維生素D受體基因多態(tài)性與晚期肺腺癌化療敏感性關(guān)系

張麗嬌 楊雁鴻 唐利娟 齊曦明 侯燕燕 周文文 劉靜波 程少會(huì) 彭勇

肺癌是目前在發(fā)達(dá)國(guó)家及我國(guó)大中城市病死率最高的惡性腫瘤。非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)占肺癌的80%～85%，其中肺腺癌約占50%［1］。多數(shù)患者在疾病診斷時(shí)已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，幾乎不可能被治愈?；熓侵委熗砥诜切〖?xì)胞肺癌(NSCLC)的主要方法，20世紀(jì)90年代末，第三代新藥吉西他濱(GEM)、紫杉醇((TAX)、多西他賽(TXT)、長(zhǎng)春瑞濱(NVB)等相繼進(jìn)入臨床，與鉑類聯(lián)合成為晚期NSCLC一線治療的標(biāo)準(zhǔn)方案。研究表明，GEM/DDP在降低疾病進(jìn)展方面更具優(yōu)勢(shì)［2］。但其療效受到許多因素的影響，且預(yù)先判斷患者的化療療效較為困難。對(duì)2010年10月至2013年3月，在秦皇島市第一醫(yī)院腫瘤科住院接受化療的晚期NSCLC患者52例，進(jìn)行分析，探討VDR基因多態(tài)性與晚期肺腺癌化療療效的關(guān)系，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 經(jīng)病理學(xué)檢查確診的晚期肺腺癌患者(均為ⅢB期或Ⅳ期)52例，男28例，女24例;年齡30～75歲?；颊呔?jīng)CT掃描證實(shí)具有可測(cè)量的腫瘤病灶?；熐盎颊哐Ｒ?guī)肝腎功能均正常，心電圖無(wú)明顯異常，ECOG評(píng)分≤2，預(yù)期生存期≥3個(gè)月，排除有嚴(yán)重并發(fā)癥不能完成規(guī)定治療者。在化療前抽取靜脈血2 ml，提取外周血白細(xì)胞DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法對(duì)VDR基因Bsm1、Fok1位點(diǎn)的基因型進(jìn)行分析。

1.2 化療方案 患者完成GP/GC方案:吉西他濱(GEM)+順鉑(DDP)/卡鉑(CBP)化療。具體用藥為:GEM 1 000 mg/m2，第1、8天;DDP 75 mg/m2，第1天，或CBP AUC等于5～6，第1天;21 d為1個(gè)周期，患者均為初治，均為單獨(dú)接受化療(排除同時(shí)放化聯(lián)合治療者)。上述方案每3～4周重復(fù)，2～3周期后按照RECIST1.0標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行療效評(píng)價(jià)。

1.3 Bsm1、Fok1位點(diǎn)的基因型分析 以聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法分析VDR基因Bsm1、Fok1位點(diǎn)的多態(tài)。使用兩者公開發(fā)布的引物，采用PCR-RFLP方法對(duì)VDR基因Bsm1、Fok1位點(diǎn)的基因型進(jìn)行檢測(cè)，Bsml位點(diǎn)PCR反應(yīng)體系總量為25 μl，F(xiàn)ok1位點(diǎn)PCR反應(yīng)體系總量為25 μl，然后分別取10 μl Bsm1、Fok1位點(diǎn)的PCR反應(yīng)產(chǎn)物、基因組DNA、引物聚合酶緩沖液及0.2 μl的Bsm1、Fok1聚合酶分別于65℃恒溫箱16 h、37℃恒溫箱16 h。酶切產(chǎn)物于2%瓊脂糖凝膠電泳分析。質(zhì)控:隨機(jī)抽取5%樣本重測(cè)，復(fù)閱瓊膠、登記數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，不同基因型患者間化療療效的差異采用χ2檢驗(yàn)。當(dāng)期望值＜5時(shí)用Fisher精確概率法進(jìn)行計(jì)算。由Logistic回歸模型計(jì)算比值比(OR)及其95%可信區(qū)間(CI)，表示各種基因型及2個(gè)多態(tài)位點(diǎn)間聯(lián)合與療效的相關(guān)性，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 VDR基因Bsm1位點(diǎn)多態(tài)性與GP/GC方案化療敏感性的關(guān)系Bsm1位點(diǎn)，52例晚期NSCLC患者中，bb和Bb基因型分別為11例和41例，化療有效組Bsm1位點(diǎn)bb、Bb基因型分布頻率分別為8.7%、91.3%;無(wú)效組分別為5.3%、94.7%。2組基因型頻率分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.569，P＞0.05)。見表1。

2.2 VDR基因Fok1位點(diǎn)多態(tài)性與GP/GC方案化療敏感性的關(guān)系Fok1位點(diǎn)，52例患者中，ff、Ff、FF基因型分別為18例、22例、2例，化療有效組Fok1位點(diǎn)ff、Ff、FF基因型分布頻率分別為5.0%、52.0%、43.0%;無(wú)效組分別為8.1%、50.0%，41.9%。2組基因型頻率分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.232，P＞0.05)。見表1。

表1 VDR基因Bsm1、Fok1位點(diǎn)多態(tài)性與GP/GC方案化療敏感性的關(guān)系%

3 討論

VDR介導(dǎo)1，25(OH)2D3發(fā)揮生物效應(yīng)，是類固醇激素、甲狀腺激素受體超家族成員。維生素D在正常肺組織內(nèi)有抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、促進(jìn)細(xì)胞分化的作用，由轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子-VDR的調(diào)節(jié)。1，25(OH)2D3即活性維生素D在體內(nèi)具有多方面的活性，可維持鈣、磷平衡和骨代謝。許多研究發(fā)現(xiàn)，1，25(OH)2D3在腫瘤的預(yù)防和治療方面也具有重要作用［3-5］。惡性腫瘤多是由環(huán)境和遺傳因素共同作用的結(jié)果，環(huán)境致癌物和(或)其代謝產(chǎn)物攻擊機(jī)體細(xì)胞引起DNA損傷，修復(fù)系統(tǒng)進(jìn)行修復(fù)，以保證基因組的完整性和穩(wěn)定性。當(dāng)DNA損傷不能得到及時(shí)有效地修復(fù)，積累到一定程度則導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定性提高，引起細(xì)胞增殖和分化失控，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。多項(xiàng)研究報(bào)道，血清中低水平的維生素D代謝活性形式1，25(OH)2D3可使結(jié)直腸癌［6，7］、乳腺癌［8，9］、前列腺癌［10］的危險(xiǎn)性和病死率明顯升高。

基因組DNA序列中頻率＞1%的單個(gè)核苷酸的變異可導(dǎo)致其編碼的蛋白結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變，從而影響其生物學(xué)功能。在腫瘤治療領(lǐng)域表現(xiàn)為不同基因型患者對(duì)治療效果產(chǎn)生不同的反應(yīng)［11］。晚期腫瘤患者化療仍是主要治療手段，腫瘤耐藥是化療失敗的主要原因之一，其中MRP(多藥耐藥相關(guān)蛋白)和LRP(肺耐藥蛋白)在NSCLC中高表達(dá)，可反映腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥性。王英田等［12］關(guān)于維生素D的實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，ATRA(全反式維甲酸)或維生素D可下調(diào)肺腺癌MRP、LRP基因的表達(dá)水平，兩藥合用有協(xié)同作用，可以提高肺腺癌的化療敏感性。國(guó)內(nèi)也有相似結(jié)果報(bào)道［13，14］。維生素D不僅可以增強(qiáng)化療、放療和內(nèi)分泌治療腫瘤的療效，甚至還能降低甚至逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞對(duì)放化療的抵抗性。維生素D通過(guò)VDR介導(dǎo)發(fā)揮生物學(xué)作用，VDR基因具有多態(tài)性也影響了維生素D效應(yīng)的發(fā)揮。研究基因多態(tài)性與化療敏感性的關(guān)系可為個(gè)體化治療提供依據(jù)。王小杰等［15］研究發(fā)現(xiàn)ERCC1 118C/T和XPD Asp312Asn、Lys751Gln多態(tài)性與晚期NSCLC患者鉑類藥物化療敏感性密切相關(guān)。韓麗芳等［16］發(fā)現(xiàn)在小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌中，eIF3a 2554G＞A不同基因型的個(gè)體具有不同的鉑類化療療效。李文駿等［17］發(fā)現(xiàn)晚期非小細(xì)胞肺癌患者XRCC1基因第194位變異型(Arg/Trp或Trp/Trp)對(duì)鉑類化療敏感性優(yōu)于野生型(Arg/Arg)。

結(jié)果顯示，VDR基因多態(tài)性與化療敏感性之間無(wú)關(guān)聯(lián)。

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