HPLC 法同時測定舒胸滴丸中3種成分

張武崗， 張小娟， 陳海芳， 宋永貴,， 馮育林,*， 楊世林,

( 1.中藥固體制劑制造技術(shù)國家工程研究中心，江西 南昌 330006; 2.江西中醫(yī)藥大學，江西 南昌 330006)

舒胸滴丸是由《中國藥典》收載舒胸片改制而來，由三七、川芎和紅花三味中藥組成，具有活血、祛瘀、止痛之功效，臨床主要用于冠心病、心絞痛、心律失常、軟組織損傷等疾病[1-2]。舒胸滴丸以舒胸片組方為基礎(chǔ)，將三七、川芎和紅花三味藥材的提取物制成的治療冠心病心絞痛的速效制劑。已有報道證實三七、紅花和川芎三味中藥有效成分組與舒胸片原方具有相似的藥理效應(yīng)[3]。滴丸與片劑相比具有生物利用度高、流動性好、釋藥穩(wěn)定、起效快的特點[4]。目前舒胸滴丸的文獻報道集中在提取[2,5]、制劑處方[4,6]研究方面，因此本實驗參考文獻[7-10]，采用HPLC 法同時測定舒胸滴丸中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb13種有效成分的量，以能更全面評價舒胸滴丸的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC-10ATVP 高效液相色譜儀(SPD-M10Avp 檢測器、CLASS-VP 軟件)；島津AUW220D型十萬分之一電子天平。

1.2 試藥 人參皂苷Rg1(批號110703-201019)、人參皂苷Rb1(批號110704-201117)、三七皂苷R1(批號110745-200912)以上均由中國藥品生物制品檢定所提供。舒胸滴丸自制(30 mg/丸，批號分別為110601、110602、110603)。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液配制

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1對照品適量，加甲醇制成每1.0 mL含三七皂苷R1為0.123 mg、人參皂苷Rg1為0.31 mg、人參皂苷Rb1為0.48 mg的混合液，即得。

2.1.2 供試品溶液制備 取舒胸滴丸約0.64 g，研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)20 min，放冷，密塞，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 陰性供試品溶液的制備 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1均為三七提取物中成分，故按處方比例制備缺三七提取物的陰性樣品，按“2.1.2”項下操作，即得陰性供試品溶液。

2.2 色譜條件 Hypersil ODS2,C18色譜柱(250 mm× 4.6 mm，5 μm)；流動相為乙腈-水(25∶75)洗脫；體積流量1 mL/min；檢測波長203 nm；柱溫25 ℃；進樣量20 μL。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 分別吸取對照品貯備液、陰性樣品溶液和供試品溶液，按上述色譜條件進樣，記錄色譜圖(見圖1)。結(jié)果表明，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的保留時間分別為28.0 min、32.5 min、62.5 min，且各色譜峰均達到基線分離，分離度均大于1.5。理論塔板數(shù)按三七皂苷R1計算不低于8000。樣品中其他成分對3個待測成分的測定無干擾。

圖1 混合對照品(A)、舒胸滴丸中樣品(B)、陰性樣品(C)HPLC圖譜

2.4 方法學考察

2.4.1 線性范圍 分別精密吸取上述混合對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0 mL，置5 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為系列標準溶液，按照上述色譜條件測定，記錄色譜圖。以質(zhì)量濃度X(μg/mL) 為橫坐標，峰面積Y為縱坐標作圖，得回歸方程。結(jié)果見表1。

表1 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1線性關(guān)系結(jié)果

2.4.2 重復性試驗 取同一批樣品(批號：110601) 6 份，按“2.1.2”項下方法制備成供試品溶液，在上述色譜條件下分別進樣測定。結(jié)果樣品中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1平均含有量(n=6)分別為7.33、29.33、35.00 mg/g，RSD分別為1.0%、1.3%、0.75%，表明方法重復性良好。

2.4.3 精密度試驗 按“2.1.2”項制備一份供試品溶液，連續(xù)進樣6針，在上述色譜條件下分別進樣測定。三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1峰面積的RSD分別為1.9%、0.92%、1.2%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗 按“2.1.2”項制備一份供試品溶液，分別于0、2、4、8、16、24 h后進樣，在上述色譜條件下分別進樣測定。三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1峰面積的RSD分別為1.8%、1.2%、1.1%，結(jié)果表明供試品溶液有很好的穩(wěn)定性，在24 h內(nèi)較穩(wěn)定。

2.4.5 加樣回收率試驗 精密稱取已知含有量的舒胸滴丸樣品(批號：110601)6份，分別置50 mL量瓶中，按80%、100%、120%的量各加入三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1對照品，按“2.1.2”項方法制備溶液，按上述色譜條件進行測定，計算回收率。結(jié)果三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1平均回收率(n=6)分別為99.04%、100.79%、99.97%，RSD分別為1.62%、1.32%、2.60%。結(jié)果見表2。

表2 3個成分回收率考察

2.4.6 樣品測定 取3 個批號的舒胸滴丸樣品，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進樣，測定各成分的峰面積，代入各自的線性方程，計算三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的量，結(jié)果見表3。

表3 舒胸滴丸中3種成分的測定結(jié)果(mg·g-1)

3 討論

3.1 樣品提取方法考察 實驗中考察了超聲和加熱回流2 種提取方法，結(jié)果表明超聲提取所得的樣品中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的量均高于加熱回流提取。在超聲提取方法中，考察了超聲10、20、30、40、50、60 min不同時間的提取效果，結(jié)果表明在超聲提取20 min后三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的量無顯著變化，因此選取超聲20 min。

3.2 檢測波長的選擇 利用高效液相色譜儀中二極管陣列檢測器的波長掃描功能，進行波長掃描，得到人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的紫外吸收光譜，結(jié)果表明其吸收波長僅在末端，最大吸收為203 nm。

3.3 結(jié)論 本實驗建立的HPLC 測定舒胸滴丸中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1含量的方法，針對3 個指標成分進行分析，專屬性強，簡便可靠，為舒胸滴丸質(zhì)量控制提供了科學依據(jù)。

參考文獻：

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