帕金森病患者外周血純真、記憶和調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群分析

郝娟 于順 陳彪 李堯華

帕金森病(Parkinson disease，PD)是常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病之一[1]。PD的病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全明了。許多研究結(jié)果顯示PD患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群比例失衡及T細(xì)胞免疫功能下降，提示免疫應(yīng)答所致慢性神經(jīng)炎性反應(yīng)是PD發(fā)生發(fā)展的機(jī)制之一[2-3]。本研究采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)PD患者外周血T淋巴細(xì)胞中的純真細(xì)胞亞群、記憶細(xì)胞亞群和調(diào)節(jié)性細(xì)胞亞群的變化進(jìn)行檢測(cè)，旨在探討其在PD發(fā)病中的作用。

1 對(duì)象和方法

1.1研究對(duì)象(1)病例組：共34例，其中男17例，女17例，年齡37～70歲, 平均(51.84 ±8.86)歲。病程1～5年，平均(2.8 ±0.8)年。均符合中國(guó)PD診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。將PD患者按改良Hoehn-Yahr[4]分級(jí)法分級(jí)，均處于Ⅰ～Ⅲ級(jí)，屬于輕中度患者。(2)對(duì)照組：共35名，其中男17名，女18名，年齡35～73歲，平均(53.86 ±10.26)歲，均系健康志愿者，無(wú)明顯疾病史。入選和排除標(biāo)準(zhǔn)：排除自身免疫性疾病、正在使用對(duì)免疫系統(tǒng)有影響的藥物以及患有影響免疫系統(tǒng)疾病的患者。

1.2方法采用微量全血直接免疫熒光染色法檢測(cè)外周血T淋巴細(xì)胞亞群。主要儀器和試劑包括Facscalibur、Accuri C6流式細(xì)胞儀以及小鼠抗人CD3PERCP、CD4FITC、CD8PE、CD45RAFITC、CD45ROAPC、CD25APC、FoxP3PE免疫熒光抗體，均購(gòu)自美國(guó)BD公司。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，計(jì)量資料均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組均數(shù)間比較采用t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

與對(duì)照組比較，PD患者外周血總淋巴細(xì)胞百分比降低，殺傷性純真T細(xì)胞亞群(CD8+CD45RA+CD45RO-)百分比增高，殺傷性記憶T細(xì)胞亞群(CD8+CD45RA-CD45RO+)和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亞群(CD4+CD25+FoxP3+)百分比均降低(均P<0.01)，而CD3+CD4+T細(xì)胞亞群和CD3+CD8+T細(xì)胞亞群占總淋巴細(xì)胞的百分比與健康對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，輔助性純真T細(xì)胞亞群(CD4+CD45RA+CD45RO-)和輔助性記憶T細(xì)胞亞群(CD4+CD45RA-CD45RO+)與健康對(duì)照組比較亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(表1)。

表 1 兩組T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果比較

3 討論

PD是常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病之一，免疫應(yīng)答機(jī)制在其發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮作用[5]。淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要組成部分，直接參與機(jī)體的先天性免疫和獲得性免疫。本研究結(jié)果顯示，PD患者外周血總淋巴細(xì)胞百分比明顯低于健康對(duì)照組，這與Gruden等[6]和Mosley等[2]的報(bào)道一致，提示PD患者存在免疫系統(tǒng)功能異常。

CD3+CD4+T細(xì)胞和 CD3+CD8+T細(xì)胞是兩個(gè)功能不同的T細(xì)胞亞群。健康人體內(nèi)CD3+CD4+T細(xì)胞亞群多于CD3+CD8+T細(xì)胞亞群，二者比值大于1.0。有研究結(jié)果顯示[7]，PD患者CD3+CD4+T細(xì)胞亞群占總淋巴細(xì)胞百分比較健康人變化不大，CD3+CD8+T細(xì)胞亞群占總淋巴細(xì)胞百分比較健康人有所升高，導(dǎo)致CD3+CD4+T/CD3+CD8+T的比值稍下降。本研究結(jié)果顯示，PD患者CD3+CD4+T細(xì)胞亞群和CD3+CD8+T細(xì)胞亞群各占總淋巴細(xì)胞(CD3+T細(xì)胞)的百分比與健康對(duì)照比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，這可能與研究的抽樣誤差有關(guān)，具體結(jié)果有待進(jìn)一步論證。

CD45RA和CD45RO是CD45(白細(xì)胞共同抗原)的兩類亞型，由CD45肽鏈胞外區(qū)氨基端的3個(gè)外顯子發(fā)生旁路剪接而致，缺乏3種外顯子的同型稱為CD45RO，僅表達(dá)外顯子A的同型稱為CD45RA。CD45RO+T細(xì)胞表現(xiàn)為記憶細(xì)胞的特點(diǎn)，具有輔助誘導(dǎo)作用；而CD45RA+T 細(xì)胞卻表現(xiàn)為初始T細(xì)胞的特點(diǎn)，具有抑制免疫的作用。CD45RA+T細(xì)胞亞群和CD45RO+T細(xì)胞亞群的變化可能在很多疾病中均可作為疾病活動(dòng)、復(fù)發(fā)和療效的判定指標(biāo)之一，具有重要的臨床意義。本研究結(jié)果顯示，PD患者外周血輔助性純真T細(xì)胞亞群(CD4+CD45RA+CD45RO-)和輔助性記憶T細(xì)胞亞群(CD4+CD45RA-CD45RO+)較健康人無(wú)明顯變化，這與以往研究結(jié)果一致[7]。有文獻(xiàn)報(bào)道[2，8-9]，PD患者的CD4+CD45RO+T細(xì)胞亞群較健康人顯著升高，并且其升高程度和帕金森綜合評(píng)分量表(UPDRS-Ⅲ)評(píng)分呈中度正相關(guān)，而PD患者CD4+CD45RA+T細(xì)胞亞群較健康人有選擇性丟失，但目前尚未見(jiàn)有關(guān)PD患者CD8+CD45RA-CD45RO+T細(xì)胞亞群和CD8+CD45RA+CD45RO-T細(xì)胞亞群變化的報(bào)道。CD45RO曾一度被認(rèn)作記憶性T細(xì)胞的標(biāo)志，但最近研究表明，它是細(xì)胞新近活化的象征：靜止的T細(xì)胞表達(dá)CD45RA，但活化后立即改為CD45RO，幾周后又恢復(fù)表達(dá)CD45RA，PD患者外周血某些細(xì)胞因子如細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)和淋巴細(xì)胞功能相關(guān)分子( LFA-1)等水平增加，可能是導(dǎo)致CD4+和 CD8+T細(xì)胞亞群中 CD45RA+細(xì)胞比例下降，CD45RO+細(xì)胞比例升高的原因之一[10]。本研究結(jié)果顯示CD8+CD45RA-CD45RO+T細(xì)胞亞群較健康人減少、CD8+CD45RA+CD45RO-T細(xì)胞亞群較健康人增多，提示PD患者殺傷性T細(xì)胞活化過(guò)程可能受到影響，也可能與所有PD患者都服用多巴胺制劑有關(guān)。因?yàn)榉枚喟桶分苿?huì)導(dǎo)致T細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)譜的改變，進(jìn)而可能會(huì)對(duì)PD患者的免疫功能造成一定影響[11]。

調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)是不同于 Th1 和 Th2 細(xì)胞的一種 CD4+T細(xì)胞亞群，具有維持機(jī)體自身免疫耐受的作用，通過(guò)抑制免疫亢進(jìn)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫平衡，避免自身免疫病的發(fā)生，其表面標(biāo)記為CD4+CD25+FoxP3+。本研究發(fā)現(xiàn)PD患者Treg較健康人減少，與文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果[12]一致。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明[13]，Treg細(xì)胞減少能夠?qū)е滦∧z質(zhì)細(xì)胞炎性反應(yīng)加速，促進(jìn)黑質(zhì)紋狀體神經(jīng)元死亡，從而加重 PD病情。在神經(jīng)保護(hù)方面，Treg細(xì)胞能夠通過(guò)抑制抗原提呈細(xì)胞(APC)提呈抗原的表達(dá)，抑制獲得性免疫的發(fā)生和效應(yīng)性T細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)免疫細(xì)胞由Th1、Th17等效應(yīng)性T細(xì)胞向Th2漂移，進(jìn)而抑制神經(jīng)免疫炎性反應(yīng)的發(fā)生。在PD動(dòng)物模型中，Treg細(xì)胞可以通過(guò)血-腦脊液屏障到達(dá)神經(jīng)炎性反應(yīng)部位，通過(guò)釋放白細(xì)胞介素-10(IL-10)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)和FasL，進(jìn)一步誘導(dǎo)活化型小膠質(zhì)細(xì)胞向靜止型小膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)變，或直接誘導(dǎo)活化性小膠質(zhì)細(xì)胞凋亡，減少神經(jīng)損傷，從而進(jìn)一步抑制了活性氧(ROS)、活性氮(RNS)、過(guò)氧化亞硝基(OONO-)的釋放。另外，Treg細(xì)胞還能分泌腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)、膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)等神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子[2,14-15]。

綜上所述，PD患者外周血淋巴細(xì)胞中殺傷性純真T細(xì)胞亞群、殺傷性記憶T細(xì)胞亞群及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亞群百分比與健康者間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，細(xì)胞免疫失衡可能參與了PD的病理進(jìn)程。PD 患者體內(nèi)Treg 細(xì)胞減少，加重了神經(jīng)免疫炎性反應(yīng)，而Treg細(xì)胞的增多可以起到神經(jīng)保護(hù)作用，延緩PD進(jìn)程。由于TGF-β、IL-2、 IL-10、全反式維甲酸等細(xì)胞因子可以促使T細(xì)胞向Treg細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化[2]，提示通過(guò)體內(nèi)誘導(dǎo)Treg細(xì)胞可能為治療 PD 提供新的思路。

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