成骨細(xì)胞局部調(diào)節(jié)的信號(hào)傳導(dǎo)通路

吳耀國，遲志永

(哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院骨科，黑龍江 哈爾濱 150001)

骨骼是一組不斷進(jìn)行新陳代謝的器官，其代謝的動(dòng)態(tài)平衡依靠成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞間的相互調(diào)節(jié)。成骨細(xì)胞是骨組織形成的主要功能細(xì)胞，還參與破骨細(xì)胞的分化及成熟的調(diào)節(jié)，因此，成骨細(xì)胞的調(diào)節(jié)在骨代謝過程中發(fā)揮重要作用。成骨細(xì)胞的調(diào)節(jié)包括全身性調(diào)節(jié)和局部調(diào)節(jié)，其中局部調(diào)節(jié)對(duì)成骨細(xì)胞分化、成熟及功能多個(gè)環(huán)節(jié)的調(diào)節(jié)發(fā)揮重要作用，因此成骨細(xì)胞的局部調(diào)節(jié)成為諸多學(xué)者研究的熱點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，許多局部調(diào)節(jié)因子及信號(hào)傳導(dǎo)通路對(duì)成骨細(xì)胞分化、成熟及細(xì)胞活性具有重要作用。其中Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路，骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenic protein，BMP)信號(hào)傳

導(dǎo)通路及絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)信號(hào)傳導(dǎo)通路與成骨細(xì)胞局部調(diào)節(jié)關(guān)系密切。

1 經(jīng)典Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路

Wnt蛋白作為Wnt通路的配體，是一類含有半胱氨酸的酸性分泌性糖蛋白，Wnt信號(hào)通路以是否具有β-連環(huán)蛋白(β-catenin)參與分為經(jīng)典Wnt信號(hào)通路(Wnt/β-catenin)和非經(jīng)典Wnt信號(hào)通路。Wnt/β-catenin通路主要包括細(xì)胞外因子Wnt蛋白，跨膜卷曲蛋白受體Frizzled，低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5/6(Low density lipoprotein receptor related protein 5 or 6，LRP5/6)，位于胞質(zhì)內(nèi)的蓬亂蛋白(Dishevelled，Dsh)，β-catenin，細(xì)胞支架蛋白(Axin)，淋巴增強(qiáng)因子TCF/LEF及下游靶基因，Wnt/β-catenin通路可被Wnt 1、Wnt 2、Wnt 3、Wnt 3a、Wnt 8等Wnt配體激活。配體與Frizzled的7次跨膜受體和LRP5/6結(jié)合后Wnt/β-catenin通路被激活[1]。

經(jīng)典Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路對(duì)成骨細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用。Wnt信號(hào)配體能同成骨細(xì)胞膜的Frizzled結(jié)合，活化的Frizzled胞內(nèi)區(qū)作用于Dvl，Dvl激活可抑制由Axin、糖原合成激酶3(Glycogen synthase kinase-3，GSK-3)、腺瘤樣結(jié)腸息肉病基因(Adenomatous polyposis coli，APC)編碼的蛋白組成的降解復(fù)合體對(duì)β-catenin的降解，使其在胞質(zhì)中積累，隨后進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)激活TCF/LEF，啟動(dòng)靶基因轉(zhuǎn)錄。研究表明Wnt/β-catenin通路在促成骨細(xì)胞增殖分化中起到重要作用。

Yao等[2]觀察發(fā)現(xiàn)過度表達(dá)Wnt蛋白拮抗因子(Dickkopf1，DKK1)轉(zhuǎn)基因大鼠的成骨細(xì)胞數(shù)量明顯下降，骨鈣素表達(dá)量也顯著降低。DKK1是一種Wnt信號(hào)通路的天然拮抗劑，直接或間接與胞膜上LRP5/6競爭性結(jié)合，阻斷Wnt通路的信號(hào)傳導(dǎo)。骨鈣素為成骨細(xì)胞分化中晚期指標(biāo)，提示W(wǎng)nt/β-catenin通路對(duì)分化中晚期的成骨細(xì)胞調(diào)控相關(guān)。β-catenin是Wnt/β-catenin信號(hào)通路中最關(guān)鍵的因子，主要存在于胞質(zhì)中。Liu等[3]發(fā)現(xiàn)β-catenin基因敲除的小鼠骨質(zhì)疏松現(xiàn)象明顯，相反β-catenin基因過度表達(dá)小鼠出現(xiàn)骨量異常增加，過度激活Wnt/β-catenin信號(hào)傳導(dǎo)通路可促進(jìn)骨基質(zhì)礦化過程，抑制Wnt/β-catenin信號(hào)傳導(dǎo)通路骨基質(zhì)礦化受阻，表明Wnt/β-catenin信號(hào)通路對(duì)調(diào)節(jié)正常骨密度和骨礦物沉積起著重要作用。Holmen等[4]試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)β-catenin基因敲除的成骨細(xì)胞分化早期的Osterix轉(zhuǎn)錄因子，I型膠原蛋白及分化晚期骨鈣素表達(dá)量降低，提示W(wǎng)nt/β-catenin信號(hào)通路對(duì)成骨細(xì)胞分化的早期和晚期階段均有調(diào)節(jié)作用。

針對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)傳導(dǎo)通路對(duì)成骨細(xì)胞的正向調(diào)節(jié)作用，有學(xué)者提出了不同的觀點(diǎn)，認(rèn)為Wnt信號(hào)通路對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)成骨分化具有抑制作用。Derfoul等[5]用逆轉(zhuǎn)錄病毒基因轉(zhuǎn)染方法使Wnt 3a在小鼠多能胚胎間充質(zhì)細(xì)胞株(C3H10T1/2)中過度表達(dá)。發(fā)現(xiàn)成骨細(xì)胞增殖明顯，堿性磷酸酶表達(dá)量增加，但骨鈣素、骨涎蛋白及骨橋蛋白等成骨標(biāo)記物基因的轉(zhuǎn)錄被明顯抑制。Quarto等[6]用Wnt 3a干預(yù)未分化的間充質(zhì)細(xì)胞(undifferentiated mesenchymal cells，mASCs)，幼齡小鼠顱骨成骨細(xì)胞FpN 1和成年小鼠顱骨成骨細(xì)胞FpN 60、mASCs和FpN 1增殖和成骨分化被明顯抑制，相反FpN 60成骨過程增強(qiáng)，且與Wnt 3a的作用濃度呈正相關(guān)。推測Wnt/β-catenin信號(hào)傳導(dǎo)通路對(duì)成骨細(xì)胞調(diào)節(jié)作用的差異可能與成骨細(xì)胞的分化階段密切相關(guān)。

大量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路在成骨細(xì)胞增殖和分化的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，但目前對(duì)于Wnt通路對(duì)成骨細(xì)胞分化調(diào)節(jié)作用的分子機(jī)制還不清楚。

2 BMP信號(hào)傳導(dǎo)通路

BMP是一種酸性蛋白，屬于轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β)超家族。Smad蛋白為BMPs受體下游重要的信號(hào)分子，包括受體調(diào)節(jié)型Smads(receptor-regulated Smads，R-Smads)(Smads1/3/5/8)，共同通用型Smad(common Smads，C-Smad)和抑制型Smads(inhibitory Smads，I-Smads)。BMPs與成骨細(xì)胞膜表面的骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體(bone morphogenic protein receptor，BMPR)結(jié)合使其活化，激活的BMPR導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)中Smad蛋白磷酸化從而調(diào)節(jié)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄，其中BMP-Smad1/5/8信號(hào)傳導(dǎo)通路與成骨細(xì)胞的分化、成熟的調(diào)節(jié)密切相關(guān)。

2.1 BMP信號(hào)通路對(duì)成骨細(xì)胞的正向調(diào)節(jié) Zhao等[7]發(fā)現(xiàn)BMP2基因敲除的小鼠成骨細(xì)胞增殖，分化過程受阻，體內(nèi)缺乏成熟的成骨細(xì)胞。Han等[8]研究BMP2對(duì)成骨細(xì)胞的作用，用BMP2干預(yù)小鼠胚胎成骨細(xì)胞(MC3T3-E1)觀察成骨指標(biāo)：堿性磷酸酶、I型膠原蛋白、骨鈣素及促成骨轉(zhuǎn)錄因子——核心結(jié)合因子(Runt-related transcription factor 2，Runx2)的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Runx2及堿性磷酸酶的表達(dá)量顯著增加。Runx2是BMP2通路的靶基因，BMP2通過激活Smad1/5/8啟動(dòng)Runx2的基因轉(zhuǎn)錄。Teplyuk等[9]在靶基因表達(dá)的研究中發(fā)現(xiàn)Runx2基因缺陷的小鼠體內(nèi)無成熟的成骨細(xì)胞，缺乏軟骨內(nèi)成骨及膜內(nèi)成骨過程。Medici等[10]體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)過度表達(dá)BMP4可誘導(dǎo)移位骨化的早期病變，BMP4轉(zhuǎn)染組與對(duì)照組比較，堿性磷酸酶活性明顯增加。上述體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)表明BMP對(duì)成骨細(xì)胞的分化成熟有較顯著的促進(jìn)作用，推測BMP-Smad信號(hào)通路通過上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子Runx2的表達(dá)促進(jìn)成骨細(xì)胞分化。

2.2 BMP信號(hào)通路對(duì)成骨細(xì)胞的負(fù)向調(diào)節(jié) BMP信號(hào)傳導(dǎo)通路受到細(xì)胞內(nèi)外多種因子的負(fù)向調(diào)控。在諸多細(xì)胞外負(fù)調(diào)節(jié)因子中Noggin作為一種分泌性糖蛋白與BMP具有較強(qiáng)的親和力。Noggin與細(xì)胞表面的BMP受體結(jié)合，阻斷BMP通路下游的信號(hào)傳導(dǎo)。Devlin等[11]應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)使Noggin基因在小鼠體內(nèi)過度表達(dá)，發(fā)現(xiàn)小鼠股骨骨量較對(duì)照組下降23%～29%，部分小鼠于1個(gè)月后出現(xiàn)股骨病理性骨折。在細(xì)胞膜水平，跨膜蛋白BAMBI(BMP和Activin膜結(jié)合抑制劑)與BMPR-Ⅱ型受體結(jié)合抑制胞質(zhì)區(qū)Smad蛋白的激活，從而阻斷BMP-Smad信號(hào)通路對(duì)下游基因表達(dá)的調(diào)控。抑制性Smads(I-Smads，Smad6/7)是TGF-家族信號(hào)通路抑制劑，在胞漿內(nèi)I-Smads與BMPR-I結(jié)合從而阻斷R-Smads的活化。Hata等[12]發(fā)現(xiàn)I-Smads還能同C-Smad競爭R-Smads形成復(fù)合物?；罨腟mad 6和Smad 7抑制BMP的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。綜上所述，BMP信號(hào)通路對(duì)成骨細(xì)胞精確的雙向調(diào)控在維持骨量的平衡方面具有重要意義。

3 MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路

MAPK屬于絲氨酸/蘇氨酸激酶，是分布與細(xì)胞漿的一組具有雙重磷酸化功能的蛋白激酶。MAPK通路包括細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular-signal regulated protein kinase，ERK)，c-jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinases，JNK)，應(yīng)激激活蛋白(stress-activated protein kinase，SAPK)，P38MAPK[13]。其中ERK、JNK及P38MAPK均參與成骨細(xì)胞分化、成熟的調(diào)節(jié)。

3.1 ERK信號(hào)通路對(duì)成骨細(xì)胞的調(diào)節(jié) ERK1/2是一種蛋白激酶c-DNA序列。靜息狀態(tài)的ERK位于胞漿內(nèi)，ERK與酪氨酸激酶受體結(jié)合后活化，激活的ERK接受上游的級(jí)聯(lián)反應(yīng)信號(hào)，磷酸化后由胞漿轉(zhuǎn)位到細(xì)胞核調(diào)節(jié)細(xì)胞核內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子的活性[14]。

研究表明，許多細(xì)胞因子對(duì)成骨細(xì)胞增殖及分化的調(diào)控都與ERK通路的激活相關(guān)。以下實(shí)驗(yàn)證實(shí)了上述觀點(diǎn)，Jaiswal等[15]在誘導(dǎo)成人MSCs向成骨細(xì)胞分化的研究中發(fā)現(xiàn)成骨分化過程的啟動(dòng)與ERK通路的激活相關(guān)，應(yīng)用ERK抑制劑PD98059阻斷ERK通路，發(fā)現(xiàn)MSCs成骨分化障礙，并出現(xiàn)明顯的MSCs成脂分化現(xiàn)象。研究表明ERK通路能被成骨誘導(dǎo)劑激活，促進(jìn)MSCs向成骨細(xì)胞分化。Runx2是調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分化重要的轉(zhuǎn)錄因子。Franceschi等[16]在ERK信號(hào)通路對(duì)成骨細(xì)胞分化的研究中發(fā)現(xiàn)，活化狀態(tài)的ERK可調(diào)控Runx2的轉(zhuǎn)錄水平促進(jìn)成細(xì)胞增殖分化。Wirries等[17]應(yīng)用百里香醌(thymoquinone，TQ)干預(yù)MC3T3-E1，結(jié)果MC3T3-E1增殖明顯，并且出現(xiàn)較多鈣質(zhì)沉積。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)TQ促成骨細(xì)胞增殖及鈣化成骨過程均伴隨ERK磷酸化水平上調(diào)。Mahalingam等[18]在研究甲狀旁腺素(parathyroid hormone，PTH)促成骨作用的實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)用ERK阻斷劑U0126預(yù)先作用于成骨細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)PTH對(duì)成骨細(xì)胞的礦化作用減弱。應(yīng)力是參與成骨細(xì)胞調(diào)節(jié)的重要刺激因子，成骨細(xì)胞力學(xué)信號(hào)的傳導(dǎo)與ERK信號(hào)通路相關(guān)。Yan等[19]證實(shí)機(jī)械應(yīng)力可誘導(dǎo)MC3T3-E1的小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13，MMP-13)、原癌基因c-fos表達(dá)增加，信號(hào)調(diào)節(jié)激酶特異性抑制劑PD098059能夠抑制機(jī)械牽張力引起的MMP-13和c-fos表達(dá)，因此認(rèn)為機(jī)械牽張力可通過MAPK細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶的激酶-細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶途徑誘導(dǎo)MMP-13表達(dá)促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖分化。

3.2 JNK信號(hào)通路對(duì)成骨細(xì)胞的調(diào)節(jié) JNK是一類促絲裂原蛋白激酶，屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶。JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路通過氨基酸末端殘基磷酸化被激活，活化的JNK由胞質(zhì)轉(zhuǎn)位至核內(nèi)調(diào)控其下游的轉(zhuǎn)錄因子，參與細(xì)胞增殖、分化的調(diào)節(jié)[20]。

李定宇等[21]在剪切應(yīng)力誘導(dǎo)成骨相關(guān)基因表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，剪切應(yīng)力能夠上調(diào)JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路的磷酸化水平，促進(jìn)成骨相關(guān)基環(huán)氧酶2(cyclo-oxyge-nase-2，COX-2)、早期生長反應(yīng)因子(Early growth response 1，Egr-1)、c-fos和骨橋素的表達(dá)?？拙S霞等[22]誘導(dǎo)骨實(shí)質(zhì)來源的間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化加入成骨誘導(dǎo)劑發(fā)現(xiàn)JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路活性明顯增加，堿性磷酸酶表達(dá)量增加，鈣質(zhì)沉積形成。Matsugchi等[23]通過體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)抑制JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路則細(xì)胞基質(zhì)礦化過程被阻斷。反之使JNK過度表達(dá)可加速細(xì)胞基質(zhì)的礦化過程，但是參與早期成骨分化的因子均無明顯變化?；|(zhì)礦化是成骨細(xì)胞分化的終末階段，提示活化的JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路參與晚期成骨分化階段的調(diào)控。

3.3 P38MAPK信號(hào)通路對(duì)成骨細(xì)胞的調(diào)節(jié) P38MAPK是1993年Brewster等[24]研究高滲環(huán)境對(duì)酵母的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)的一種酪氨酸磷酸化蛋白激酶?；罨腜38MAPK參與多種轉(zhuǎn)錄因子基因表達(dá)的調(diào)控，一些局部細(xì)胞調(diào)節(jié)因子及全身性激素通過P38MAPK信號(hào)調(diào)節(jié)通路調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞的增殖分化過程。

王曉暉等[25]在新生大鼠成骨細(xì)胞的增殖、分化和凋亡的實(shí)驗(yàn)中用維生素C和β-磷酸甘油誘導(dǎo)成骨分化發(fā)現(xiàn)阻斷P38MAPK通路，堿性磷酸酶表達(dá)量及鈣質(zhì)沉積形成量明顯減少。提示阻斷P38MAPK通路使成骨細(xì)胞分化及基質(zhì)礦化過程受阻。Thouverey等[26]應(yīng)用基因敲除技術(shù)研究P38MAPK通路的作用觀察6個(gè)月齡基因敲除小鼠脛骨骨量與對(duì)照組相比減少62%，Ⅰ型膠原蛋白及堿性磷酸酶的表達(dá)量亦明顯降低。結(jié)果表明，P38MAPK通路不僅可調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞的增殖和分化，還可能與靜止期骨量的調(diào)節(jié)相關(guān)。Lee等[27]研究小檗堿對(duì)成骨細(xì)胞的作用，發(fā)現(xiàn)小檗堿可激活P38MAPK信號(hào)通路，活化的P38MAPK上調(diào)促成骨轉(zhuǎn)錄因子Runx2的表達(dá)發(fā)揮促成骨細(xì)胞增殖分化作用。上述研究均表明P38MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路對(duì)成骨細(xì)胞增殖和分化過程起著重要的調(diào)節(jié)作用。

4 Wnt、BMP、MAPK信號(hào)通路對(duì)成骨細(xì)胞的交互調(diào)節(jié)

隨著研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)與成骨相關(guān)信號(hào)通路既可獨(dú)立的完成對(duì)成骨細(xì)胞的調(diào)控，彼此之間還可與通過某些細(xì)胞因子彼此交互共同參與成骨細(xì)胞的調(diào)控過程。Clarke等[28]研究表明BMPs與其受體結(jié)合后可激活(TNF receptor-associated factor 6，TRAF6)，進(jìn)一步招募轉(zhuǎn)化生長因子β激活激酶1(TGF-βactivated protein kinase 1，TAK1)與TAK1結(jié)合蛋白(TAK1-binding protein，TAK1-TAB)使TAK1泛素化，激活ERK、JNK及P38MAPK信號(hào)通路促進(jìn)成骨細(xì)胞分化成熟。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)典Wnt通路促進(jìn)前體成骨細(xì)胞增殖并維持成骨細(xì)胞的前體狀態(tài)，BMPs能夠促進(jìn)前體成骨細(xì)胞進(jìn)一步分化為成骨細(xì)胞，此后經(jīng)典Wnt通路與BMP信號(hào)通路協(xié)同促進(jìn)成骨細(xì)胞進(jìn)一步分化成熟及骨基質(zhì)的礦化[29]。表明在成骨細(xì)胞不同的分化階段，Wnt通路與BMP通路之間存在不同的交互作用。

綜上所述Wnt、MAPK、BMP信號(hào)通路是目前研究較多的3條成骨細(xì)胞調(diào)節(jié)通路，成骨細(xì)胞相關(guān)的局部調(diào)節(jié)過程復(fù)雜，各調(diào)節(jié)通路間存在廣泛的聯(lián)系，形成極為復(fù)雜的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)。目前對(duì)于成骨細(xì)胞調(diào)節(jié)已進(jìn)行了較深入的研究，但對(duì)其調(diào)節(jié)通路的作用機(jī)制還沒有明確的闡述，因此仍需進(jìn)一步深入研究以闡明成骨細(xì)胞調(diào)節(jié)通路的作用機(jī)制。

參考文獻(xiàn)：

[1]MacDonald BT，Tamai K，He X.Wnt/β-catenin signaling：components，mechanisms，and diseases[J].Developmental Cell，2009，17(1)：9-26.

[2]Yao GQ，Wu JJ，Troiano N，etal.Targeted overexpression of Dkk1 in osteoblasts reduces bone mass but does not impair the anabolic response to intermittent PTH treatment in mice[J].J Bone Miner Metab，2011，29(2)：141-148.

[3]Liu B，Yu HMI，Hsu W.Craniosynostosis caused by Axin2 deficiency is mediated through distinct functions of β-catenin in proliferation and differentiation[J].Developmental Biology，2007，301(1)：298-308.

[4]Holmen SL，Zylstra CR，Mukherjee A，etal.Essent ial role of bet a-catenin in postnatal bone acquisition[J].Journal of Biological Chemistry，2005，280(22) ：21162-21168.

[5]Derfoul A，Carlberg AL，Tuan RS，etal.Differential regulation of osteogenic marker gene expression by Wnt- 3a in embryonic mesenchymal multipotential progenitor cells[J].Differentiation，2004，72(5)：209-223.

[6]Quarto N，Behr B，Longaker MT.Opposite spectrum of activity of canonical Wnt signaling in the osteogenic context of undifferentiated and differentiated mesenchymal cells：implications for tissue engineering[J].Tissue Engineering Part A，2010，16(10)：3185-3197.

[7]Zhao M，Ko SY，Liu JH.Inhibition of microtubule assembly in osteoblasts stimulates bone morphogenetic protein 2 expression and bone formation through transcription factor Gli2[J].Mol Cell Biol，2009，29(5)：1291-1305.

[8]Han SH，Kim KH，Han JS，etal.Response of osteoblastlike cells cultured on zirconia to bone morphogenetic protein- 2[J].J Periodontal Implant Sci，2011，41(5)：227-233.

[9]Teplyuk NM，Galindo M，Teplyuk VI，etal.Runx2 regulates G protein-coupled signaling pathways to control growth of osteoblast progenitors[J].J Biol Chem，2008，283(41)：27585-27597.

[10]Medici D，Shore EM，Lounev VY，etal.Conversion of vascular endothelial cells into multipotent stem-like cells[J].Nature Medicine，16(12)：1400-1406.[11]Devlin R，Du Z，Pereira R，etal.Skeletal overexpression of noggin results in osteopenia and reduced bone formation[J].Endocrinology，2003，144(5)：1972-1978.

[12]Hata A，Lagna G，Massague J，etal.Smad6 inhibits BMP/Smad1 signaling by pecifically competing with the Smad4 tumor suppressor[J].Genes Dev，1998，12(2)：186-197.

[13]Lawrence MC，Jivan A，Shao C，etal.The roles of MAPKs in disease[J].Cell Research，2008，18(4)：436-442.

[14]Boulton TG，Yancopoulos GD，Gregory JS，etal.An insulin-stimulated protein kinase similar to yeast kinases involved in cell cycle control[J].Science，1990，249(4964)：64-67.

[15]Jaiswal RK，Jaiswal N，Bruder SP，etal.Adult human mesenchymal stem cell differentiation to the osteogenic or adipogenic lineage is regulated by mitogen-activated protein kinase[J].J Biol Chem，2000，275(13)：9645-9652.

[16]Franceschi RT，Ge C，Xiao G，etal.Transcriptional regulation of osteoblasts[J].Cells Tissues Organs，2008，189(1-4)：144-152.

[17]Wirries A，Schubert AK，Zimmermann R，etal.Thymoquinone accelerates osteoblast differentiation and activates bone morphogenetic protein-2 and ERK pathway[J].Int Immunopharmacol，2013，15(2)：381-386.

[18]Mahalingam CD，Sampathi BR，Sharma S，etal.MKP1-dependent PTH modulation of bone matrix mineralization in female mice is osteoblast maturation stage specific and involves P-ERK and P-p38 MAPKs[J].J Endocrinol，2013，216(3)：315-329.

[19]Yan YX，Gong YW，Guo Y，etal.Mechanical strain regulates osteoblast proliferation through integrin-mediated ERK activation[J].PloS One，2012，7(4)：e35709.

[20]Wang X，Destrument A，Tournier C.Physiological roles of MKK4 and MKK7：insights from animal models[J].Biochim Biophys Acta，2007，1773(8)：1349-1357.

[21]李定宇，鄭誠功，裘正健.剪切應(yīng)力誘導(dǎo)成骨相關(guān)基因表達(dá)的研究[J].中華創(chuàng)傷骨科雜志，2006，8(10)：911.

[22]孔維霞，朱恒，江小霞，等.MAPK通路參與小鼠骨實(shí)質(zhì)來源間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨的分化[J].中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2010，18(4)：981-985.

[23]Matsuguchi T，Chiba N，Bandow K，etal.JNK Activity Is Essential for Atf4 Expression and Late‐Stage Osteoblast Differentiation[J].J Bone Miner Res，2009 24(3)：398-410.

[24]Brewster JL，Valoir TD，Dwyer ND，etal.An osmosensing signal transduction pathway in yeast[J].Science，1993，259(5102)：1760-1763.

[25]王曉暉，湯旭磊.P38MAPK與新生大鼠成骨細(xì)胞的增殖分化和凋亡[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2009，13(7)：13-37.

[26]Thouverey C，Caverzasio J.The p38α MAPK positively regulates osteoblast function and postnatal bone acquisition[J].Cell Mol Life Sci，2012 69(18)：3115-3125.

[27]Lee HW，Suh JH，KimHN，etal.Berberine promotes osteoblast differentiation by Runx2 activation with p38 MAPK[J].J Bone Miner Res，2008，23(8)：1227-1237.

[28]Clarke DC，Liu X.Decoding the guantitative nature of TGF-beta/Smad signaling[J].Trends in cell biology，2008，18，430-442.

[29]Eyckmans J，Roberts SJ，Schrooten J，etal.A clinically relevant model of osteoinduction：a process requiring calcium phosphate and BMP/Wnt signaling[J].J Cell Mol Med，2010，14(6B)：1845-1856.