和凋亡兩種方式，凋亡為程序化死亡，是一種主動、耗能的過程。凋亡無論在生理情況下還是在病理情況下均起著重要的作用。在PD和許多老年性退行性神經(jīng)疾患，都是基于神經(jīng)元和腦細(xì)胞凋亡的形式發(fā)生死亡。研究表明：PD患者黑質(zhì)中的DA能神經(jīng)元的凋亡數(shù)量明顯增加，因此，凋亡可能是引起PD患者黑質(zhì)中DA能神經(jīng)元死亡和丟失的直接原因。牛英才等［6］研究顯示葛根異黃酮對MPP+誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡具有抑制作用，下調(diào)Bax和上調(diào)Bcl-2mRNA表達(dá)可能是其作用機(jī)制之一。何建成等［7］發(fā)現(xiàn)6-OHDA損傷組大鼠損傷側(cè)中腦黑質(zhì)致密部有大量染色陽性細(xì)胞，呈棕黃色，不規(guī)則形，表明6-OHDA神經(jīng)毒性損毀作用在導(dǎo)致DA能神經(jīng)元損傷中，細(xì)胞凋亡是重要形式，同時天麻鉤藤飲（天麻、鉤藤、石決明、梔子、黃芩、川牛膝、杜仲、桑寄生、夜交藤、朱茯神、益母草）組損傷側(cè)黑質(zhì)區(qū)染色陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少，電鏡結(jié)果也顯示損傷比模型組明顯減輕，說明天麻鉤藤飲可明顯減少6-OHDA造成的細(xì)胞凋亡，對神經(jīng)細(xì)胞有保護(hù)作用。王亞麗等［8］研究顯示疏筋解毒方（熟地黃、雞血藤、全蝎、白芍、丹參等）有提高PD大鼠中腦Bcl-2mRNA/BaxmRNA分布及表達(dá)的趨勢。劉洋等［9］以PC12細(xì)胞為研究對象，通過6-OHDA損傷24h的方法建立PC12細(xì)胞凋亡模型，以BCL-X/L蛋白為靶點(diǎn)來研究抗凋亡藥物，證實(shí)龜甲提取物具有抑制6-OHDA誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的作用，其作用機(jī)制可能與上調(diào)BCL-X/L的表達(dá)有關(guān)。

4 調(diào)節(jié)免疫異常

PD疾病過程中，中樞神經(jīng)系統(tǒng)的免疫異常參與了神經(jīng)元的變性壞死，主要表現(xiàn)為小膠質(zhì)細(xì)胞的過度激活和細(xì)胞因子水平升高。目前已有多項(xiàng)研究證明，小膠質(zhì)細(xì)胞的激活可促進(jìn)反應(yīng)性氧化物（H2O2、O2、NO等）和毒性細(xì)胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6、IFN-γ等）的釋放，引起氧化應(yīng)激和線粒體功能章礙，加重神經(jīng)元的損傷。李紹旦等［10］用PD小鼠模型，觀察腦組織NO及α-腫瘤壞死因子（TNF-α）、γ-干擾素（IFN-γ）的變化，發(fā)現(xiàn)補(bǔ)腎活血飲能降低NO及TNF-α、IFN-γ含量，其機(jī)制可能在于抑制PD小鼠腦內(nèi)部的異常免疫炎癥反應(yīng)，以及減輕免疫炎性產(chǎn)物的損傷作用。

5 抗興奮性毒性作用

興奮性神經(jīng)毒性可能參與PD的發(fā)病機(jī)制。興奮性氨基酸（EAA）有谷氨酸（Glu）和天冬氨酸（Asp），如釋放過多或滅活機(jī)制受損將對神經(jīng)細(xì)胞有毒性作用。生理情況下，紋狀體神經(jīng)元的活動是由黑質(zhì)DA能神經(jīng)元的抑制及大腦皮層Glu能神經(jīng)元的興奮相制約完成的。由于黑質(zhì)紋狀體DA能神經(jīng)元缺失，造成Glu能神經(jīng)元的興奮性活動增強(qiáng)，EAA含量增高會加重紋狀體神經(jīng)元的變性、死亡。金雪紅等［11］研究顯示6-OHDA大鼠給藥干預(yù)50d后，通過對患側(cè)紋狀體2種氨基酸的檢測，發(fā)現(xiàn)GSH治療組和未治療組比較Asp濃度明顯降低，GSH+Tet（粉防己堿）治療組的Glu明顯低于GSH治療組。L-dopa治療組的Glu和Asp都比未治療組顯著性增加，GSH+L-dopa+Tet治療組的Glu和Asp都比未治療組顯著性降低。認(rèn)為Tet可以增強(qiáng)GSH的神經(jīng)保護(hù)作用，從而減輕EAA的毒性作用。張軍等［12］用MPTP腹腔注射制作PD模型小鼠，予銀杏平顫方灌胃治療，用地高辛標(biāo)記的nNOS cDNA寡核苷酸探針進(jìn)行原位雜交，觀察紋狀體、黑質(zhì)中的nNOS mRNA的表達(dá)。結(jié)果顯示模型小鼠腦紋狀體和黑質(zhì)中可見大量nNOS mRNA的表達(dá)，而銀杏平顫方能顯著降低nNOS mRNA的表達(dá)，說明銀杏平顫方有良好的抗NO毒性和抗氧化作用。

6 抑制蛋白質(zhì)異常聚集

中腦黑質(zhì)DA能神經(jīng)元變性伴胞漿內(nèi)路易小體的形成是PD的主要病理改變。有研究認(rèn)為神經(jīng)細(xì)胞的死亡是α-synuclein等蛋白構(gòu)象改變，形成淀粉樣絲狀物，異常聚集所致。泛素蛋白酶系統(tǒng)（UPS）是細(xì)胞內(nèi)重要的溶酶體外降解系統(tǒng)，有研究顯示，UPS功能異常是PD發(fā)病中一個重要環(huán)節(jié)［13］。因此，改善UPS的功能對于PD防治可能具有重要的意義。曾志芬等［14］研究發(fā)現(xiàn)魚藤酮可誘導(dǎo)出α-syn高表達(dá)的PD細(xì)胞模型，并且白果內(nèi)酯能抑制α-syn表達(dá)及下調(diào)α-syn基因轉(zhuǎn)錄，這可能是白果內(nèi)酯發(fā)揮保護(hù)作用的重要機(jī)制。吳正治等［15］研究發(fā)現(xiàn)中藥安顫靈（保密配方）可抑制PD大鼠體內(nèi)α-syn的聚集及黑質(zhì)細(xì)胞凋亡，認(rèn)為這種作用可能與改善UPS功能有關(guān)，當(dāng)受損的UPS功能得到改善以后，UPS上調(diào)對α-syn的降解，從而減少細(xì)胞內(nèi)蛋白的聚集及包涵體的形成，下調(diào)凋亡信號的激活，以達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的作用。

7 小 結(jié)

中藥干預(yù)PD的動物實(shí)驗(yàn)研究主要從抗細(xì)胞凋亡、抗氧化及自由基損傷的腦保護(hù)作用、興奮性氨基酸毒性等方面，但中藥治療PD的實(shí)驗(yàn)研究還存在許多問題，如因中短期治療對PD癥狀改善不如西藥明顯，使中藥治療多是處在輔助地位，影響中藥療效評價(jià)。設(shè)計(jì)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)研究方案還很少。因此，在今后要在多種發(fā)病機(jī)制的聯(lián)合作用及中藥復(fù)方作用等方面進(jìn)行更加深入的研究。

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