細菌性陰道炎臨界值室內(nèi)質(zhì)控物的研制及評價

許瑞娜，華建江，劉和錄，陳 望，徐志康，李紅萍，丁 華，李 嫻

細菌性陰道炎臨界值室內(nèi)質(zhì)控物的研制及評價

許瑞娜，華建江，劉和錄，陳 望，徐志康，李紅萍，丁 華，李 嫻

目的：研制細菌性陰道炎（BV）臨界值室內(nèi)質(zhì)控物并建立相應的質(zhì)控程序。方法：用生理鹽水將唾液酸酶原液稀釋至濃度為7 U/mL，加入復合酶穩(wěn)定劑和疊氮鈉防腐劑，分裝于用1%小牛血清白蛋白封閉過的離心管，制備出BV臨界值室內(nèi)質(zhì)控物；在南方惠僑檢驗信息系統(tǒng)上建立BV的室內(nèi)質(zhì)控程序及半定量質(zhì)控圖，以評價其檢測效能和應用效果。結(jié)果：BV臨界值室內(nèi)質(zhì)控物濃度處于試驗方法的臨界值水平，其穩(wěn)定性較好，在室溫、4℃、-20℃的保存條件下，分別可穩(wěn)定220、310、365 d；建立的BV室內(nèi)質(zhì)控程序及半定量質(zhì)控圖可直觀、有效地監(jiān)測、檢驗試劑的靈敏度和可靠性。結(jié)論：BV臨界值室內(nèi)質(zhì)控物與建立相應的質(zhì)控程序,可作為BV質(zhì)控物商品化之前的一個補充，具有一定的臨床應用價值。

細菌性陰道炎；臨界室內(nèi)質(zhì)控物；研制

0 引言

診斷細菌性陰道炎的傳統(tǒng)方法是Amsel法[1]，此法操作繁瑣、費時費力且易受多種因素的干擾，目前已被唾液酸酶法所取代。由于各生產(chǎn)廠家的試劑質(zhì)量參差不齊，甚至同一廠家不同批號之間試劑的穩(wěn)定性也有差異，因此，必須采取嚴格的質(zhì)控措施才能保證檢測結(jié)果的準確性。然而，目前市面上尚無商品化的BV質(zhì)控物，故筆者研制出BV臨界值室內(nèi)質(zhì)控物并建立了相應的質(zhì)控程序，經(jīng)1 a的實際應用，效果較好，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器

AT-1600型全自動細菌性陰道病檢測儀，由廣州江元醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn)。

1.1.2 試劑

廣州江元醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn)的細菌性陰道病檢測試劑盒（唾液酸酶法），均在有效期內(nèi)使用。

1.1.3 質(zhì)控物配方材料

唾液酸酶原液、復合酶穩(wěn)定劑、小牛血清白蛋白、疊氮鈉均為美國SIGMA公司生產(chǎn)；分裝容器為一次性塑料離心管，由江蘇康健醫(yī)療用品有限公司生產(chǎn)，規(guī)格為0.5 mL。

1.2 方法

1.2.1 質(zhì)控物容器封閉方法

將0.5 mL規(guī)格的一次性塑料離心管用1%小牛血清白蛋白加至滿管，置于4℃冰箱中封閉24 h后，棄掉管內(nèi)液體，置生物安全柜內(nèi)自然晾干待用。

1.2.2 質(zhì)控物制備方法及分裝

用生理鹽水將唾液酸酶原液稀釋并加入若干濃

度的復合酶穩(wěn)定劑和防腐劑疊氮鈉，稀釋至唾液酸酶濃度為7 U/mL并分裝于封閉過的離心管中。

1.2.3 質(zhì)控物保存方法

將分裝好的自配BV臨界值質(zhì)控物分成3組，每組各365管，分別保存于室溫、4℃、-20℃下備用。

1.2.4 質(zhì)控物的檢測

每日取各保存溫度下的臨界質(zhì)控物各1管作為樣本，同時取生理鹽水作為陰性對照，與日常標本一同上機檢測，連續(xù)測定365 d。嚴格按照儀器操作說明書進行操作，儀器自動判斷結(jié)果。

1.2.5 室內(nèi)質(zhì)控程序

在南方惠僑檢驗信息系統(tǒng)上建立BV的室內(nèi)質(zhì)控程序及半定量質(zhì)控圖。（1）質(zhì)控頻率與濃度水平：每天1次，9：00前完成；每次做臨界值和陰性對照2個水平，陰性對照為無菌生理鹽水。（2）質(zhì)控結(jié)果轉(zhuǎn)換規(guī)則：檢測結(jié)果為“陰性”，在檢驗信息系統(tǒng)中輸入“0”；檢測結(jié)果為“弱陽性”，在檢驗信息系統(tǒng)中輸入“1”；檢測結(jié)果為“陽性”，在檢驗信息系統(tǒng)中輸入“2”；檢測結(jié)果為“強陽性”，在檢驗信息系統(tǒng)中輸入“3”。（3）質(zhì)控控制限設(shè)立：臨界陽性質(zhì)控的上失控線設(shè)為1.5，下失控線設(shè)為0.5；陰性對照的上失控線設(shè)為0.5，下失控線設(shè)為-0.5。（4）失控判斷規(guī)則：超過上下失控線者均判為失控。

2 結(jié)果

2.1 質(zhì)控物效能檢測

用儀器配套檢測試劑檢驗BV臨界值質(zhì)控物，結(jié)果均為弱陽性，可監(jiān)測相應試劑的靈敏度；陰性對照結(jié)果全部為陰性，可監(jiān)測相應試劑的特異性。與預期效應一致。

2.2 質(zhì)控物穩(wěn)定性檢測結(jié)果

在室溫、4℃、-20℃ 3種條件下各保存365 d后，質(zhì)控物外觀均清亮、無沉淀、未發(fā)生混濁，說明其防腐效果良好。3種保存條件下的質(zhì)控物連續(xù)測定365 d，監(jiān)測過程中若出現(xiàn)失控，經(jīng)失控原因分析判定為該保存溫度下質(zhì)控物變質(zhì)失效，則不再繼續(xù)監(jiān)測此保存溫度的質(zhì)控物。在室溫、4℃、-20℃保存條件下，分別可穩(wěn)定220、310、365 d。結(jié)果顯示，BV臨界值質(zhì)控物在各溫度條件下有較好的穩(wěn)定性，特別是在-20℃保存，其穩(wěn)定期可達1 a。

2.3 質(zhì)控物實際應用結(jié)果

應用廣州江元醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn)的BV試劑，在AT-1600型全自動細菌性陰道病檢測儀上檢驗BV臨界值質(zhì)控物，檢測結(jié)果根據(jù)質(zhì)控轉(zhuǎn)換規(guī)則輸入南方檢驗信息系統(tǒng)的“質(zhì)量控制圖表”中，系統(tǒng)自動形成半定量BV質(zhì)控圖，以監(jiān)測自配BV臨界值質(zhì)控物的失控與在控情況。應用1 a來，BV陰性對照未出現(xiàn)失控記錄（如圖1所示），BV臨界值質(zhì)控物在各溫度下均失控2次（如圖2所示），根據(jù)失控程序分析其原因是同一批號試劑靈敏度下降引起，更換不同批號試劑結(jié)果均在控。由此可見，BV臨界值質(zhì)控物可起到監(jiān)測相應試劑靈敏度及特異性的作用。

圖1 BV陰性對照圖

圖2 -20℃保存BV臨界值質(zhì)控物質(zhì)控圖

3 討論

細菌性陰道炎（BV）是育齡婦女最常見的下生殖道感染性疾病，且易復發(fā)[2]，其與早產(chǎn)、輸卵管炎等多種婦產(chǎn)科疾病密切相關(guān)[3]。因此，BV的檢查對婦產(chǎn)科疾病的防治具有重要意義。唾液酸酶[4]是BV致病菌所產(chǎn)生的特異性酶之一，其活性與病原菌數(shù)量呈正比，檢測唾液酸酶活性可了解病原體定居和繁殖的情況，是近年來診斷細菌性陰道病的新方法。根據(jù)衛(wèi)生部《醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》規(guī)定，醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室應當對開展的臨床檢驗項目進行室內(nèi)質(zhì)量控制，繪制質(zhì)量控制圖。然而，目前多數(shù)體液定性檢測項目（如BV、HCG等）尚無商品化質(zhì)控物，無法滿足實驗室質(zhì)量控制的需求[5]。故筆者研制出BV臨界值質(zhì)控物并建立相應的質(zhì)控程序。

本實驗采用BV臨界值質(zhì)控品來評價檢測試劑的敏感度，用陰性質(zhì)控品評價試劑的特異性。根據(jù)試劑廠家提供的靈敏度分析，唾液酸酶活性＞7 U/ mL的試驗結(jié)果應為陽性，唾液酸酶活性＜7 U/mL的試驗結(jié)果應為陰性。筆者配制的BV臨界值質(zhì)控物中唾液酸酶濃度為7 U/mL，處于試驗方法的臨界值水平，

（????）（????）可驗證檢測試劑的靈敏度。臨界值質(zhì)控物配制的關(guān)鍵技術(shù)在于保證其穩(wěn)定性，可根據(jù)酶的特性加入復合酶穩(wěn)定劑及疊氮鈉防腐劑。由于酶的含量較低，特預先將塑料離心管進行封閉處理，以防止質(zhì)控物在保存過程中降解和被塑料離心管壁吸附[6]。實驗結(jié)果顯示，在室溫、4℃、-20℃保存條件下，筆者研制的BV臨界值質(zhì)控物分別可穩(wěn)定220、310、365 d，說明容器的預封閉處理對BV臨界值質(zhì)控物的穩(wěn)定性起到了理想效果。在實際臨床應用中，監(jiān)測到BV臨界值質(zhì)控物在各溫度下均失控2次（如圖2所示）。據(jù)分析，失控原因是由于同一批號的試劑接近失效期致使其靈敏度下降所引起的，經(jīng)更換新批號試劑重測，其結(jié)果均在控。由此可見，BV臨界值質(zhì)控物和陰性質(zhì)控物聯(lián)合應用可起到監(jiān)測相應試劑的靈敏度和特異性的作用。

本研究顯示，BV臨界值質(zhì)控物分別在室溫和4℃保存條件下于第221天和第311天監(jiān)測時，結(jié)果均為陰性，而在-20℃保存條件下結(jié)果仍為弱陽性。這可能是由于在-20℃下唾液酸酶的濃度可長時間保持穩(wěn)定，而在室溫和4℃下其濃度引起緩慢下降所致?？梢?，不同保存溫度可對BV臨界值質(zhì)控物的穩(wěn)定性產(chǎn)生不同影響。通過較長時間的應用與觀察，自制BV臨界值質(zhì)控物在-20℃保存條件下其穩(wěn)定性最佳，用此質(zhì)控物與建立的相應質(zhì)控程序作為BV質(zhì)控物商品化之前的一個補充，既符合室內(nèi)質(zhì)控工作的要求又具有經(jīng)濟效益，有一定的臨床應用價值。

[1]Amsel R，Totten P A，Spiegel C A，et al.Nonspecific vaginitis：diagnostic criteria and microbial and epidemiologic associations[J].The American journal of medicine，1983，74（1）：14-22.

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[3]王冬，王振紅，邸慧明，等.胎兒纖維連接蛋白與細菌性陰道病和絨毛膜羊膜炎關(guān)系的研究[J].中華婦產(chǎn)科雜志，1999，34（7）：399.

[4]CauciS，CulhaneJ F，Di Santolo M，et al.Among pregnant women with bacterial vaginosis，the hydrolytic enzymes sialidase and prolidase are positively associated with interleukin-1β[J].American journal of obstetricsandgynecology，2008，198（1）：132.e1-7.

[5]劉和錄，許瑞娜，余素燕，等.5種定性試驗質(zhì)控物的研制與應用[J].國際檢驗醫(yī)學雜志，2012，33（5）：589-590.

[6]陸兵，謝英華.重組人表皮生長因子的穩(wěn)定性[J].生物技術(shù)通訊，2001，12（3）：194-197.

（收稿：2013-03-04 修回：2013-05-06）

Development and Evaluation of Indoor Quality Control Substance for Critical Value of Bacterial Vaginitis

XU Rui-na,HUA Jian-jiang,LIU He-lu,CHEN Wang,XU Zhi-kang,LI Hong-ping,DING Hua,LI Xian
(Department of Clinical Laboratory,Shenzhen Shajing Affliated Hospital of Guangzhou Medical University, Shenzhen 518104,Guangdong Province,China)

ObjectiveTo develop a piece of indoor quality control substance for the critical value of bacterial vaginitis(BV) and the corresponding quality control procedure.MethodsThe sialidase stock solution was diluted until the concentration came to 7 U/mL,the compound enzyme stabilizer and sodium azide preservative were added into the solution,the solution was put into the centrifuge tube sealed with calf serum albumin,then the indoor quality control substance for the critical value of BC came into being.The indoor quality control procedure and semi-quantitative quality control diagram were established based on NFHB-Lab Information System in order to evaluate the efficacy.ResultsThe indoor quality control substance for the critical value of BV was stable,and had a service life of 220,310 or 365 d respectively when the ambient temperature was room temperature,4℃ or-20℃.The quality control procedure and semi-quantitative quality control diagram could be used for monitoring the sensitivity and reliability of the agent.ConclusionThe indoor quality control substance for the critical value of BV and the corresponding quality control procedure are of significance for clinical application.[Chinese Medical Equipment Journal，2014，35（1）：40-41，53]

bacterial vaginisis;threshold level of indoor quality control substance;development

R318；R711．31

A

1003-8868（2014）01-0040-03

10.7687/J.ISSN1003-8868.2014.01.040

2012年深圳市寶安區(qū)科技計劃項目（2012159）

許瑞娜（1982—），女，檢驗技師，主要從事臨床醫(yī)學檢驗方面的研究工作，E-mail：449214582@qq.com。

518104廣東深圳，廣州醫(yī)學院附屬深圳沙井醫(yī)院檢驗科（許瑞娜，華建江，劉和錄，陳 望，徐志康，李紅萍，丁 華，李 嫻）