35%三環(huán)唑·戊唑醇懸浮劑分析方法研究

宋懷挺， 侯 影， 余德勉， 王陳杰， 張常慶

(上海悅聯(lián)生物科技有限公司，上海 201215)

關(guān)鍵字：三環(huán)唑；戊唑醇；高效液相色譜；分析

三環(huán)唑是防治稻瘟病專用殺菌劑屬于噻唑類。殺菌作用機(jī)理主要是抑制附著孢黑色素的形成，從而抑制孢子萌發(fā)和附著孢形成，阻止病菌侵人和減少稻瘟病菌孢子的產(chǎn)生。具有較強(qiáng)的內(nèi)吸性的保護(hù)性殺菌劑，能迅速被水稻各部位吸收，持效期長(zhǎng)，藥效穩(wěn)定，用量低并且抗雨水沖刷。

戊唑醇屬于三唑類殺菌劑，是硫醇脫甲基抑制劑，是用于重要經(jīng)濟(jì)作物的種子處理或葉面噴灑的高效內(nèi)吸性殺菌劑?？捎行У姆乐魏坦阮愖魑锏亩喾N銹病、白粉病、網(wǎng)斑病、根腐病、赤霉病、黑穗病及種傳輪斑病、茶樹(shù)茶餅病，香蕉葉斑病等。

三環(huán)唑和戊唑醇的單劑或其他復(fù)配制劑的分析方法已有國(guó)標(biāo)和其他報(bào)道[1-8]，但35%三環(huán)唑·戊唑醇懸浮劑復(fù)配制劑的分析方法還未見(jiàn)報(bào)道。本文采用反相高效液相色譜法，采用C18不銹鋼柱和紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器，對(duì)35%三環(huán)唑·戊唑醇懸浮劑(17.5%+17.5%)中有效成分三環(huán)唑和戊唑醇同柱分析和定量，此方法快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)，適用于產(chǎn)品質(zhì)量的檢測(cè)和分析。

1 材料儀器

1.1 樣品和試劑 甲醇：色譜純；水：二次重蒸；三環(huán)唑標(biāo)樣：已知含量≥98.0%；戊唑醇標(biāo)樣：已知含量≥98.0%；流動(dòng)相：甲醇+水=80+20(V/V)，流動(dòng)相經(jīng)0.45um孔徑的濾膜，并在超聲波浴槽中脫氣10min。

1.2 儀器 高效液相色譜儀：具紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器；色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)；色譜柱：Φ4.6mm×150mm不銹鋼柱，內(nèi)裝CAPCELL PAK C18/5μm為填充料的不銹鋼柱。

1.3 高效液相色譜操作條件 流量：1.0ml/min；柱溫：室溫(溫差變化≤2℃)；檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm；進(jìn)樣體積：10μL；保留時(shí)間：三環(huán)唑約4.0min，戊唑醇約9.6min。

上述操作參數(shù)是典型的，可根據(jù)儀器的特點(diǎn)，對(duì)給定的操作參數(shù)做適當(dāng)調(diào)整，以期獲得最佳效果，典型的三環(huán)唑(戊唑醇)高效液相色譜圖(圖1)。

圖1 35%三環(huán)唑·戊唑醇懸浮劑高效液相色譜圖

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 標(biāo)樣溶液的配置 稱取三環(huán)唑和戊唑醇標(biāo)樣各0.05g(精確到0.000 2g)，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解，超聲冷卻后，用甲醇定容，搖勻；再用移液管準(zhǔn)確移取5mL至100mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。

2.2 試樣溶液的配置 稱取含有三環(huán)唑或戊唑醇0.05g(精確到0.000 2g)試樣，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解，超聲冷卻后，加甲醇定容，搖勻，再用移液管準(zhǔn)確移取5～100mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾，備用。

2.3 試樣的測(cè)定 在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，計(jì)算各針相對(duì)響應(yīng)值的重復(fù)性，待相鄰2針的響應(yīng)值變化<1.0%后，按照標(biāo)樣溶液，試樣溶液，試樣溶液，標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

2.4 試樣中有效含量的計(jì)算 將測(cè)得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中的峰面積分別進(jìn)行平均，試樣中三環(huán)唑(戊唑醇)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X1(%)按式(1)計(jì)算：

(1)

式中：

A1—標(biāo)樣溶液中三環(huán)唑(戊唑醇)峰面積的平均值；

A2—試樣溶液中三環(huán)唑(戊唑醇)峰面積的平均值；

m1—三環(huán)唑(戊唑醇)標(biāo)樣的質(zhì)量，g;

m2—三環(huán)唑(戊唑醇)試樣的質(zhì)量，g；

P—三環(huán)唑(戊唑醇)標(biāo)樣的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)，%。

3 結(jié)果與討論

3.1 流動(dòng)相和波長(zhǎng)選擇 首先對(duì)35%三環(huán)唑·戊唑醇懸浮劑中的有效成分三環(huán)唑、戊唑醇在DAD條件下做紫外吸收掃描(圖2～3)，由(圖2～3)并結(jié)合分析中助劑雜質(zhì)干擾因素(圖4)，選定檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，在甲醇、水中調(diào)節(jié)比例，將三環(huán)唑和戊唑醇進(jìn)行有效分離，同事避免助劑和雜質(zhì)干擾，最后確定為甲醇：水=80：20作為流動(dòng)相，在此條件下對(duì)35%三環(huán)唑·戊唑醇懸浮劑中三環(huán)唑和戊唑醇純度掃描。三環(huán)唑、戊唑醇的峰純度均為1，且有效成分出峰位置無(wú)明顯物質(zhì)干擾，符合定量分析要求。

圖2 35%三環(huán)唑·戊唑醇懸浮劑中三環(huán)唑HPLC-DAD特異性掃描圖

圖3 35%三環(huán)唑戊唑醇中戊唑醇HPLC-DAD特異性掃描

圖4 35%三環(huán)唑·戊唑醇懸浮劑制劑空白圖

3.2 分析方法的線性相關(guān)性實(shí)驗(yàn) 準(zhǔn)確配制一系列不同濃度的三環(huán)唑和戊唑醇標(biāo)樣溶液，然后分別按2.3測(cè)定步驟進(jìn)行分析檢測(cè)，分別以三環(huán)唑和戊唑醇的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，三環(huán)唑和戊唑醇峰面積為縱坐標(biāo)，計(jì)算一元線性回歸方程和作線性相關(guān)圖。線性相關(guān)性測(cè)定試驗(yàn)數(shù)據(jù)(表1)。

表1 三環(huán)唑和戊唑醇線性相關(guān)數(shù)據(jù)表

三環(huán)唑一元線性回歸方程：Y=165X-0.059，相關(guān)系數(shù)：R2=0.9998。戊唑醇一元線性回歸方程：Y=50.041X+0.0089，相關(guān)系數(shù)：R2=0.9999。

3.3 分析方法的精密度實(shí)驗(yàn) 任取一批35%三環(huán)唑·戊唑醇懸浮劑，按本標(biāo)準(zhǔn)中2.3測(cè)定步驟連續(xù)測(cè)定三環(huán)唑、戊唑醇含量10次，分別計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)偏差、變異系數(shù)。精密度測(cè)定試驗(yàn)數(shù)據(jù)(表2)。

表2 三環(huán)唑、戊唑醇精密度測(cè)定試驗(yàn)數(shù)據(jù)表

從三環(huán)唑、戊唑醇精密度測(cè)定數(shù)據(jù)表中可以看出，三環(huán)唑的標(biāo)準(zhǔn)偏差0.027，變異系數(shù)為0.15%。戊唑醇的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.035，變異系數(shù)為0.20%。

3.4 分析方法的準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn) 選取已知含量的35%三環(huán)唑·戊唑醇懸浮劑樣品，準(zhǔn)確稱取5份，并分別加入定量的三環(huán)唑、戊唑醇標(biāo)樣，然后按本標(biāo)準(zhǔn)中2.3測(cè)定步驟測(cè)定三環(huán)唑、戊唑醇標(biāo)樣的加入量，同理論值進(jìn)行比較，計(jì)算回收率。回收率測(cè)定試驗(yàn)數(shù)據(jù)(表3)。

表3 回收率測(cè)定試驗(yàn)數(shù)據(jù)表

按照本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法進(jìn)行檢測(cè)試驗(yàn)三環(huán)唑、戊唑醇的回收率分別為：99.07%～100.79%、98.57%～100.57%之間，三環(huán)唑和戊唑醇的平均回收率分別為100.11%和99.53%。

4 結(jié)論

結(jié)果表明，本文中建立的同柱分析35%三環(huán)唑·戊唑醇懸浮劑中三環(huán)唑和戊唑醇的方法在測(cè)定該制劑中的三環(huán)唑和戊唑醇含量的準(zhǔn)確度和精密度較高，線性關(guān)系良好。由于一次即可測(cè)定三環(huán)唑和戊唑醇的含量，使得該方法快速、簡(jiǎn)便，適合于產(chǎn)品的質(zhì)量檢測(cè)和控制。