醫(yī)用多糖止血愈合海綿輔助敷料的阻菌作用

徐紅霞 于 燕 張彬彬 王曉陽 王風(fēng)華 姜 毅

1.解放軍海軍總醫(yī)院燒傷整形科，北京100048；2.解放軍第二〇一醫(yī)院藥劑科，遼寧遼陽111001；3.解放軍海軍總醫(yī)院呼吸內(nèi)科，北京100048；4.江蘇昌吉永生物科技有限公司，江蘇鎮(zhèn)江212000

醫(yī)用多糖止血愈合海綿輔助敷料的阻菌作用

徐紅霞1于 燕1張彬彬2王曉陽3王風(fēng)華4姜 毅3

1.解放軍海軍總醫(yī)院燒傷整形科，北京100048；2.解放軍第二〇一醫(yī)院藥劑科，遼寧遼陽111001；3.解放軍海軍總醫(yī)院呼吸內(nèi)科，北京100048；4.江蘇昌吉永生物科技有限公司，江蘇鎮(zhèn)江212000

目的研究醫(yī)用多糖止血愈合海綿輔助敷料的阻菌作用。方法參考YY/T 0471.5-2004接觸性創(chuàng)面敷料實驗方法，以醫(yī)用水刺無紡布為對照，檢驗醫(yī)用多糖止血愈合海綿輔助敷料對粘質(zhì)沙雷菌及溶藻弧菌的阻隔效能。結(jié)果醫(yī)用多糖止血愈合海綿的輔助敷料，對金黃色葡萄球菌氣溶膠具有隔菌性能，在低水分條件、半潮濕條件及潮濕條件下對粘質(zhì)沙雷菌或溶藻弧菌均有阻菌性能。結(jié)論醫(yī)用多糖止血愈合海綿的輔助敷料具有阻菌作用。

阻菌；粘質(zhì)沙雷菌；溶藻弧菌

在外傷止血尤其是戰(zhàn)傷止血材料的研究中，以多聚糖類為主要成分的止血材料占據(jù)了重要地位。醫(yī)用多糖止血愈合海綿是由江蘇昌吉永生物科技有限公司研發(fā)的，是具有止血及愈創(chuàng)作用的新型創(chuàng)面敷料，其功能性部分為疏松多孔的海綿狀結(jié)構(gòu)，阻隔細(xì)菌性能較差，而遠(yuǎn)隔創(chuàng)面，起襯托、固定等作用的輔助敷料結(jié)構(gòu)致密，為一層疏水膜，具有阻菌、阻水、透濕等性能，在實際使用中輔助敷料的外徑超過功能性部分，起到隔離外界物質(zhì)接觸創(chuàng)面的作用。本研究以此輔助敷料作為實驗對象，研究其阻隔細(xì)菌的性能?，F(xiàn)報道如下：

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCC25923）、粘質(zhì)沙雷菌臨床分離株、溶藻弧菌臨床分離株均由解放軍海軍總醫(yī)院檢驗科提供。分別在培養(yǎng)基上增菌后可見典型菌落，并且能夠正常傳代。

1.1.2 敷料實驗組：醫(yī)用多糖止血愈合海綿的輔助敷料（江蘇昌吉永生物科技有限公司，專利號：2012204 33377.2），厚約0.38 mm的單層疏水膜；對照組：醫(yī)用水刺法無紡布。兩種敷料經(jīng)裁剪后予以環(huán)氧乙烷消毒。

1.2 隔菌性能實驗

將40mm×40mm方形滅菌后敷料，用無菌操作平置于瓊脂糖培養(yǎng)基平皿中，培養(yǎng)基表面噴灑金黃色葡萄球菌氣溶膠，蓋上培養(yǎng)皿蓋，置37℃培養(yǎng)24 h，觀察敷料覆蓋處與未覆蓋處菌落生長狀況。將去除敷料后的培養(yǎng)基置37℃繼續(xù)培養(yǎng)24 h，觀察覆蓋處與未覆蓋處菌落的生長狀況。每組敷料連續(xù)操作3次。

1.3 低水分條件下的阻菌性能實驗

低水分條件是指材料的兩面都不濕的材料條件。用20～25℃的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)粘質(zhì)沙雷菌24 h，獲得菌含量約109個/mL。用無菌金屬絲接種環(huán)浸沾實驗菌液，在瓊脂糖培養(yǎng)基平皿上接種一個“×”形，每一個交叉線的長度不超過20mm。將培養(yǎng)皿置20～25℃下培養(yǎng)24 h，使菌落生長。將無菌敷料（60 mm×60 mm方形）平置于培養(yǎng)皿中，使其覆蓋“×”狀的細(xì)菌培養(yǎng)物，并粘貼緊。將瓊脂糖培養(yǎng)基和其上的敷料完整倒置在羊血瓊脂平皿上，使三者完全接觸，加蓋。將整個培養(yǎng)皿置于20～25℃培養(yǎng)24 h。取下上層的瓊脂糖培養(yǎng)基和敷料，羊血瓊脂平皿加蓋并置20～25℃下繼續(xù)培養(yǎng)24 h。檢查該血平皿被敷料覆蓋表面上是否有粘質(zhì)沙雷菌生長。每組敷料連續(xù)操作3次。溶藻弧菌實驗方法同上。

1.4 半潮濕條件下的阻菌性能實驗

半潮濕條件是指材料的一面是濕的材料條件，即敷料外部有水分浸濕的情況。用20～25℃的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)粘質(zhì)沙雷菌24 h，獲得菌含量約109個/mL。將無菌敷料（60mm×60 mm方形）平置于無菌營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平皿上，用無菌移液管向敷料上滴5滴（0.2 mL/滴，四角部和中央各一滴）培養(yǎng)菌液。置20～25℃下培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)結(jié)束后，用無菌移液管從敷料上將培養(yǎng)菌液吸除，用無菌鑷子將敷料從瓊脂表面取下。將培養(yǎng)皿置20～25℃下培養(yǎng)24 h。檢查培養(yǎng)皿，觀察敷料覆蓋的表面積內(nèi)是否有粘質(zhì)沙雷菌生長。每組敷料連續(xù)操作3次。溶藻弧菌實驗方法同上。

1.5 潮濕條件下的阻菌性能實驗

潮濕條件是指材料的兩面都是濕的材料條件。用20～25℃的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)粘質(zhì)沙雷菌24 h，獲得菌含量約109個/mL。以無菌操作，向無菌培養(yǎng)皿中注入約20 mL無菌營養(yǎng)肉湯，在皿口覆蓋一片無菌敷料，使其下部完全接觸培養(yǎng)基，向敷料上注入約10 mL菌液，蓋上培養(yǎng)皿蓋，室溫下放置24 h。24 h后移除粘質(zhì)沙雷菌液，去除敷料，加蓋，置20～25℃下培養(yǎng)24 h。檢查營養(yǎng)肉湯中是否有粘質(zhì)沙雷菌生長。每組敷料連續(xù)操作3次。溶藻弧菌實驗方法同上。

2 結(jié)果

2.1 隔菌性能實驗

如圖1所示，剛揭去敷料時及揭去敷料繼續(xù)培養(yǎng)24 h后，實驗組敷料及對照組敷料的培養(yǎng)基中心原敷料覆蓋處無菌落生長，而其余部分則長滿細(xì)菌，兩者之間有明顯的界線。重復(fù)實驗3次，結(jié)果相同。

圖1 隔菌性能實驗結(jié)果

2.2 低水分條件下的阻菌性能實驗

實驗組敷料在低水分條件下阻隔粘質(zhì)沙雷菌或溶藻弧菌的實驗結(jié)果如圖2所示，重復(fù)3次均相同，圖2c可見菌落未能透過實驗組敷料生長，說明實驗組敷料在低水分條件下具有阻菌性能。

對照組敷料在低水分條件下阻隔粘質(zhì)沙雷菌或溶藻弧菌的實驗結(jié)果如圖3所示，重復(fù)3次均相同，圖3c可見細(xì)菌透過實驗敷料生長，說明對照組敷料在低水分條件下無阻菌性能。

圖2 低水分條件下實驗敷料的阻菌性能實驗結(jié)果

圖3 低水分條件下對照組敷料的阻菌性能實驗結(jié)果

2.3 半潮濕條件下的阻菌性能實驗

半潮濕條件是指材料的一面是濕的條件，即敷料外部有水分浸濕的情況。由圖4可見，培養(yǎng)基上原實驗敷料覆蓋處無菌落生長，說明細(xì)菌無法穿透敷料，實驗敷料在半潮濕條件下具有阻菌性能。

由圖5a可見，實驗滴加的粘質(zhì)沙雷菌菌液或溶藻弧菌菌液已經(jīng)完全浸透對照組敷料；由圖5b可見，培養(yǎng)基上原對照組敷料覆蓋處菌落生長，并且由于對照敷料本身對菌液的吸收和擴(kuò)散作用，菌落生長的形狀基本符合敷料的形狀，說明在半潮濕條件下，對照組敷料無阻菌性能。產(chǎn)生這種結(jié)果可能是由于對照敷料一面潮濕后，本身對水分有毛細(xì)的吸力作用，水分使樣品內(nèi)部結(jié)構(gòu)疏松，網(wǎng)孔增大，對菌落阻力減小，造成菌落透過對照組敷料而在培養(yǎng)基上生長。

圖4 半潮濕條件下實驗組敷料的阻菌性能實驗結(jié)果

圖5 半潮濕條件下對照組敷料的阻菌性能實驗結(jié)果

2.4 潮濕條件下的阻菌性能實驗

潮濕條件是指材料的兩面都是濕的材料條件。實驗組敷料在潮濕條件下阻隔粘質(zhì)沙雷菌或溶藻弧菌的實驗均重復(fù)3次，每次結(jié)果相同，實驗結(jié)果如圖6所示，菌液未能透過實驗組敷料，說明實驗組敷料在潮濕條件下具有阻菌性能。

對照組敷料在潮濕條件下阻隔粘質(zhì)沙雷菌或溶藻弧菌的實驗也重復(fù)3次，每次結(jié)果相同，如圖7所示。由圖7a可見室溫放置24 h后菌液已經(jīng)浸透對照組敷料；圖7b可見，原清澈的營養(yǎng)肉湯變渾濁，說明對照組敷料在潮濕條件下無阻菌性能。

圖6 潮濕條件下實驗組敷料的阻菌性能實驗結(jié)果

圖7 潮濕條件下對照組敷料的阻菌性能實驗結(jié)果

3 討論

臨床上，患者創(chuàng)面的液體滲出量以及敷料的外部有無水分浸濕決定了接觸性創(chuàng)面敷料的使用條件，大致可分為低水分條件、半潮濕條件或潮濕條件，在醫(yī)藥行業(yè)的國家標(biāo)準(zhǔn)YY/T 0471.5-2004接觸性創(chuàng)面敷料實驗方法[1]中，按照上述三種不同條件制訂了相應(yīng)的實驗方法，用以評價敷料的阻菌性能，本實驗借鑒了行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[2]及既往文獻(xiàn)[3]中的方法進(jìn)行實驗設(shè)計，以外科傷口常見的金黃色葡萄球菌、粘質(zhì)沙雷菌及海水浸泡傷口中常見的溶藻弧菌為實驗菌種，研究實驗用輔助敷料的阻菌性能。

金黃色葡萄球菌在自然環(huán)境中廣泛存在，對外環(huán)境的抵抗力在無芽胞菌中最強(qiáng)，能在干燥狀態(tài)下生存，附著在塵埃顆粒和脫屑的上皮細(xì)胞上可造成空氣源性感染。在人群中金黃色葡萄球菌的帶菌率為30%～50%，是醫(yī)院感染的常見致病菌之一，故選用金黃色葡萄球菌氣溶膠來評價敷料的隔菌性能。在隔菌實驗中，實驗組敷料及對照組敷料的培養(yǎng)基中心原敷料覆蓋處均無菌落生長，而其余部分則長滿細(xì)菌，剛揭去敷料時的狀態(tài)與揭去敷料繼續(xù)培養(yǎng)24 h后的狀態(tài)完全相同，說明是敷料本身的隔菌性能所致，并非敷料的接觸抑制使菌落不生長。該項實驗說明兩種敷料均有隔菌效能，且重復(fù)性很好。對照組敷料為醫(yī)用水刺無紡布，其屏障功能是通過微生物屏蔽層的無數(shù)條細(xì)纖維無規(guī)律縱橫交錯，形成等效孔徑小于50μm的小孔，從而達(dá)到阻菌的性能[4]。

粘質(zhì)沙雷菌存在于土壤、水和食品中，也存在于人的呼吸道和消化道中，是條件致病菌。近年來，它在醫(yī)院感染中已成為重要的病原菌，在個別救護(hù)中心已成為創(chuàng)面檢出的主要菌種之一，并且因其菌體細(xì)小，也是用來衡量穿透性能的最佳細(xì)菌。粘質(zhì)沙雷菌在20℃條件下培養(yǎng)可產(chǎn)生靈菌紅素，菌落為紅色，本研究使用的是臨床分離株，不產(chǎn)生色素[5]，瓊脂糖培養(yǎng)基及羊血培養(yǎng)基上的菌落為白色。而溶藻弧菌屬于嗜鹽性海生弧菌，為海洋環(huán)境的主要優(yōu)勢菌種之一，生物學(xué)特性與副溶血弧菌極為相似，是沿海地區(qū)腹瀉和食物中毒的常見病原菌[6-11]，早在1973年就有人指出溶藻弧菌對人類有致病作用，主要引起創(chuàng)傷性感染和敗血癥等腸道外感染，如蜂窩組織炎、中耳炎、膿毒血癥等，因為實驗組敷料同時具有阻水性能，故選擇溶藻弧菌作為海水菌的代表菌種。

實驗組敷料在低水分條件、半潮濕條件及潮濕條件下阻隔粘質(zhì)沙雷菌或溶藻弧菌的實驗證實細(xì)菌未能透過實驗組敷料生長，說明實驗組敷料阻菌性能良好。實驗組敷料為聚四氟乙烯（PTFE）膜外噴涂聚氨酯制成，PTFE具有優(yōu)良的化學(xué)穩(wěn)定性、耐腐蝕性、電絕緣性和良好的抗老化耐力，但PTFE膜為絲狀PTFE壓制而成，孔徑較大，而帶涂層的PTFE復(fù)合膜可明顯提高其防水性及阻隔性能[12-14]，外涂聚氨酯后孔徑約為0.45μm，而較小的粘質(zhì)沙雷菌直徑約0.5μm，無法透過實驗組敷料。

對照敷料在低水分條件、半潮濕條件及潮濕條件下阻隔粘質(zhì)沙雷菌或溶藻弧菌的實驗證實細(xì)菌可透過對照組敷料生長，原因可能是由于對照組敷料相對于實驗組敷料而言，敷料纖維間孔徑較大，對細(xì)菌阻隔差，在含水分條件下細(xì)菌容易透過對照組敷料而在培養(yǎng)基上生長。

總的來說，實驗組敷料，即醫(yī)用多糖止血愈合海綿的輔助敷料，對金黃色葡萄球菌氣溶膠具有隔菌性能，在低水分條件、半潮濕條件及潮濕條件下對粘質(zhì)沙雷菌或溶藻弧菌均有阻菌性能。

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Effect of bacteria resistance of m edical polysaccharide hem ostatic healing sponge's secondary dressing

XU Hongxia1YU Yan1ZHANG Binbin2WANG Xiaoyang3WANG Fenghua4JIANG Yi3
1.Burns and Plastic Surgery,PLA Navy General Hospital,Beijing 100048,China;2.Department of Pharmacy,201st Hospital of PLA,Liaoning Province,Liaoyang 111001,China;3.Department of Respiratory Medicine,PLA Navy General Hospital,Beijing 100048,China;4.Jiangsu Changjiyong Bio-Technology Co.,Ltd.,Jiangsu Province, Zhenjiang 212000,China

Objective To study the bacteria resistance of the medical polysaccharide,China accharide hemostatic healing sponge.M ethods The testmethod for primary wound dressing YY/T 0471.5-2004 was referenced,a medical spunlaced nonwoven was as control,the effect of bacteria resistance of the secondary dressing was inspected.Resu lts Medical polysaccharide hemostatic healing sponge's secondary dressing had bacterial isolation performance against staphylococcus aureus aerosol,and bacteria resistance performance against serratia marcescens or vibrio alginolyticus under low moisture conditions,semiwet conditions and wet conditions.Conclusion Medical polysaccharide hemostatic healing sponge's secondary dressing has the effect of bacteria resistance.

Bacteria resistance;Serratiamarcescens;Vibrio alginolyticus

R187.1

A

1673-7210（2014）09（c）-0031-04

2014-06-13本文編輯：任念）

徐紅霞（1967.4-），女，碩士，副主任醫(yī)師；研究方向：醫(yī)學(xué)整形美容。

姜毅（1975.1-），男，博士；研究方向：呼吸危重癥。