鏈霉親和素-生物素放大免疫酶法在鼻咽癌診斷中的臨床應(yīng)用

周 珣，吳 皖

(孝感市中心醫(yī)院檢驗科，湖北 孝感 432000)

鼻咽癌是臨床常見的頭頸部惡性腫瘤性疾病，鼻咽癌在全球大多數(shù)地區(qū)和國家并不呈現(xiàn)高發(fā)態(tài)勢，主要的發(fā)病地區(qū)集中于亞洲，其中中國是鼻咽癌的高發(fā)國家，鼻咽癌在我國廣東地區(qū)的發(fā)病率已經(jīng)達(dá)到20/10萬[1]，而在上海地區(qū)發(fā)病率為4.7/10萬[2]，由于我國人口基數(shù)較大的原因，每年新增的鼻咽癌患者人數(shù)在10萬人次之上，發(fā)病情況在惡性腫瘤性疾病中不容樂觀，晚期鼻咽癌可侵犯患者的腦神經(jīng)、三叉神經(jīng)并且可以影響患者正常的視力和聽力，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移可造成患者死亡。目前針對鼻咽癌的治療以放射治療為主，早期鼻咽癌的放射治療效果較好，調(diào)強(qiáng)放療可以有效地提高鼻咽癌的區(qū)域控制率，增強(qiáng)患者的遠(yuǎn)期療效，從而達(dá)到改善預(yù)后的目的[3]，因此早期對鼻咽癌做出診斷對于鼻咽癌患者的預(yù)后具有十分重要的意義，因此本研究分析鏈霉親和素-生物素放大免疫酶法在鼻咽癌檢測當(dāng)中的臨床價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2009年3月至2013年1月在孝感市中心醫(yī)院就診具有高度鼻咽癌危險的患者326例作為研究對象，其中男219例、女107例，年齡31～75(48.29±4.86)歲，在入組的326例患者中，有鼻咽癌家族史者201例，吸煙者198例，EB病毒(Epstein-Barr virus)感染者162例，居住地環(huán)境污染嚴(yán)重者157例，患者職業(yè)有接觸有害物質(zhì)危險者135例。排除存在嚴(yán)重肝、腎功能不全，嚴(yán)重血液系統(tǒng)疾病，自身免疫性疾病和臨床資料不全的患者。在進(jìn)行血清學(xué)檢測后，通過酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測EB病毒抗體，經(jīng)過病理學(xué)確診為鼻咽癌者117例，無鼻咽癌的高?；颊?09例。

1.2方法 鏈霉親和素-生物素放大免疫酶法：將患者血清和磷酸緩沖液(phosphate buffered solution，PBS)按照1∶5的比例進(jìn)行稀釋，之后將10 μL血清置于六孔板中，在37 ℃的條件下孵育50 min，再用PBS進(jìn)行沖洗，在充分清洗之后將生物素化學(xué)抗人IgA按照10 mL/L放入孔中，在孵育50 min之后，繼續(xù)用PBS進(jìn)行沖洗，在充分清洗之后將鏈霉親和素(濃度為20 mL/L)放入孔中，再孵育50 min，之后用PBS進(jìn)行沖洗，最后加入二氨基聯(lián)苯胺溶液，顯色5 min后采用顯微鏡觀察。常規(guī)免疫酶法：具體參照潘少霞等[4]的免疫酶法。

1.3觀察指標(biāo) 對鏈霉親和素-生物素放大免疫酶法與常規(guī)免疫酶法在鼻咽癌患者與鼻咽癌高危人群但無鼻咽癌患者的IgA/病毒殼體抗原(viral capsid antigen，VCA)和IgA/早期抗原(early antigen，EA)的檢出率進(jìn)行觀察。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)分析軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗和確切概率法，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1兩種方法對確診鼻咽癌患者IgA/VCA和IgA/EA的檢驗結(jié)果 鏈霉親和素-生物素放大免疫酶法的IgA/VCA和IgA/EA檢出陽性率顯著高于常規(guī)免疫酶法的檢出陽性率，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

表1 兩種方法對確診鼻咽癌患者IgA/VCA和IgA/EA的檢驗結(jié)果比較 [例(%)]

IgA：免疫球蛋白A；VCA：EB病毒殼抗原；EA：早期抗原

2.2兩種方法對鼻咽癌高危人群但無鼻咽癌患者IgA/VCA和IgA/EA的檢驗結(jié)果 鏈霉親和素-生物素放大免疫酶法的IgA/VCA和IgA/EA檢出陽性率與常規(guī)免疫酶法的檢出陽性率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.179，P>0.05)(表2)。

表2 兩種方法對鼻咽癌高危人群IgA/VCA和IgA/EA的檢驗結(jié)果比較 [例(%)]

IgA：免疫球蛋白A；VCA：EB病毒殼抗原；EA：早期抗原

3 討 論

鼻咽癌是一種高發(fā)于我國南部地區(qū)的惡性腫瘤，目前對于鼻咽癌的發(fā)病機(jī)制還不清楚，但是早期診斷可以明顯改善鼻咽癌患者的預(yù)后，放射是目前治療鼻咽癌最為有效的方式之一，調(diào)強(qiáng)放療的出現(xiàn)更是在減少了放療并發(fā)癥的基礎(chǔ)上提高了鼻咽癌的治療效果[5]，雖然鼻咽癌的放療敏感性較強(qiáng)，但是鼻咽癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移仍然是放療失敗和患者死亡的主要原因[6]。因此，在早期對鼻咽癌進(jìn)行診斷和及時治療是對鼻咽癌患者預(yù)后改善的關(guān)鍵。EB病毒人類皰疹病毒，在大量研究中被證實為鼻咽癌發(fā)病高度相關(guān)的危險因素[7-8]。有研究發(fā)現(xiàn)，在鼻咽癌患者的血清當(dāng)中EA和VCA水平較高[9]。免疫酶法對于IgA/VCA和IgA/EA的檢測是臨床上常用的早期診斷鼻咽癌的血清學(xué)檢測方法，免疫酶法雖然能夠在一定程度上對鼻咽癌進(jìn)行早期篩查，但是免疫酶法仍然存在缺乏客觀性和精確性的缺點；而在臨床檢驗學(xué)發(fā)展中出現(xiàn)的酶聯(lián)免疫吸附測定法，對鼻咽癌進(jìn)行早期篩查，其陽性率不高，限制了其使用[10]。因此，如何尋找一種新的檢驗方法就顯得尤為必要。

鏈霉親和素是一種在鏈霉菌中分泌的蛋白質(zhì)，鏈霉親和素所擁有的特點包括其相對分子質(zhì)量較小(65×103)，等電點顯示其表現(xiàn)為酸性；同時，鏈霉親和素并不附帶糖基，這可以促使鏈霉親和素表現(xiàn)為更高的特異性吸附，1個鏈霉親和素分子可以同時特異性吸附4個生物素分子，并且彼此之間結(jié)合穩(wěn)定，而與此同時生物素分子又可以與特異性的抗體進(jìn)行結(jié)合，在此過程中便形成了一個生物反應(yīng)抗體的有機(jī)系統(tǒng)。吳在榮等[11]利用鏈霉親和素-生物素免疫分析法對人胰島素進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，其回收率、靈敏度、線性范圍和批間變異系數(shù)均理想地符合臨床要求，同時操作也較為簡便。王金龍等[12]發(fā)現(xiàn)，鏈霉親和素-生物素免疫分析法測量人甲胎蛋白的回收率、靈敏度、線性范圍和批間變異系數(shù)較為理想。本研究發(fā)現(xiàn)，采用鏈霉親和素-生物素放大免疫酶法對117例鼻咽癌患者的IgA/VCA以及IgA/EA檢出率均高于常規(guī)免疫酶法在209例未患鼻咽癌患者當(dāng)中，鏈霉親和素-生物素放大免疫酶法的IgA/VCA檢出率與常規(guī)免疫酶法無差別，IgA/EA的檢出率則稍高于常規(guī)免疫酶法，這可能與此時為非鼻咽癌患者有關(guān)。

綜上所述，鏈霉親和素-生物素放大免疫酶法能夠較常規(guī)免疫酶法更為靈敏地診斷鼻咽癌。

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