不同產(chǎn)地蘿芙木藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)

鄧桂明 吳萍 張志國(guó) 譚元生 王宇紅 劉林

蘿芙木為夾竹桃科植物蘿芙木rauvolfia verticillata(Lour.)Baill.的根，分布于云南、廣西、廣東、臺(tái)灣、貴州等地，具有降壓，鎮(zhèn)靜，活血， 清熱解毒等功效[1]。 目前市面上的蘿芙木藥材來(lái)源混亂，影響蘿芙木的藥材質(zhì)量。蘿芙木藥材中提取出的生物堿，以利血平含量較高[2]。目前以利血平為主要成分開(kāi)發(fā)出的一系列治療高血壓的制劑，在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用[3]。本文以利血平含量為指標(biāo)、采用反相高效液相色譜法對(duì)不同產(chǎn)地蘿莢木藥材進(jìn)行鑒別與含量測(cè)定，為蘿芙木藥材國(guó)家質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent1100系列高效液相色譜儀(DAD檢測(cè)器，Agilent1100工作站)；Adventurer TM SOPYJ-020萬(wàn)分之一電子分析天平(奧豪斯國(guó)際貿(mào)易上海有限公司)；KQ-600型超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)；HH-S4型電熱恒溫水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司)；DHG-9076A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

1.2試藥 利血平對(duì)照品(批號(hào)100041-201012，供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所)，水為蒸餾水，流動(dòng)相用色譜純?cè)噭幉牡奶崛∮梅治黾冊(cè)噭?。蘿芙木藥材采集于廣西、廣東、云南地區(qū)，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院張志國(guó)主任藥師鑒定為正品。

2 方法與結(jié)果

2.1供試品溶液的制備[4]取蘿芙木藥材粉末(過(guò)四號(hào)篩)約3 g，置50 ml圓底燒瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，稱定重量，浸泡2 h，水浴加熱回流1 h，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜止，取上清液，過(guò)0.45 μm微孔薄膜作為樣品溶液。

2.2對(duì)照品溶液的制備[4]精密稱取減壓干燥至恒重的利血平對(duì)照品6.1 mg，置25 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，再取1 ml溶液用甲醇定容至10 ml容量瓶中，搖勻。每1 ml中含利血平24.4 μg。

2.3色譜條件 色譜柱：KromasilC18(5 μm,250×4.6 mm)；流動(dòng)相：甲醇:0.1%三氟乙酸(55 ∶ 45,V/V)；柱溫：30℃；流速：1 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：268 nm。

2.4系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 將空白溶液、利血平對(duì)照品溶液及蘿芙木樣品溶液依次進(jìn)樣20 μl，見(jiàn)圖1，從圖中可看出，空白溶液對(duì)對(duì)照品溶液及樣品溶液的測(cè)定無(wú)影響，利血平對(duì)照品溶液及云南蘿芙木根樣品溶液中利血平峰與相鄰組分峰分離完全；理論塔板數(shù)不低于4000。

圖1

產(chǎn)地樣本含量(mg/g)入藥部位云南A10.290根A20.220根A30.250根A4/莖A5/莖廣西B1/莖B2/莖B3/根莖混雜B40.026根莖混雜廣東C1/莖C2/莖C3/根莖混雜

注：“/”表示含量為0

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線 分別精密吸取上述對(duì)照品溶液(0.244 mg/ml)0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，2.0 ml，甲醇稀釋至10 ml，分別測(cè)定，利血平濃度(Y)和其對(duì)應(yīng)的峰面積(X)進(jìn)行數(shù)據(jù)回歸分析，回歸方程為：Y=0.0182X+3.065l，r=0.9994；結(jié)果表明，利血平進(jìn)樣量在48.8～488 μg時(shí)，峰面積和進(jìn)樣量呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.5精密性試驗(yàn) 精密吸取利血平對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液10 μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，利血平峰面積的RSD為1.50%(n=6)。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，24 h時(shí)精密吸取10 μl，注入液相色譜儀，測(cè)定。結(jié)果表明，24 h內(nèi)利血平峰面積無(wú)明顯變化(RSD為2.10%)。說(shuō)明供試品溶液在規(guī)定貯藏條件下24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次藥材，采用同一試驗(yàn)方案，制備提取液6份，測(cè)定，測(cè)得利血平含量的RSD為1.10%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

2.8回收率試驗(yàn) 精密量取6份已知利血平含量的供試液1.0 ml，精密加入對(duì)照品溶液1.0 ml，搖勻，精密吸取10 μl進(jìn)樣。算得平均回收率為99.3%，RSD為1.80%。

2.9蘿芙木供試品測(cè)定 取各種蘿芙木供試品，按照2.1項(xiàng)下方法浸提，精密吸取各供試品溶液20 μl，按“標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定”項(xiàng)下操作并測(cè)定吸收峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表1。

3 討論

3.1波長(zhǎng)的選擇 利血平的紫外光譜在218nm、268nm 和292nm處均有較強(qiáng)吸收[5]，但218nm靠近末端吸收，292nm是肩峰，而268nm峰形平緩，干擾相對(duì)較少，故選擇268nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2提取方法與溶劑的選擇 提取蘿芙木中利血平時(shí)比較了超聲提取和回流提取，結(jié)果回流提取優(yōu)于超聲提??；選擇提取溶劑時(shí)用到了甲醇，50%的乙醇水溶液，氯仿等溶液結(jié)果甲醇溶液優(yōu)于其他溶液。

3.3蘿芙木入藥部位的不同 現(xiàn)在市面上蘿芙木藥材入藥比較混雜，有根入藥，莖入藥，根莖甚至帶葉一起入藥，本文考察的不同產(chǎn)地與入藥部位的蘿芙木藥材中利血平含量有顯著差異，以云南蘿芙木根含量最高。由于蘿芙木入藥部位由單用根擴(kuò)大到莖、枝葉一起使用，混入其他假劣藥材等因素都會(huì)影響利血平的提取?，F(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)有收錄蘿芙木藥材，因此，急需規(guī)范蘿芙木藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本文通過(guò)對(duì)不同產(chǎn)地蘿芙木藥材的反相高效液相分析，為以后蘿芙木藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供了依據(jù)。

[1] 南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大辭典上下冊(cè).上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2006:4117.

[2] 洪博,李文靜,趙春杰.蘿芙木中化學(xué)成分的研究.藥學(xué)學(xué)報(bào),2012，47(6):764-768.

[3] 胡蕾,劉松青.復(fù)方利血平片治療原發(fā)性高血壓的有效性和安全性系統(tǒng)評(píng)價(jià).中國(guó)藥房，2012，23(34):3219-3223.

[4] 鄧明,曹福祥,龍絳血,等.云南蘿芙木中三種生物堿含量的HPLC法測(cè)定.湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，50(1):2332-2333.

[5] 朱偉偉,王齊,鄧晰朝.不同產(chǎn)地催吐蘿芙木中利血平含量的高效液相色譜分析.光譜實(shí)驗(yàn)室，2011，28(2):709-710.