Bim蛋白在骨惡性纖維組織細(xì)胞瘤中的表達(dá)及臨床研究

李 盛

(蔚州礦業(yè)公司職工醫(yī)院普外科，河北 蔚縣 075700)

惡性纖維組織細(xì)胞瘤是原始間葉組織發(fā)生的高度惡性腫瘤，具有惡性度高、轉(zhuǎn)移快、易復(fù)發(fā)、預(yù)后差等特點(diǎn)[1]，其發(fā)生率在軟組織腫瘤中居首位，且血行轉(zhuǎn)移最為常見，主要轉(zhuǎn)移到肺、骨、肝等器官[2]。但原發(fā)于骨的惡性纖維組織細(xì)胞瘤相對比較少見，資料顯示，其在骨原發(fā)惡性腫瘤中不到2%[3]。故本研究主要探討B(tài)cl-2 interacting mediator of cell death(Bim)蛋白在骨惡性纖維組織細(xì)胞瘤中的表達(dá)及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2005年2月至2008年2月在蔚州礦業(yè)公司職工醫(yī)院普外科經(jīng)病理醫(yī)師確診為骨惡性纖維組織細(xì)胞瘤的患者40例。其中男23例、女17例，年齡45～74(48±2)歲，年齡≥48歲者26例，年齡<48歲者14例；發(fā)生于股骨者24例、脛骨者16例；腫瘤直徑≥4 cm者28例，腫瘤直徑<4 cm者12例。骨惡性纖維組織細(xì)胞瘤組織學(xué)類型[4]：多形性21例、巨細(xì)胞型8例、炎癥型6例、黏液型5例。臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期13例，Ⅲ～Ⅳ期27例。所有患者經(jīng)臨床影像學(xué)檢查均未發(fā)現(xiàn)瘤組織肺轉(zhuǎn)移?；颊呱嫫谝?年為限，其中≥5年者23例，<5年者17例。經(jīng)化療藥紫杉醇治療的有18例，未經(jīng)治療的有22例。同時隨機(jī)取距骨惡性纖維組織細(xì)胞瘤0.3 cm處組織40例作為對照組。

1.2主要試劑和方法 即用型兔抗人Bim單克隆抗體及相關(guān)配套試劑盒均由福州邁新生物技術(shù)有限公司提供。免疫組織化學(xué)染色采用EnVisionTM兩步法，具體步驟參照說明書。已知陽性染色為陽性對照，陰性對照用PBS代替一抗。

1.3結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) Bim著色時細(xì)胞質(zhì)?？沙霈F(xiàn)棕黃色、黃色或淡黃色染色。采用半定量方法測定Bim的表達(dá)，隨機(jī)選取5個高倍鏡視野(200倍)觀察腫瘤細(xì)胞中Bim的著色細(xì)胞數(shù)及強(qiáng)度，分為以下4個等級：0級≤5%，5%<1級≤25%，26%<2級≤60%，3級>60%。陽性強(qiáng)度淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。兩積分相乘，0～3分為陰性(-)，4～12分為陽性(+)[5]。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1Bim在骨惡性纖維組織細(xì)胞瘤、骨惡性纖維組織細(xì)胞瘤旁組織中的表達(dá) Bim在骨惡性纖維組織細(xì)胞組織和骨惡性纖維組織細(xì)胞旁組織中的陽性表達(dá)率分別為25.00、67.50%，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=14.53，P<0.01)(表1)。

表1 Bim在骨惡性纖維組織細(xì)胞瘤、骨惡性纖維組織細(xì)胞瘤旁組織中的表達(dá)

2.2Bim的表達(dá)與骨惡性纖維組織細(xì)胞瘤臨床病理因素的關(guān)系 Bim的表達(dá)與腫瘤部位、性別、年齡、組織學(xué)類型無關(guān)，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但與腫瘤大小、臨床分期、5年生存期和紫杉醇治療有關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(表2)。

表2 Bim的表達(dá)與骨惡性纖維組織細(xì)胞瘤臨床病理因素的關(guān)系

3 討 論

腫瘤細(xì)胞的過度增生是細(xì)胞凋亡與抗凋亡之間平衡被打破的結(jié)果。目前，學(xué)術(shù)界公認(rèn)的細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)蛋白之一是Bcl-2家族，按其功能可分為兩類：一類是促生存因子或稱抗凋亡因子，起到抑制細(xì)胞凋亡的作用，代表因子是Bcl-2蛋白；另一類是促凋亡因子，包括與Bcl-2有2～3個BH3同源結(jié)構(gòu)域的Bax及與Bcl-2有一個BH3同源結(jié)構(gòu)域的Bim。研究顯示，人類Bim基因定位于2q12或2q13，在多種正常組織細(xì)胞中均有表達(dá)，如造血細(xì)胞、上皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞以及生殖細(xì)胞等，其具有維持造血細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、防止自身免疫及腫瘤發(fā)生的重要作用[6]。正常情況下，Bim與細(xì)胞胞質(zhì)的力蛋白復(fù)合體(Dynein復(fù)合體)的輕鏈相結(jié)合，此時無活性，而只有受到刺激后，其從復(fù)合體上游離出來，才能發(fā)揮促凋亡的功能[7]。有資料顯示，Bim在子宮內(nèi)膜癌、甲狀腺乳頭狀癌、大腸癌等組織中均為低表達(dá)或無表達(dá)，而在相應(yīng)的良性病變中則顯示出高表達(dá)[8-10]。

本研究結(jié)果顯示，Bim在骨惡性纖維組織細(xì)胞組織中的表達(dá)低于骨惡性纖維組織細(xì)胞旁組織，提示Bim的低表達(dá)或無表達(dá)有利于腫瘤向惡性轉(zhuǎn)變發(fā)展。同時還發(fā)現(xiàn)，Bim的表達(dá)與腫瘤大小、臨床分期和5年生存期有關(guān)，而后者又與患者的預(yù)后有關(guān)，進(jìn)而間接推斷Bim的表達(dá)高低在一定程度上也影響著患者的預(yù)后。不僅如此，經(jīng)紫杉醇的治療患者Bim陽性表達(dá)率高于未經(jīng)治療的患者，表明紫杉醇可能通過一定的信號途徑誘導(dǎo)Bim的表達(dá)。這與葉艷等[11]的研究結(jié)果相符。其機(jī)制可能是通過活化c-Jun氨基端激酶和(或)絲裂原活化蛋白激酶信號途徑，使BimEL/BimL上的磷酸化位點(diǎn)發(fā)生磷酸化，導(dǎo)致BimEL/BimL連同肝癌缺失基因從微管蛋白復(fù)合體上釋放出來，同時移位至線粒體膜上發(fā)揮促凋亡作用[12]。

綜上所述，Bim在骨惡性纖維組織細(xì)胞瘤組織中呈現(xiàn)低表達(dá)，說明其促細(xì)胞凋亡的功能減弱，引起細(xì)胞凋亡平衡失調(diào)，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞過度生長。因而，能否通過某種技術(shù)或方法提高惡性腫瘤組織中的Bim表達(dá)來抑制腫瘤的惡性生物學(xué)行為？有學(xué)者構(gòu)建了Bim腺病毒表達(dá)載體，并將其注射入小鼠鼻咽癌瘤內(nèi)，結(jié)果顯示瘤體積縮小并維持在8.5 mm以下達(dá)14 d以上[13]。這不僅為以后的實(shí)驗(yàn)研究提供了一種思路，也對腫瘤的靶向治療提供了新途徑。

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