Her2陽(yáng)性乳癌組織TopⅡα的表達(dá)及臨床意義

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(青島大學(xué)附屬醫(yī)院乳腺病診療中心，山東 青島 266101)

隨著分子生物學(xué)研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)乳癌是一種多基因變異所致的高度異質(zhì)性疾病。人表皮因子受體基因2(Her2)是目前研究最多且機(jī)制最清楚的乳癌相關(guān)基因之一，Her2/neu陽(yáng)性被認(rèn)為是影響乳癌預(yù)后的獨(dú)立因素[1]。DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα(TopⅡα) 基因位置與Her2基因毗鄰，其編碼的蛋白分子存在于增殖細(xì)胞中。近期的研究結(jié)果表明，TopⅡα基因的擴(kuò)增幾乎全部伴隨著Her2/neu基因的擴(kuò)增，但在TopⅡα蛋白研究方面并未見(jiàn)相似情況發(fā)生[2]。TopⅡα基因亦與乳癌預(yù)后密切相關(guān)，而TopⅡα蛋白表達(dá)能夠指導(dǎo)蒽環(huán)類藥物的給藥劑量。既往有研究顯示，TopⅡα蛋白表達(dá)與其基因擴(kuò)增缺乏相關(guān)性，可表現(xiàn)為TopⅡα基因不擴(kuò)增，而蛋白質(zhì)表達(dá)過(guò)量[3]，二者雖然都是預(yù)測(cè)化療藥物療效的標(biāo)記物，但目前并不清楚兩者中哪一個(gè)更重要，且是否有必要同時(shí)檢測(cè)。本研究選取Her2陽(yáng)性的乳房浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌(簡(jiǎn)稱乳癌)組織56例，分析TopⅡα蛋白的表達(dá)量與TopⅡα基因狀態(tài)的關(guān)系及二者與乳癌臨床病理特征之間的關(guān)系，旨在評(píng)估TopⅡα與乳癌惡性程度的關(guān)系，為判斷乳癌預(yù)后和制定個(gè)體化的治療方案提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

選取我院乳腺病診療中心組織標(biāo)本庫(kù)中2013年1—6月Her2陽(yáng)性乳癌標(biāo)本76例，均為女性病人，年齡29～69歲，中位年齡49歲。病人術(shù)前均未行化療、放療和內(nèi)分泌治療。所有標(biāo)本均經(jīng)熒光原位雜交(FISH)技術(shù)檢測(cè)確定為Her2陽(yáng)性。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1免疫組化(IHC)技術(shù)檢測(cè)TopⅡα蛋白的表達(dá) 采用IHC技術(shù)檢測(cè)TopⅡα蛋白的表達(dá)。具體步驟按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。單克隆抗體蛋白TopⅡα抗體(1∶100稀釋)由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供。每個(gè)腫瘤樣本分別計(jì)數(shù)500個(gè)腫瘤細(xì)胞的TopⅡα蛋白陽(yáng)性表達(dá)百分比。陽(yáng)性信號(hào)定位于細(xì)胞核，腫瘤細(xì)胞核呈棕黃或棕褐色的細(xì)胞數(shù)<25%定為TopⅡα蛋白Ⅰ級(jí)，以25%～50%為Ⅱ級(jí)，51%～75%為Ⅲ級(jí)，>75%為Ⅳ級(jí)。

1.2.2FISH技術(shù)檢測(cè)TopⅡα基因的表達(dá) 雜交所用的4 μm厚的石蠟組織切片取材于已確定行IHC檢測(cè)的標(biāo)本組織。PathVysion DNA LSITOPⅡΑ/CEP17探針試劑盒購(gòu)自上海Vysis公司。具體步驟按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。熒光顯微鏡下分別讀取經(jīng)DAPI染色細(xì)胞的綠色、橙色熒光信號(hào)，在triple-band-pass濾片下同時(shí)觀察3種熒光信號(hào)。圖片的獲取由FISH 3.0進(jìn)展成像軟件的照相機(jī)拍攝。分別記錄每個(gè)細(xì)胞中TopⅡα基因拷貝數(shù)(紅色熒光)和17號(hào)染色體著絲粒(綠色熒光)數(shù)目，每個(gè)樣本記錄60個(gè)腫瘤細(xì)胞。TopⅡα基因變異率為TopⅡα基因探針信號(hào)數(shù)目(紅色)與17號(hào)染色體信號(hào)(橙色)數(shù)目的比值。當(dāng)比值>2.0，TopⅡα基因?yàn)閿U(kuò)增；比值<0.8，為TopⅡα基因缺失；比值0.8～2.0，為TopⅡα基因無(wú)變化。

2 結(jié) 果

2.1 TopⅡα基因變異與蛋白表達(dá)的關(guān)系

在25例(32.89%)TopⅡα基因擴(kuò)增或缺失者中，TopⅡα蛋白Ⅰ級(jí)者11例(44.00%)，Ⅱ級(jí)者8例(32.00%)，Ⅲ級(jí)者6例(24.00%)；在51例(67.11%)TopⅡα基因無(wú)變化者中，TopⅡα蛋白Ⅰ級(jí)者16例(31.37%)，Ⅱ級(jí)者18例(35.29%)，Ⅲ級(jí)者17例(33.33%)。TopⅡα基因變異與TopⅡα蛋白表達(dá)無(wú)顯著相關(guān)性(P>0.05)。

2.2 TopⅡα蛋白表達(dá)和基因變異與乳癌臨床病理特征的關(guān)系

TopⅡα蛋白表達(dá)和基因變異與病人年齡、絕經(jīng)情況、組織學(xué)分級(jí)及AJCC分期無(wú)顯著相關(guān)性(P>0.05)，而與病人有無(wú)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移則顯著相關(guān)(χ2=8.546、7.285,P<0.05)。

3 討 論

TopⅡα基因是與Her2/neu基因相鄰的編碼基因，定位于染色體17q21-22，存在于增殖細(xì)胞，主要分布于核的基質(zhì)中。TopⅡα蛋白是一種作用于DNA特定區(qū)域而參與DNA轉(zhuǎn)錄、復(fù)制、修復(fù)的酶。DURBECQ等[4]的研究結(jié)果表明，TopⅡα酶蛋白過(guò)表達(dá)37%發(fā)生在Her2基因擴(kuò)增病人，38%發(fā)生在Her2/neu基因未擴(kuò)增的晚期乳癌病人；研究結(jié)果顯示，在Her2/neu陽(yáng)性的乳癌病人中，35%的病人發(fā)生TopⅡα基因擴(kuò)增，且這些病人從含蒽環(huán)的藥物方案治療中顯著獲益。由此可見(jiàn)，TopⅡα基因擴(kuò)增與Her2/neu的表達(dá)關(guān)系密切。大量研究認(rèn)為，TopⅡα蛋白的表達(dá)量與TopⅡα基因水平缺乏相關(guān)性[3]。本研究結(jié)果顯示，在TopⅡα基因變異(擴(kuò)增或缺失)與無(wú)變化組中，都觀察到TopⅡα蛋白的表達(dá)，但在TopⅡα基因變異組中，TopⅡα蛋白高表達(dá)率為56.00%(TopⅡα蛋白Ⅱ、Ⅲ級(jí))，低表達(dá)率為44.00%(TopⅡα蛋白Ⅰ級(jí))，兩者差別較小。但也有研究報(bào)道，TopⅡα蛋白的表達(dá)和TopⅡα基因擴(kuò)增有相關(guān)性[5]。這可能是樣本量及檢測(cè)方法的差異所致，除了轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)之外，可能還有其他的原因造成了蛋白的過(guò)表達(dá)[6-7]。

表1 TopⅡα基因變異與蛋白表達(dá)的關(guān)系(例)

表2 TopⅡα基因及其蛋白與乳癌臨床病理特征關(guān)系(例)

乳癌的臨床病理特征是制定乳癌治療方案的重要臨床指標(biāo)。有研究顯示，TopⅡα蛋白的表達(dá)與腫瘤大小無(wú)關(guān)，而與有無(wú)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，表明TopⅡα蛋白的表達(dá)可能與腫瘤的生物學(xué)行為相關(guān)，可能是乳癌惡性程度增高的指標(biāo)[8]。本研究結(jié)果顯示，TopⅡα蛋白的表達(dá)與病人的年齡、絕經(jīng)情況、組織學(xué)分級(jí)及AJCC分期無(wú)關(guān)，而與有無(wú)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，TopⅡα基因的變異也只與有無(wú)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。目前，Her2已被公認(rèn)與乳癌的發(fā)生、發(fā)展及其惡性程度的關(guān)系密切，為乳癌獨(dú)立的預(yù)后因素，該基因在20%～30%的乳癌組織中擴(kuò)增與過(guò)表達(dá)[9]。而TopⅡα基因位于人類染色體17q12-21上，與Her2基因毗鄰，TopⅡα基因擴(kuò)增常見(jiàn)于Her2基因擴(kuò)增的病例中。BCIRG005臨床實(shí)驗(yàn)選擇了1 600例Her2陰性的乳癌病例，發(fā)現(xiàn)所有病人中無(wú)1例伴有TopⅡα的擴(kuò)增，提示TopⅡα的擴(kuò)增僅僅局限在Her2過(guò)表達(dá)病例中。而另有研究顯示，35% Her2/neu陽(yáng)性的乳癌病人發(fā)生TopⅡα基因擴(kuò)增，且這些病人從含蒽環(huán)類藥物的化療方案中顯著獲益[4]。大量研究也已證實(shí)，TopⅡα蛋白和基因都是預(yù)測(cè)蒽環(huán)類藥物化療效果的重要臨床指標(biāo)。

在臨床上應(yīng)用IHC法檢測(cè)蛋白的表達(dá)比應(yīng)用FISH法檢測(cè)基因更為經(jīng)濟(jì)，且應(yīng)用更為廣泛，故對(duì)TopⅡα蛋白的檢測(cè)更具有臨床價(jià)值。本研究選取Her2陽(yáng)性的乳癌組織，排除了Her2對(duì)TopⅡα的影響，但也存在缺陷，沒(méi)有分析TopⅡα基因倍體性與臨床病理特征的關(guān)系，且樣本數(shù)量較少，實(shí)驗(yàn)結(jié)果尚待大樣本實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)一步證實(shí)。

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