分光光度法測定西瓜霜噴劑中的硼砂

湯 征， 趙 翠， 王伯濤

(南京工業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南京 211816)

西瓜霜噴劑是由西瓜霜、硼砂(煅)、黃柏、黃連、山豆根、射干、浙貝母、青黛、冰片、無患子果(炭)、大黃、黃芩、甘草、薄荷腦14味中藥研制而成的復(fù)方制劑，具有清熱解毒，消腫止痛的功效。臨床用于治療風(fēng)熱上攻、肺胃熱盛所致的乳蛾、喉痹、口糜，證見咽喉腫痛、喉核腫大、口舌生瘡、牙齦腫痛或出血；急慢性咽喉炎，扁桃體炎，口腔炎、口腔潰瘍等疾病。目前，已有報道采用分光光度法、高效液相色譜、毛細(xì)管電泳及高效液相色譜/質(zhì)譜等方法測定該制劑中苦參堿、鹽酸小檗堿、黃芩苷的量[1-7]。硼砂作為該制劑中一味重要的中藥成分具有清涼解毒、消積塊、除痰熱、消炎斂瘡[8]的作用，但人體若過多攝入硼會引起多臟器的蓄積性中毒，輕者會食欲減退、消化不良，嚴(yán)重者會出現(xiàn)嘔吐、腹瀉、紅斑、循環(huán)系統(tǒng)障礙、休克、昏迷等癥狀。硼砂的成人中毒劑量為1～3 g。成人致死劑量為15～20 g，嬰兒致死量為2～5 g[9]。所以需要建立西瓜霜噴劑中硼砂的定量測定方法，一方面控制藥品的質(zhì)量，另一方面保障安全用藥。

在酸性條件下，硼砂轉(zhuǎn)化為硼酸，硼酸與姜黃素可形成紅色絡(luò)合物，該絡(luò)合物在一定波長處有最大吸收，且吸光度與含有量成正比[10-16]，本實驗根據(jù)這一原理，以姜黃素-草酸-鹽酸乙醇溶液為顯色液，利用分光光度法對西瓜霜噴劑中的硼砂進(jìn)行測定，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 TU-1901紫外可見分光光度計(蘇州市萊頓科學(xué)儀器有限公司)；DF 110型電子分析天平(中國輕工業(yè)機(jī)械總公司)；HH-S恒溫水浴鍋(江蘇金壇正基儀器有限公司)；KQ-400DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；瓷蒸發(fā)皿。

1.2 試藥 西瓜霜噴劑為市購樣品，桂林三金藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號分別為：090729、090822、091031、091102、091289；姜黃素、硼砂(國藥化學(xué)試劑，分析純)；鹽酸(上海中試化工，分析純)，乙醇(無錫亞盛，分析純)，草酸(上海凌峰，分析純)；所用水為蒸餾水。

1.3 精制硼砂制備 取硼砂80 g，加水500 mL，電爐加熱，攪拌使完全溶解。室溫放置使其冷卻并結(jié)晶，待結(jié)晶充分，棄去上清液，取出燒杯底部結(jié)晶，于室溫下晾至半干，置于飽和蔗糖-鹽水溶液的干燥器中進(jìn)行結(jié)晶水平衡，得到符合分子式的10H2O硼砂(Na2B4O7·10H2O)，儲于玻璃容器中，密封。

1.4 實驗溶液制備

1.4.1 顯色液 分別稱取0.05 g姜黃素及4.0 g草酸于100 mL量瓶中，用乙醇80 mL溶解后，加入鹽酸4.0 mL，再用乙醇稀釋至刻度，置于聚乙烯瓶中且冰箱貯存(若試劑混濁，過濾后貯存)。

1.4.2 硼砂貯備溶液(100 mg/L) 稱取0.10 g精制硼砂于100 mL量瓶中，加水適量使溶解后，定容，搖勻；精密移取10 mL于另一100 mL量瓶中，加水定容搖勻，儲存于聚乙烯瓶中。

1.4.3 硼砂標(biāo)準(zhǔn)系列溶液 臨用新制。精密移取10 mL硼砂貯備液于100 mL量瓶中，加水定容搖勻，得硼砂溶液。再分別精密移取0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.0、1.5 mL于相同的瓷蒸發(fā)皿中，各加水補(bǔ)足至約1.5 mL。

1.4.4 10 mol/L鹽酸 取鹽酸900 mL，加水適量使成1 000 mL，搖勻即得。

1.4.5 5 mol/L鹽酸 取鹽酸450 mL，加水適量使成1 000 mL，搖勻即得。

2 實驗與結(jié)果

2.1 供試品溶液配制 稱取0.50 g西瓜霜噴劑樣品于100 mL量瓶中，加水適量溶解后，加10 mol/L鹽酸5 mL，搖勻，加水定容，搖勻；過濾，取續(xù)濾液保存于聚乙烯瓶中。精密移取1 mL續(xù)濾液于另一100 mL量瓶中，加水定容，搖勻，即得供試品溶液，儲存于聚乙烯瓶中。

2.2 測定方法 精密移取1.0 mL供試品溶液于瓷蒸發(fā)皿中，向盛有供試品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液的蒸發(fā)皿中各加入顯色液4 mL及5 mol/L鹽酸1 mL，輕輕旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)皿使之混合均勻。再將蒸發(fā)皿置55 ℃恒溫水浴箱上蒸發(fā)，蒸干后繼續(xù)保留15 min，取出放冷。用乙醇溶解蒸發(fā)皿內(nèi)殘渣，并完全移入25 mL量瓶中，用乙醇定容，搖勻；以空白為參比，于550 nm波長處測定供試品溶液和標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光度。

2.3 方法學(xué)驗證

2.3.1 線性范圍 按“2.2”項下測定方法測定“1.3.4”項下各標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度；以標(biāo)準(zhǔn)溶液中硼砂質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸收度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)溶液在質(zhì)量濃度0.00～0.60 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度有良好的線性關(guān)系，其線性回歸方程為y=0.037x+0.063，r=0.997 5。

2.3.2 精密度試驗 取硼砂標(biāo)準(zhǔn)溶液按“2.2”項下方法顯色，連續(xù)測定吸收度6次，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.44%(n=6)。

2.3.3 重復(fù)性試驗 取3批樣品，每批樣品各6份，按“2.1”項所述方法將該樣品制備成供試品溶液，再按“2.2”項下測定方法平行測定各溶液吸光度，并計算，硼砂的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD在3.01%～4.12%之間，表明方法重復(fù)性良好。

2.3.4 加標(biāo)回收率試驗 精密稱取同一批號已知含有量樣品6份(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.122%)，并向其中分別添加精制硼砂50 mg，按“2.1”項下方法制成供試品溶液后，按“2.2”項下測定方法進(jìn)行加標(biāo)試驗，平均回收率為106.27%。見表1。

表1 硼砂的加樣回收率

2.4 樣品中硼砂測定 將不同批號的樣品按“2.1”項方法分別制備成供試品溶液，按“2.2”項測定方法測定，將測得的吸光度代入線性回歸方程計算樣品中硼砂含量，結(jié)果見表2。

表2 硼砂的測定

3 討論

3.1 測定波長的選擇 將樣品制備成供試品溶液后按“2.2”項下測定方法操作至“用95%乙醇溶液定容至25 mL”，再以空白為參比，在200～800 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，該溶液在432 nm及550 nm處有吸收，見圖1中1；以空白為參比，將一定質(zhì)量濃度顯色液在相同波長范圍內(nèi)掃描，其在432 nm處有吸收，見圖1中2；將樣品制備成供試品溶液后，除不加顯色液外其余均按“2.3”項下測定方法操作至“用95%乙醇溶液定容至25 mL”，再以空白為參比，在同樣波長范圍內(nèi)掃描，該溶液在該波長范圍內(nèi)沒有吸收，見圖1中3。說明只有反應(yīng)絡(luò)合物在550 nm處有吸收，故本實驗采用550 nm作為測定波長。

圖1 各溶液在不同波長下的光吸收情況

3.2 供試品溶液制備方法的選擇 據(jù)文獻(xiàn)報道，測定食品、中成藥中硼砂時，樣品均需經(jīng)過灰化處理，因為樣品中的有機(jī)物可能對測定結(jié)果有干擾，灰化處理可以去除樣品中的有機(jī)物。本實驗比較了灰化前后溶液的吸光度，確定硼砂定量測定時是否需要灰化處理。

未灰化供試品溶液的制備 參考“2.1”項下方法制備。

灰化溶液的制備 稱取0.500 g西瓜霜噴劑粉末于瓷坩堝中，將瓷坩堝置于電爐上炭化至無煙，再置于600 ℃馬弗爐中灰化3～4 h，取出，冷卻至室溫；用10%鹽酸5 mL溶解瓷坩堝內(nèi)容物后并完全轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶中，加水定容，搖勻。再精密移取1 mL上述溶液于另一100 mL量瓶中，加水定容，搖勻，即得。將此溶液儲存于聚乙烯瓶中。

分別精密移取灰化與未灰化供試品溶液各3份，按“2.2”項下測定方法進(jìn)行操作，測定不同供試品溶液的吸光度。見表3。

表3 樣品是否灰化對供試品溶液吸光度的影響

從表3可以看出：樣品灰化與否對供試品溶液的吸光度沒有太大影響，而灰化過程需要持續(xù)3～4 h，為節(jié)約時間本實驗使用未灰化的供試品溶液。

3.3 顯色液中姜黃素、草酸及鹽酸用量的選擇 為了達(dá)到最佳的顯色效果，本實驗對姜黃素、草酸及鹽酸最佳選用量進(jìn)行研究，實驗設(shè)計見表4；按“2.2”項測定方法進(jìn)行操作，以吸光度為指標(biāo)，實驗結(jié)果見表5；并對實驗結(jié)果進(jìn)行方差分析，見表6。

表4 L9(34)正交設(shè)計因素水平

表5 L9(34)正交設(shè)計

表6 方差分析

從表5中可以看出姜黃素、草酸、濃鹽酸用量分別為0.05 g、4 g、4 mL時供試品溶液的吸光度最大；且表6方差分析結(jié)果顯示姜黃素、草酸及濃鹽酸用量對實驗結(jié)果影響均不顯著，所以本實驗姜黃素、草酸、濃鹽酸分別使用上述用量，且不要求精確稱取或移取。

3.4 顯色液用量的選擇 分別精密移取3份1 mL硼砂溶液置三個蒸發(fā)皿中，并分別向蒸發(fā)皿中加入2、4、6 mL顯色液，按“2.3”項方法操作，測定溶液吸光度。

從表7可以看出，當(dāng)顯色液用量為4 mL時，溶液的吸光度已達(dá)到最大，故本實驗選用顯色液為4 mL。

3.5 實驗用玻璃多為硼硅酸鹽玻璃 以SiO2和B2O3為主要成分，為防止玻璃中的硼對實驗造成影響，實驗中應(yīng)盡量減少使用玻璃儀器，而是將溶液貯存在聚乙烯瓶中。

表7 顯色液用量與溶液吸光度的關(guān)系

4 結(jié)論

本實驗通過分光光度法測定西瓜霜噴劑中硼砂的量，在0.00～0.60 μg/mL范圍內(nèi)有良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.997 5；RSD為3.01%～4.12%，重復(fù)性良好；平均回收率為106.26%；結(jié)果顯示該方法準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，易于操作，可用于西瓜霜噴劑中硼砂的測定。

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