氨基酸紙色譜實驗的改進

黃 敏，陳明迎，舒建德

（連州衛(wèi)生學校，廣東 連州 513400）

1 材料

1.1 器材

培養(yǎng)皿一套、表面皿（或酒精瓶內蓋）、中速色譜濾紙、毛細吸管、顯色用噴霧器、電吹風、電烤箱。

1.2 試劑

0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液（50ml）：精密稱取1.42 g磷酸氫二鈉固體，用蒸餾水溶于小燒杯中，再轉移到50ml容量瓶中定容。

0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液（50 ml）：精密稱取1.2 g磷酸二氫鈉固體，用蒸餾水溶于小燒杯中，再轉移到50ml容量瓶中定容。

pH 7.4的磷酸緩沖溶液：取0.2 mol/L磷酸氫二鈉溶液40.5m l與0.2 mol/L磷酸二氫鈉溶液9.5 m l混勻，加蒸餾水至1 000m l。

0.1mol/L丙氨酸溶液：精密稱取0.891 g丙氨酸固體，溶于少量pH7.4的磷酸緩沖溶液中，以1 mol NaOH調至pH7.4后，加磷酸緩沖溶液至100m l。

0.1mol/L谷氨酸溶液：精密稱取0.735 g谷氨酸固體，溶于少量pH7.4的磷酸緩沖溶液中，以1 mol NaOH調至pH7.4后，加磷酸緩沖溶液至50ml。

混合氨基酸溶液：取丙氨酸與谷氨酸溶液各5m l混合。

0.1%茚三酮乙醇溶液：精密稱取0.1 g茚三酮固體，用少量95%乙醇溶解，加95%乙醇至100m l。

飽和苯酚-水溶液（展開劑）：將適量的苯酚溶液溶于適量的水中，得到渾濁液，置于分液漏斗中，靜置8小時，待下層溶液清晰透明，取下層溶液。

2 方法

2.1 準備

取一張邊長為11 cm的正方形中速色譜濾紙，在濾紙上畫一直徑為5.5 cm的圓，以該圓的圓心為定點，1 cm為半徑再畫一同心圓，在小圓內過圓心作兩條相互垂直的線，兩條垂線兩端分別與小圓連接，見圖1。

2.2 點樣

如圖1所示，在1、3兩處用毛細吸管分別點上丙氨酸和谷氨酸溶液各3滴，在2、4兩處點上混合氨基酸溶液，注意點樣痕跡不宜擴散較寬。每一次點完用電吹風吹干，重復點3次即可。

圖1 紙色譜實驗的層析濾紙準備

2.3 層析

取一張同類濾紙（1.5 cm×1.5 cm），將下半剪成須狀，卷成圓筒。將少量的飽和苯酚-水溶液倒入表面皿中，溶液加至距表面皿邊緣0.5 cm處，將表面皿置于培養(yǎng)皿正中。在點好樣的濾紙圓心處打一個小孔（鉛筆尖大?。?，將卷好的圓筒濾紙的上端插入小孔（不要讓頂端突出）呈燈芯狀，再將點好樣的濾紙平放到培養(yǎng)皿上，“燈芯”浸入展開劑中。將同樣大小的培養(yǎng)皿反扣在上面以防展開劑揮發(fā)，見圖2。約30分鐘后取出濾紙，用鉛筆畫出展開劑邊緣，再放在60℃電烤箱中烘干。

圖2 層析裝置示意圖

2.4 顯色

烘干后的濾紙展開劑揮發(fā)，用噴霧器噴上0.1%茚三酮乙醇溶液，再放到60℃電烤箱中烘干，可見紫色同心弧斑出現(xiàn)。

2.5 測量計算

用鉛筆畫出色斑的中心，用尺量取各色斑中心到原點的距離、原點到試劑前緣的距離，并記錄，計算出它們各自的Rf值。分析各色斑是何種氨基酸。

3 討論

分析化學紙色譜實驗是將色譜濾紙懸掛于盛展開劑的色譜缸頂端飽和，10分鐘后再行展開。色譜缸空間較大，濾紙懸掛頂端不便操作。本實驗改進為水平型紙色譜，器材簡易，易于獲取和操作。實驗結果與教材相同，效果滿意。

氨基酸水平型紙色譜實驗能使學生更好地通過實踐來理解實驗原理，激發(fā)學生對分析化學的學習興趣和求知欲望，鍛煉學生的動手能力。■