巨細(xì)胞病毒感染診斷方法的研究進(jìn)展

劉聰，戴薇，肖德俊，鄒翠翠綜述，肖九長審校

(贛州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西贛州341000)

·綜述·

巨細(xì)胞病毒感染診斷方法的研究進(jìn)展

劉聰，戴薇，肖德俊，鄒翠翠綜述，肖九長審校

(贛州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西贛州341000)

∶巨細(xì)胞病毒在人群中傳播廣泛，其在我國成人的感染率超過95%，且存在地域差異。多數(shù)感染者表現(xiàn)為亞臨床癥狀及潛伏感染。但在感染后較大程度上可侵襲多種器官導(dǎo)致嚴(yán)重疾病，免疫功能減弱的情況下會對患者的身體健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅，孕婦和兒童感染巨細(xì)胞病毒后對身體損害較為嚴(yán)重，可導(dǎo)致胎兒畸形、兒童智力發(fā)育障礙等，因此巨細(xì)胞病毒早期診斷尤為重要，本文就巨細(xì)胞病毒感染診斷方法研究進(jìn)展綜述如下。

巨細(xì)胞病毒感染；診斷方法；研究進(jìn)展

DOI∶10.3969/j.issn.1674-1129.2014.06.019

人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)在我國感染非常普遍，是皰疹病毒科最大的病毒[1]，在免疫功能低下的人群中如孕婦、兒童可導(dǎo)致嚴(yán)重的危害，有可能會發(fā)展為HCMV綜合癥，出現(xiàn)小頭畸形、聽力和視力損害等后遺癥[2]。因此對HCMV感染的早期準(zhǔn)確診斷具有重要的臨床意義。

1 CMV的結(jié)構(gòu)及生物性狀

CMV屬于皰疹病毒的亞科，分子量約為150× 106，是線狀雙股DNA，內(nèi)核直徑230nm，外核為110nm的二十倍體，二者合稱為核衣殼。其被膜上蛋白約14種，其中膜蛋白pp65可作為CMV活動(dòng)性感染的檢測指標(biāo)[3]。CMV存在于血液、唾液、眼淚、尿液、精液、糞便、子宮頸和陰道分泌物、乳汁等中。病毒可由乳汁、唾液及尿排出，可持續(xù)數(shù)周到幾年[4]。

2 巨細(xì)胞病毒感染情況及途徑

CMV根據(jù)感染發(fā)生時(shí)間的不同可分為先天性感染(宮內(nèi)感染)、獲得性感染(圍產(chǎn)期感染)及產(chǎn)后感染[5]。

2.1 先天性巨細(xì)胞病毒感染先天性巨細(xì)胞病毒感染即宮內(nèi)感染，經(jīng)母嬰傳播是胎兒CMV感染的主要途徑[6]，其具體途徑為：母親本身攜帶的巨細(xì)胞在其妊娠期期間，通過胎盤傳遞給胎兒，并存在較高的幾率導(dǎo)致胎兒流產(chǎn)或死胎等，活嬰中約有5%會出現(xiàn)多系統(tǒng)、多器官受累，約5%會表現(xiàn)為非典型的臨床癥狀，90%為亞臨床癥狀。有文章報(bào)道，先天性CMV感染大約占新生兒0.15%～2%[7]。經(jīng)母嬰傳播導(dǎo)致先天性巨細(xì)胞病毒感染率國外報(bào)道可達(dá)23%[5]，其感染率比國內(nèi)報(bào)道的要低。

2.2 獲得性巨細(xì)胞病毒感染獲得性巨細(xì)胞病毒感染即圍產(chǎn)期巨細(xì)胞病毒感染，是指分娩時(shí)巨細(xì)胞病毒通過產(chǎn)道傳播給新生兒[8]。它與先天性巨細(xì)胞病毒感染不同的是感染CMV的母親所生的孩子出生14d內(nèi)無法診斷出CMV感染，要到新生兒出生3～12周內(nèi)才能證實(shí)CMV感染[9]。

2.3 產(chǎn)后感染產(chǎn)后感染即出生后獲得的感染，是指在母乳喂養(yǎng)過程中經(jīng)乳汁直接傳遞給嬰兒，也可由母嬰經(jīng)唾液等水平傳播引起[10]。

3 巨細(xì)胞病毒感染的臨床表現(xiàn)

成人感染CMV與自身免疫功能有密切的關(guān)系。CMV感染一般以潛伏感染的形式存在，當(dāng)患者發(fā)生腫瘤或器官移植尤其是腎移植后等自身免疫功能低下或缺失時(shí)潛在的病毒才會復(fù)活增值表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀。潛在感染及顯性感染的患者均可成為傳染源[11]。調(diào)查研究表明，不同區(qū)域和不同經(jīng)濟(jì)情況感染率不同，其中亞洲和非洲感染率明顯比西方發(fā)達(dá)國家要高，且多發(fā)生在青少年階段。低收入人群感染率要高于高收入人群[12]。此外，CMV還可侵犯全身各器官，或可導(dǎo)致胎兒早產(chǎn)、足兒小樣、聽力及智力障礙等。

4 巨細(xì)胞病毒感染診斷

4.1 血清學(xué)診斷當(dāng)CMV感染人體后，會出現(xiàn)一些特異性抗體，如IgM、IgG等，孕婦血清中檢測到IgM可證實(shí)感染CMV，要判斷胎兒感染的風(fēng)險(xiǎn)就要進(jìn)一步證實(shí)孕婦是否發(fā)生原發(fā)感染。但是研究表明IgM的陽性率較低，要在感染2～4周之后才能檢測到，而新生兒和免疫力低下的人還有可能出現(xiàn)假陰性的結(jié)果[13]。有研究表明IgM水平與CMV的復(fù)制程度無相關(guān)性[14]，而巨細(xì)胞病毒IgG在評估免疫功能低下人群巨細(xì)胞病毒活動(dòng)性感染上無價(jià)值[15]。我國孕期女性CMV經(jīng)胎盤感染新生兒的概率可達(dá)35%，因此對孕婦進(jìn)行CMV檢測很重要。目前臨床上普遍采用ELISA法來檢測孕婦血清中特性抗體IgM是否為陽性來初步判斷CMV感染。ELISA法步驟簡單，時(shí)間短，便于臨床應(yīng)用，但是存在陽性率低，且易出現(xiàn)假陰性，而且出現(xiàn)時(shí)間較晚等不足[16]。

4.2 病毒培養(yǎng)病毒分離是目前實(shí)驗(yàn)室診斷CMV的金標(biāo)準(zhǔn)[17]。該法就是將檢測標(biāo)本接種后檢測是否存在包涵體。這種方法容易污染，步驟復(fù)雜，不利于臨床快速診斷，還存在的最大問題是CMV只在人纖維母細(xì)胞中增殖，因此檢測周期較長，只適合用于科研途徑[18]。

4.3 巨細(xì)胞病毒抗原檢測目前國外文獻(xiàn)報(bào)道的CMV抗原檢測通常采用ABC法或免疫熒光檢測法[19]。CMV在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制6～24h后會產(chǎn)生結(jié)構(gòu)蛋白，其中的被膜蛋白大部分是pp65。在20世紀(jì)80年代Vinder[20]就建立了免疫熒光定量等方法來檢測pp65。當(dāng)CMV處于活動(dòng)期時(shí)，外周血中會存在高水平的pp65抗原，其可作為CMV感染的活動(dòng)性檢測。近年來檢測pp65抗原的方法得到了很大發(fā)展，現(xiàn)在有些實(shí)驗(yàn)室利用流式細(xì)胞術(shù)來檢測pp65抗原，只需約2h，其操作步驟簡單，靈敏度高，特異性好，步驟簡單，靈敏度和特異性都很好，值得臨床上推廣。Piiparinen等[21]認(rèn)為血液中的pp65抗原的表達(dá)水平可預(yù)測發(fā)生HCMV感染的風(fēng)險(xiǎn)度。有資料表明pp65抗原檢測可用于診斷HCMV活動(dòng)性感染,還可作為指導(dǎo)臨床用藥及監(jiān)測藥物療效的一個(gè)監(jiān)測指標(biāo)[22]。

4.4 病毒DNA的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測病毒DNA與免疫酶鏈法、病毒培養(yǎng)等方法相比，具有步驟簡便，靈敏度高，特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，還能做CMV定量分析。但是普通PCR也存在不足，容易造成污染和假陽性的缺點(diǎn)?，F(xiàn)在的新方法實(shí)時(shí)熒光定量PCR就是在原來的反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，可實(shí)時(shí)檢測PCR進(jìn)程，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)定量分析的目的。此方法具有普通PCR的優(yōu)點(diǎn)外，還能進(jìn)行CMV感染的動(dòng)態(tài)監(jiān)測，重復(fù)性也好,還能進(jìn)行早期檢測CMV[22]。

綜上所述，血清學(xué)診斷由于其陽性率較低，容易受到病人體質(zhì)等因素的影響，很容易造成假陰性結(jié)果，已經(jīng)不能滿足臨床檢測對于高靈敏度和特異度的要求。病毒培養(yǎng)由于其操作的復(fù)雜性以及對培養(yǎng)環(huán)境的嚴(yán)格要求，也很難滿足臨床對于快速診斷的需要，實(shí)時(shí)熒光定量PCR雖具有其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，但是同流式細(xì)胞計(jì)數(shù)比較而言，卻也有其不足之處,比如實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物的設(shè)計(jì)很關(guān)鍵，決定著實(shí)驗(yàn)成功與否，還有RNA模板提取效率、反轉(zhuǎn)錄效率、標(biāo)準(zhǔn)品的選擇與制備、熒光閾值的設(shè)置等復(fù)雜實(shí)驗(yàn)操作[23]。流式細(xì)胞術(shù)作為一個(gè)新興的技術(shù)已經(jīng)從科研領(lǐng)域逐步過渡到了為臨床服務(wù)，因其具有高靈敏性和快速性的優(yōu)點(diǎn)，逐步被大家所接納和認(rèn)可。

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R373

A

1674-1129(2014)06-0703-02

2014-05-04；

2014-10-16)

劉聰，女，1986年12月生，碩士，檢驗(yàn)師，研究方向?yàn)榕R床免疫學(xué)。

肖九長，男，1969年9月生，本科，副主任技師，研究方向?yàn)榕R床免疫學(xué)。