行為學(xué)評(píng)價(jià)在針灸治療神經(jīng)精神疾病實(shí)驗(yàn)研究中的應(yīng)用概況

徐世芬,尹平,吳君怡,曹燕

行為學(xué)評(píng)價(jià)在針灸治療神經(jīng)精神疾病實(shí)驗(yàn)研究中的應(yīng)用概況

徐世芬,尹平,吳君怡,曹燕

(上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院,上海 200071)

行為學(xué)作為一門與生理學(xué)相關(guān)的新興科學(xué),近年來被廣泛研究和應(yīng)用,尤其在疾病的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中。針灸治療神經(jīng)精神疾病的機(jī)制研究中,應(yīng)用行為學(xué)評(píng)分是對(duì)針灸療效的判定。該文就針灸治療神經(jīng)精神疾病的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中應(yīng)用行為學(xué)的情況進(jìn)行歸納和總結(jié),并指出所存在的問題和改進(jìn)方法。

針灸療法;行為學(xué)評(píng)定;實(shí)驗(yàn)研究;大鼠;小鼠

行為學(xué)評(píng)價(jià)被廣泛應(yīng)用于各種實(shí)驗(yàn)研究中,作為療效評(píng)價(jià)的指標(biāo)之一,尤其是神經(jīng)精神疾病的機(jī)制研究中的重要組成部分。本文就近年來以大鼠或者小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,通過使用針灸的干預(yù)方法來研究其對(duì)一系列行為學(xué)指標(biāo)產(chǎn)生影響的文獻(xiàn)進(jìn)行綜述,并給予初步的分析。

1 運(yùn)動(dòng)功能的評(píng)價(jià)

運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分一般用于腦血管疾病、腦外傷和脊髓損傷等方面的的療效評(píng)定。針灸的實(shí)驗(yàn)研究中,用于評(píng)定針灸干預(yù)中樞神經(jīng)疾病的的療效指標(biāo)之一,觀察大鼠或者小鼠的肌力和運(yùn)動(dòng)情況。

1.1 Zea Longa評(píng)分[1]

5分制評(píng)分,0分為無神經(jīng)缺損癥狀;1分為不能完全伸展對(duì)側(cè)前爪;2分為向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈;3分為向?qū)?cè)傾倒;4分為不能自發(fā)行走,意識(shí)喪失。

張聞東等[2]針刺對(duì)超早期腦缺血再灌注大鼠進(jìn)行干預(yù),并用Zea Longa評(píng)分方法對(duì)大鼠神經(jīng)損傷行為評(píng)分進(jìn)行評(píng)定,發(fā)現(xiàn)在缺血再灌注后12 h、24 h針刺組大鼠神經(jīng)損傷行為評(píng)分與模型組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05),說明缺血再灌注后12 h、24 h針刺組大鼠神經(jīng)損傷行為得到較為明顯改善,針刺超早期腦缺血再灌注大鼠可促進(jìn)其神經(jīng)行為功能的恢復(fù)。模型組不做干預(yù),電針組取百會(huì)、大椎、曲池、足三里穴給予電針治療。崔寶娟[3]用電針干預(yù)局灶性早期腦缺血大鼠模型,分別于腦缺血后24 h,48 h及72 h用Zea Longa方法觀察大鼠神經(jīng)行為學(xué)變化,并測定缺血半暗帶區(qū)凋亡因子半膚氨酸蛋白酶3(Caspase3)表達(dá),行為學(xué)結(jié)果與同時(shí)間點(diǎn)模型組比較,電針組均有顯著性差異(＜0.05,＜0.01),電針組組內(nèi)比較,72 h組與24 h組相比有顯著性差異(＜0.01),表明電針刺激能有效改善腦缺血大鼠的神經(jīng)功能,且有累積效應(yīng)。

1.2 Bederson評(píng)分[4]

6級(jí)5分法,正常為5級(jí)(0分),表現(xiàn)為無神經(jīng)功能缺損癥狀;4級(jí)(1分)為輕微缺損,表現(xiàn)為前肢蜷縮或屈曲,主要是持續(xù)性腕屈曲或肩內(nèi)收伴肘部伸展;3級(jí)(2分)為中度缺損,表現(xiàn)為前肢持續(xù)性蜷縮或屈曲,可見腕、肘全部屈曲、肩部內(nèi)收或內(nèi)旋;2級(jí)(3分)為嚴(yán)重缺損,表現(xiàn)為持續(xù)性肢體蜷縮或者屈曲,一次肢體推力抵抗持續(xù)性減弱,自主活動(dòng)時(shí)不伴肢體劃圈行為;1級(jí)(4分)為非常嚴(yán)重缺損,表現(xiàn)為雙側(cè)肢體持續(xù)性蜷縮或屈曲,一側(cè)肢體抵抗力持續(xù)性減弱,自主活動(dòng)時(shí)出現(xiàn)肢體劃圈行為;0級(jí)(5分),表現(xiàn)為無自發(fā)性活動(dòng),出現(xiàn)意識(shí)障礙。

周利等[5]采用頭針治療卒中易感性自發(fā)性高血壓大鼠,應(yīng)用Bederson評(píng)分評(píng)定大鼠神經(jīng)功能缺損情況,結(jié)果1星期后,頭針組與空白對(duì)照組相比,神經(jīng)功能缺損程度有顯著改善(＜0.05)。周爽等[6]對(duì)高血壓性腦出血大鼠電針?biāo)疁稀?nèi)關(guān)、足三里,觀察其6 h、24 h、48 h和72 h的Bedserson評(píng)分,結(jié)果顯示,電針治療后神經(jīng)癥狀明顯改善,并隨時(shí)間的推移逐漸趨于恢復(fù),與模型組比較有顯著性差異(＜0.01,＜0.05)。

1.3 Zausinger評(píng)分法[7]

Zausinger6分法,0分為不能自發(fā)行走;1分為自由走動(dòng)狀態(tài)下向病變對(duì)側(cè)旋轉(zhuǎn);2分為抓住鼠尾,大鼠向病變對(duì)側(cè)旋轉(zhuǎn);3分為病變對(duì)側(cè)的側(cè)壓力抵抗力下降;4分為不能伸直病變對(duì)側(cè)前爪,甚至全身向?qū)?cè)屈曲;5分為無神經(jīng)功能缺損。李雅潔等[8]進(jìn)行了針刺水溝穴治療腦梗死大鼠模型的參數(shù)優(yōu)化研究,針刺治療時(shí)間為栓線阻塞大腦中動(dòng)脈后3 h及之后每隔12 h的共計(jì)6個(gè)時(shí)間點(diǎn)。于末次治療后,進(jìn)行大鼠Zausinger神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分以及軟腦膜微循環(huán)和血流量測定,結(jié)果發(fā)現(xiàn)手針操作針刺水溝穴治療腦梗死的最佳參數(shù)為針刺頻率為3次/s,針刺時(shí)間為5 s。

1.4 Garcia評(píng)分法[9]

①自發(fā)活動(dòng)(0～3分),在大鼠籠中觀察5 min,觀察其靠近籠壁及探究環(huán)境的能力;②提尾觀察四肢運(yùn)動(dòng)的對(duì)稱性(0～3分);③將大鼠置于桌子邊緣,保持兩后肢騰空,觀察其兩前肢運(yùn)動(dòng)的對(duì)稱性(0～3分);④將大鼠置于籠壁上觀察其攀爬能力,提尾拉下時(shí)感受其攀附力(1～3)分;⑤本體感覺(1～3)分,用鈍棒觸摸其兩側(cè),觀察其對(duì)刺激的反應(yīng);⑥觸須反應(yīng)(1～3分),從動(dòng)物后面用鈍棒觸胡須觀察其反應(yīng)。評(píng)分范圍在3～18分之間,18分者正常。

穆艷云等[10]用線栓法閉塞SD大鼠大腦中動(dòng)脈,制作局灶性腦缺血再灌注模型。造模后2 h給予電針干預(yù)百會(huì)、大椎穴,進(jìn)行Garcia行為學(xué)評(píng)定,結(jié)果電針組大鼠的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分明顯高于模型組(＜0.01),并且電針能提高海馬神經(jīng)元細(xì)胞線粒體離子泵ATP酶的活性,從而改善神經(jīng)細(xì)胞的能量代謝。

1.5 Kikuo評(píng)分法[11]

Kikuo腦卒中指數(shù)評(píng)分法,根據(jù)所出現(xiàn)的一般精神狀態(tài)、偏癱等神經(jīng)病學(xué)和行為障礙,制定出17分制評(píng)分法,癥狀越嚴(yán)重者,分?jǐn)?shù)越高。

王援朝等[12]采用凝閉大腦中動(dòng)脈皮層支的方法制作大鼠缺血性中風(fēng)模型。造模成功后立即給予電針耳穴,取緣中和皮質(zhì)下,留針20 min,每日2次,共4 d,并在術(shù)后24 h,48 h和72 h觀察Kikuo行為學(xué)評(píng)分,結(jié)果耳針治療后神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分在24 h和72 h均較模型組有顯著降低(＜0.01)。1星期后的血液流變學(xué)檢查提示,耳針治療可以調(diào)節(jié)缺血區(qū)血液灌注量促進(jìn)損傷腦細(xì)胞恢復(fù)。

1.6 Rivlin斜板實(shí)驗(yàn)[13]

傾斜板從水平位置起,每隔5°調(diào)整角度,板面附有帶淺槽的橡皮墊,將動(dòng)物朝左或朝右放置板上,角度從小到大漸增,以其能停留5 s而不跌落的最大角度來做評(píng)定,重復(fù)3次,取其平均值。該實(shí)驗(yàn)主要用于脊髓損傷后的動(dòng)物后肢運(yùn)動(dòng)神經(jīng)功能的評(píng)定。

李祖劍等[14]運(yùn)用ALLEN’s致傷法制成大鼠T12中度脊髓損傷模型,給予電針治療,應(yīng)用斜板實(shí)驗(yàn)對(duì)不同組的大鼠在造模后12 h,治療1星期和4星期后分別進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分。結(jié)果顯示,在脊髓損傷后12 h和1星期,電針組與單純針刺以及模型組在行為學(xué)無明顯差異,而在4星期,電針組在斜板實(shí)驗(yàn)方面明顯高于其他組別(均＜0.01)。因此,電針治療能促進(jìn)脊髓損傷大鼠后肢功能恢復(fù),提高其行為學(xué)評(píng)分。

以上評(píng)分方法多應(yīng)用于有肢體功能障礙的疾病評(píng)定,如腦血管疾病、脊髓損傷等。Zea Longa評(píng)分、Bederson評(píng)分、Zausinger評(píng)分、Garcia評(píng)分以及Kikuo評(píng)分均類似于臨床上神經(jīng)功能缺損評(píng)分方法。以上評(píng)分方法從簡單到復(fù)雜,從粗略到精細(xì)逐漸遞增。Rivlin斜板實(shí)驗(yàn)用于評(píng)定脊髓損傷,也比較簡單。評(píng)分方法制定得越精細(xì)越能減少評(píng)定誤差。因?yàn)樵u(píng)定方法均為人為操作,具有明顯的主觀性,要減少評(píng)定的主觀性造成的誤差,就應(yīng)該多人評(píng)定以求平均值。但所查文獻(xiàn)中未發(fā)現(xiàn)一篇報(bào)道提到評(píng)分是由3個(gè)以上評(píng)分員共同參與進(jìn)行,以計(jì)算平均分?jǐn)?shù)作為最終分?jǐn)?shù)。也沒有文獻(xiàn)應(yīng)用盲法,即評(píng)分者與操作者以及統(tǒng)計(jì)人員彼此分開,絕大多數(shù)研究都是先發(fā)現(xiàn)了行為學(xué)的變化后再進(jìn)行斷頭取腦或者取血進(jìn)行進(jìn)一步的機(jī)制研究,以說明針刺對(duì)行為學(xué)改變的原理。準(zhǔn)確、公正、精細(xì)的行為學(xué)判斷是先決條件,因此其重要性可見。應(yīng)用客觀、靈敏性高,易操作的行為學(xué)評(píng)價(jià)方法進(jìn)行針刺對(duì)神經(jīng)功能損傷的實(shí)驗(yàn)研究是非常關(guān)鍵的。

2 自發(fā)行為的評(píng)價(jià)

自發(fā)行為的評(píng)價(jià)主要用于焦慮、抑郁等狀態(tài)的評(píng)定。在大鼠的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用最多的有Open-field(礦場)實(shí)驗(yàn)、糖水實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳和十字高架實(shí)驗(yàn)等。

2.1 礦場實(shí)驗(yàn)

Open-field test[15]是研究動(dòng)物進(jìn)入開闊環(huán)境后的各種行為,例如動(dòng)物對(duì)新開闊環(huán)境的恐懼而主要在周邊區(qū)域活動(dòng),在中央?yún)^(qū)域活動(dòng)較少,但動(dòng)物的探究特性又促使其產(chǎn)生在中央?yún)^(qū)域活動(dòng)的動(dòng)機(jī),也可觀察由此而產(chǎn)生的焦慮、抑郁心理。以往所用的測試工具是高40 cm,長、寬均為80 cm的立方體敞箱,底面用白線劃分為面積相等的25塊。將大鼠置于敞箱底面的中心方格內(nèi),以動(dòng)物穿越底面的格數(shù)(4爪均進(jìn)入的方格方可記數(shù))記錄為水平運(yùn)動(dòng)次數(shù),以后肢直立次數(shù)(兩前爪騰空或攀附箱壁)記錄為垂直運(yùn)動(dòng)次數(shù)。記錄時(shí)間為3或5 min。如韓焱晶等[16]觀察電針治療慢性不可預(yù)見性輕度刺激結(jié)合孤養(yǎng)方法制成的抑郁大鼠模型的作用,用底部有25塊格的面積相等的立方體敞箱來測定動(dòng)物的活動(dòng)情況。結(jié)果,電針治療后的抑郁模型大鼠的運(yùn)動(dòng)次數(shù)和站立次數(shù)明顯高于模型組,說明電針的治療作用。

該方法主要應(yīng)用于焦慮、抑郁情緒所致行為的評(píng)價(jià),以及其他精神疾病的行為學(xué)評(píng)價(jià),被廣泛應(yīng)用,目前還沒有更好的評(píng)價(jià)方法可以替代。近些年來,Open- field視頻測試系統(tǒng)的應(yīng)用,為該法的測試提供了更加客觀的數(shù)據(jù)。多采用紅外線光束追蹤法測定動(dòng)物總運(yùn)動(dòng)情況。Xu S等[17]運(yùn)用視頻分析系統(tǒng),測定抑郁大鼠的自發(fā)行為,運(yùn)動(dòng)速度、總運(yùn)動(dòng)路程和周邊及中央活動(dòng)時(shí)間與路程,站立次數(shù)等,不需要人工計(jì)數(shù),完全電腦自動(dòng)記錄與分析數(shù)據(jù),客觀可靠。

2.2 糖水實(shí)驗(yàn)

糖水實(shí)驗(yàn)[18]是大鼠在禁水24 h后,同時(shí)給予1%蔗糖水和普通飲用水,24 h后測定兩種水的消耗量,如果蔗糖水的消耗量明顯減少,說明大鼠的糖水偏好降低,主要用于抑郁癥模型大鼠的測定。如莊禮興等[19]觀察針刺與埋線不同方法治療抑郁癥大鼠的療效差異,針刺和埋線百會(huì)、心俞、肝俞穴后,檢測大鼠糖水消耗量,結(jié)果兩種方法治療后糖水消耗量明顯增加,與模型組比較有顯著差異,說明針刺和埋線均能改善抑郁狀態(tài)。

糖水消耗試驗(yàn)的精確性不好把握,除非使用密封度以及精確度非常好的水瓶,不存在傾斜時(shí)滴水現(xiàn)象。否則誤差比較大,很難得到確切數(shù)據(jù)。很多文獻(xiàn)報(bào)道是斷水24 h后只給蔗糖水,正確測量方法給兩個(gè)水瓶,1個(gè)裝有蔗糖水,1個(gè)裝有普通水,分別測量兩種水的消耗量。

2.3 強(qiáng)迫游泳

強(qiáng)迫游泳(forced swimming test)[20]是評(píng)價(jià)抑郁動(dòng)物模型的經(jīng)典測試方法,該實(shí)驗(yàn)方法是一種行為絕望實(shí)驗(yàn)法,其原理是當(dāng)大鼠放進(jìn)一個(gè)有限的空間使之游泳,開始時(shí)拼命游泳力圖逃脫,很快就變成漂浮不動(dòng)狀態(tài),僅露出鼻孔保持呼吸,四肢偶爾劃動(dòng)以保持身體不至于沉下去,實(shí)際是動(dòng)物放棄逃脫的希望,屬于行為絕望。經(jīng)典的強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)分兩天進(jìn)行。第一天讓大鼠在25℃的深水中強(qiáng)迫游泳15 min,取出后烘干,歸籠。第二天,在同樣的條件下進(jìn)行強(qiáng)迫游泳5 min,記錄不動(dòng)時(shí)間。不動(dòng)時(shí)間越短,抗抑郁作用越強(qiáng)。目前該實(shí)驗(yàn)也多用于視頻分析系統(tǒng),數(shù)據(jù)記錄客觀準(zhǔn)確。如Xu S等[16]觀察電針百會(huì)、大椎對(duì)抑郁模型大鼠的效果中,應(yīng)用強(qiáng)迫游泳測試視頻分析系統(tǒng),記錄大鼠在25℃水中的漂浮不動(dòng)時(shí)間,結(jié)果電針治療后的不動(dòng)時(shí)間較假針刺組以及模型組明顯減少,說明電針有明顯的抗抑郁作用。

強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)的結(jié)果容易受很多因素的影響,如水溫、水深、動(dòng)物本身以及季節(jié)等。水溫一般是要控制在25℃左右,水深的選擇應(yīng)以動(dòng)物無法逃脫為標(biāo)準(zhǔn)。一般大鼠實(shí)驗(yàn)時(shí)水深為17～33 cm,小鼠實(shí)驗(yàn)時(shí)水深約10 cm。水太深,動(dòng)物難以使用前爪和尾保持不動(dòng),就會(huì)游動(dòng)和攀爬。水太淺,動(dòng)物可利用尾和后爪保持平衡而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。一般冬季和夏季的試驗(yàn)數(shù)據(jù)差距很大,冬季動(dòng)物不愿動(dòng),而夏季非?；钴S。所以如何很好地把握試驗(yàn)數(shù)據(jù),排除各種影響因素都至關(guān)重要。

2.4 十字高架實(shí)驗(yàn)

高架十字[21]是國際上公認(rèn)的測試動(dòng)物焦慮行為的首要裝置,主要測試動(dòng)物的非條件性反射,它以動(dòng)物自發(fā)性行為為基礎(chǔ),設(shè)計(jì)出兩個(gè)開臂和兩個(gè)閉臂的迷宮,并將迷宮抬高以提高動(dòng)物進(jìn)入開臂時(shí)的恐懼。該實(shí)驗(yàn)室利用動(dòng)物對(duì)新異環(huán)境為探究特性和對(duì)高懸敞開臂的恐懼心理,形成動(dòng)物的矛盾沖突來考察其焦慮狀態(tài)。徐海洋等[22]電針百會(huì)、三陰交治療慢性情緒應(yīng)激焦慮模型大鼠,采用高架十字迷宮測試系統(tǒng)觀察大鼠的行為,結(jié)果電針可以提高慢性情緒應(yīng)激焦慮模型大鼠進(jìn)入開臂的次數(shù)和在開臂停留時(shí)間的百分比,具有明顯抗焦慮作用。

高架十字迷宮是一個(gè)簡單、快速、結(jié)果重復(fù)性好的焦慮檢測模式。為了提高大鼠入臂總次數(shù),避免大鼠躲在閉臂,通常將大鼠置于開場中活動(dòng)5 min后再放入迷宮。實(shí)驗(yàn)前5～7 d每天撫摸動(dòng)物1～2 min也可減少無關(guān)應(yīng)激刺激對(duì)本實(shí)驗(yàn)的影響。目前還沒有更好的測定焦慮情緒行為的測試系統(tǒng)和方法。

3 學(xué)習(xí)記憶的評(píng)定

學(xué)習(xí)記憶功能評(píng)定一般包括Morris水迷宮、Y迷宮、跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)、避暗實(shí)驗(yàn)等,主要是評(píng)價(jià)大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。

3.1 Morris水迷宮

Morris水迷宮[23]是英國心理學(xué)家Morris于20世紀(jì)80年代初設(shè)計(jì)并應(yīng)用于腦學(xué)習(xí)記憶機(jī)制研究的一種實(shí)驗(yàn)手段,其在癡呆研究中的應(yīng)用非常普遍。較為經(jīng)典的Morris水迷宮,測試程序主要包括定位航行試驗(yàn)和空間探索試驗(yàn)兩個(gè)部分。其中定位航行試驗(yàn)(place navigation)歷時(shí)4 d,每天將大鼠面向池壁分別從4個(gè)入水點(diǎn)放入水中若干次,記錄其尋找到隱藏在水面下平臺(tái)的時(shí)間(逃避潛伏期,escape latency)?？臻g探索試驗(yàn)(spatial probe)是在定位航行試驗(yàn)后去除平臺(tái),然后任選一個(gè)入水點(diǎn)將大鼠放入水池中,記錄其在一定時(shí)間內(nèi)的游泳軌跡,考察大鼠對(duì)原平臺(tái)的記憶。遠(yuǎn)慧茹等[24]觀察針刺治療多發(fā)性腦梗死癡呆大鼠的療效,通過栓子注入法制作多發(fā)梗死性癡呆模型,隨機(jī)分為模型組、針刺組和非穴位組,應(yīng)用Morris水迷宮觀測大鼠的空間記憶能力,結(jié)果針刺組大鼠在隱蔽平臺(tái)實(shí)驗(yàn)、反向?qū)嶒?yàn)以及探索實(shí)驗(yàn)中的學(xué)習(xí)成績均明顯優(yōu)于模型組和非穴組,說明針刺可明顯改善多發(fā)性腦梗死癡呆大鼠的空間記憶能力。

3.2 Y迷宮

Y形迷宮(Y maze)即為三等分輻射式迷宮,由3個(gè)支臂和1個(gè)連接區(qū)組成,三臂相互夾角為120°,每臂末部鋪以食物槽,用以盛放食物。各臂可依次分為起步區(qū)、錯(cuò)誤臂以及正確臂。其頂端有一盞15 W的信號(hào)燈,底部有電擊裝置,訓(xùn)練大鼠按照信號(hào)燈跑向安全通道,一般將動(dòng)物經(jīng)訓(xùn)練而達(dá)到學(xué)會(huì)的標(biāo)準(zhǔn)定為連續(xù)10次測試中有9次正確者。記錄每一動(dòng)物迷路分辨學(xué)習(xí)達(dá)到學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)所需的訓(xùn)練數(shù),以此作為評(píng)價(jià)動(dòng)物學(xué)習(xí)能力好壞的客觀指標(biāo)。Y迷宮主要用于優(yōu)先選擇和空間學(xué)習(xí)任務(wù)的檢測。和Y型迷宮類似的還有T型迷宮,其實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)原理和實(shí)驗(yàn)方案和Y型迷宮都十分相似,只是把迷宮的形狀由Y型換成T型。盧雨微等[25]探討耳針對(duì)血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用,用Y迷宮檢測大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,結(jié)果耳針治療后大鼠的電擊次數(shù)明顯較模型組減少,說明耳針能明顯改善血管性癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶成績。

從理論上講,Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)是一個(gè)厭惡驅(qū)動(dòng)的實(shí)驗(yàn),而臂形迷宮實(shí)驗(yàn)是食欲驅(qū)動(dòng)的實(shí)驗(yàn)。水迷宮與放射臂狀迷宮相比較的主要優(yōu)越性在于水迷宮中,動(dòng)物訓(xùn)練所需的時(shí)間較短(1星期),而臂形迷宮則需要幾星期的訓(xùn)練時(shí)間;Morris水迷宮空間寬闊,動(dòng)物氣味影響幾乎不存在。因此,Morris水迷宮是目前世界公認(rèn)的較為客觀的學(xué)習(xí)記憶功能評(píng)價(jià)方法。

3.3 跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)

跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)的裝置為1個(gè)25 cm×20 cm×75 cm的被動(dòng)回避反應(yīng)箱,箱底鋪直徑為1 mm銅柵,通36 V交流電,銅柵的一角固定1個(gè)8 cm×8 cm×5 cm大小的塑料泡沫塊作為動(dòng)物回避電擊反應(yīng)的安全區(qū)。先將大鼠放入箱中自由活動(dòng)3 min,熟悉環(huán)境,然后接通銅柵電源,大鼠受到電擊,其正常反應(yīng)是跳回泡沫塊以躲避傷害性刺激,多數(shù)動(dòng)物可能再次或多次跳至銅柵上,受到電擊(雙足同時(shí)接觸銅柵)又跳回安全區(qū),如此訓(xùn)練5 min,并記錄每只大鼠首次找到安全區(qū)所需的時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間)和5 min內(nèi)受到的電擊次數(shù)(錯(cuò)誤次數(shù)),作為學(xué)習(xí)測試成績。24 h后重復(fù)上述試驗(yàn),記錄每只大鼠第一次跳下安全區(qū)的時(shí)間(潛伏期)和錯(cuò)誤次數(shù),作為記憶測試成績。蔣希成等[26]觀察針刺對(duì)老年癡呆大鼠的療效,結(jié)果針刺組大鼠跳臺(tái)潛伏期較模型組和治療前明顯延長,錯(cuò)誤次數(shù)明顯減少。說明針刺可明顯提高AD大鼠的記憶能力。

學(xué)習(xí)記憶實(shí)驗(yàn)方法的基礎(chǔ)是條件反射,跳臺(tái)法就是其中的一種較常用的方法,該方法的優(yōu)點(diǎn)是簡便易行,既可觀察對(duì)記憶過程的影響,也可觀察對(duì)學(xué)習(xí)的影響,有較高的敏感性。

3.4 避暗實(shí)驗(yàn)

避暗實(shí)驗(yàn)又稱為被動(dòng)回避(passive avoidance),是利用小鼠或大鼠具有趨暗避明的習(xí)性設(shè)計(jì)的裝置,一半是暗室,一半是明室,中間有一小洞相連。暗室底部鋪有通電的銅柵。動(dòng)物進(jìn)入暗室即受到電擊,大鼠受到電擊后可自行逃出暗室,記錄潛伏期及5 min內(nèi)受到電擊的次數(shù)。方程[27]研究電針對(duì)腦缺血再灌注大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響,采用避暗實(shí)驗(yàn)來觀察大鼠的行為變化。結(jié)果腦缺血1.5 h再灌注12 h,模型組大鼠避暗潛伏期縮短,錯(cuò)誤次數(shù)明顯增多,電針干預(yù)可以延長避暗潛伏期,減少錯(cuò)誤次數(shù),說明電針,特別是術(shù)前電針預(yù)處理可以改善缺血模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能。

本實(shí)驗(yàn)也同樣簡單易行,操作簡便,以潛伏期為指標(biāo),動(dòng)物的差異性比較小。對(duì)記憶過程特別是記憶再現(xiàn)有較高的敏感度。

近些年來,自發(fā)行為和學(xué)習(xí)記憶能力的測試,大多采用視頻分析系統(tǒng),避免了人為因素的誤差,增加了行為學(xué)測定的客觀性和準(zhǔn)確性,為進(jìn)一步的機(jī)制研究奠定了基礎(chǔ)。

4 評(píng)價(jià)與展望

針灸作為一種干預(yù)措施,治療神經(jīng)精神系統(tǒng)疾病,臨床療效確切,并被廣泛應(yīng)用。但其機(jī)制研究尚需要進(jìn)一步深入進(jìn)行。而行為學(xué)評(píng)定在基礎(chǔ)研究中可以直觀顯示出針灸的治療效果,已經(jīng)被應(yīng)用于針刺效應(yīng)及機(jī)制研究中。行為學(xué)的評(píng)定在研究中起關(guān)鍵作用,如果評(píng)定不客觀,數(shù)據(jù)誤差較大,都直接影響了針刺機(jī)制的結(jié)果。在今后的實(shí)驗(yàn)研究中,應(yīng)該盡量采用視頻分析系統(tǒng),以求最大化的客觀性;具體操作應(yīng)該根據(jù)權(quán)威性的操作指南進(jìn)行,避免操作方法上的錯(cuò)誤;對(duì)于無視頻分析系統(tǒng)的行為學(xué)測試方法,盡量采用多人測試,以求平均值。在行為學(xué)方法的選擇上,要多樣化,如抑郁癥的評(píng)定,可同時(shí)選擇自發(fā)行為、強(qiáng)迫游泳、糖水消耗量等幾個(gè)行為學(xué)方法,而避免單一方法的假陽性的出現(xiàn)。期望針灸的基礎(chǔ)研究設(shè)計(jì)更合理,行為學(xué)的應(yīng)用更優(yōu)化。

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Survey of the Application of Behavioral Assessment to Experimental Studies of Acupuncture Treatment for Nervous and Mental Diseases

-,,-,.

,200071,

Behavioral science as an emerging physiology-related science has been widely studied and used, especially in animal experiments in diseases. In studies of the mechanism of acupuncture treatment for nervous and mental diseases, its effect has been evaluated using behavior scores. This article summarizes the application of behavioral science to animal experiments in acupuncture treatment for nervous and mental diseases, points out existent problems and proposes methods for improvement.

Acupuncture therapy; Behavioral assessment; Experimental study; Rats; Mice

1005-0957(2014)03-0278-05

R2-03

A

10.13460/j.issn.1005-0957.2014.03.0278

2013-09-14

上海市科委課題(10ZR1428800);教育部博士點(diǎn)基金項(xiàng)目(20103107120013);國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81102636)

徐世芬(1975 - ),女,副主任醫(yī)師,E-mail:xu_teacher2006@ 126.com