鴨大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

金艷麗 （江蘇省新沂市動物衛(wèi)生監(jiān)督所 221400）

鴨大腸桿菌病是鴨的常發(fā)病，?；旌匣蚶^發(fā)于其他疾病，發(fā)病鴨多以敗血癥為主，主要病理變化表現(xiàn)為心包炎、肝周炎、氣囊炎。近年來，隨著我國畜牧業(yè)的發(fā)展，獸醫(yī)臨床上抗菌藥物被廣泛應(yīng)用，導(dǎo)致大腸桿菌耐藥不斷增加，治療效果下降。許多養(yǎng)殖戶往往憑經(jīng)驗(yàn)甚至是亂用藥，不僅療效差，且容易造成耐藥性和藥物殘留。因此，對當(dāng)?shù)胤蛛x的大腸桿菌菌株進(jìn)行抗生素的敏感試驗(yàn)很有必要。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料來源 2013年5月新沂市馬陵山鎮(zhèn)某養(yǎng)殖戶送檢的病死鴨。

1.1.2 培養(yǎng)基的制備 麥康凱瓊脂購自青島海博生物技術(shù)有限公司，批號20110524。各種糖及mR、VP、吲哚試驗(yàn)、枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)和硫化氫試驗(yàn)微量發(fā)酵管，購自青島海博生物技術(shù)有限公司，批號20090816。營養(yǎng)肉湯、VP試劑等參考文獻(xiàn)配置[1]。

1.1.3 試驗(yàn)動物 9日齡雛鴨10只，購自城區(qū)某養(yǎng)鴨專業(yè)戶，飼養(yǎng)3d后用于作動物致病性試驗(yàn)。

1.1.4 藥敏紙片 藥敏紙片購自青島海博生物技術(shù)有限公司，批號200100125。

1.2 方法

1.2.1 流行病學(xué)調(diào)查 5家養(yǎng)殖戶均在新沂市馬陵山鎮(zhèn)一條小河邊養(yǎng)殖，水質(zhì)污染嚴(yán)重，5個鴨場養(yǎng)殖量均在10000左右，飼養(yǎng)方式原始、簡單，衛(wèi)生狀況不好，每天都有8-12只蛋鴨死亡，產(chǎn)蛋率低，用多種抗生素治療均不理想，鴨群整體精神狀態(tài)差。

1.2.2 病理剖檢 病理剖檢可見纖維素性心包炎，心包膜明顯增厚，其上沉著白色或黃色纖維素性附著物。肝臟腫大，表面膜附著纖維素性樣物。

1.2.3 細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鏡檢 無菌取病送檢病鴨肝臟、心血接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，37℃增菌培養(yǎng)24h。然后將培養(yǎng)物在麥康凱瓊脂平板上劃線接種，37℃培養(yǎng)24h，觀察細(xì)菌的培養(yǎng)特性，革蘭氏染色結(jié)果。再鉤取典型菌落接種鮮血瓊脂斜面37℃培養(yǎng)24h，4℃保存。

1.2.4 細(xì)菌的生化試驗(yàn) 參考文獻(xiàn)[1]進(jìn)行細(xì)菌生化試驗(yàn)。

1.2.5 致病性試驗(yàn) 取分離菌接種營養(yǎng)肉湯，37℃培養(yǎng)18h。將10只雛鴨分為兩組，每組5只，第一組為于皮下接種注射純培養(yǎng)物0.2ml/只(約含細(xì)菌0.6億/只)，第二組注射滅菌肉湯0.2ml/只。接種24h后觀察試驗(yàn)動物的發(fā)病及死亡情況。

1.2.6 細(xì)菌的藥敏試驗(yàn) 取細(xì)菌純培養(yǎng)物密集劃線接種于整個普通瓊脂平板上，將藥敏片依次均勻貼放到平板上。每個平板放5片，各紙片中心相距約24mm，紙片距平板邊緣約15mm，各紙片間距離相等。將平板倒置于37℃溫箱培養(yǎng)24h，然后觀察藥物的抑菌情況，并測定各種藥物抑菌圈的大小。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 細(xì)菌特性及鏡檢結(jié)果

細(xì)菌在普通肉湯中均生長良好，均勻混濁，管底有灰白色沉淀，輕搖呈云霧狀；在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上生長出周圍粉紅色，中心深紅色的菌落。該菌經(jīng)革蘭氏染色可見紅色中等大小，兩端鈍圓的球桿菌，多單個散在排列。

2.2 生化試驗(yàn)結(jié)果

該細(xì)菌能夠發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖和甘露醇，產(chǎn)酸產(chǎn)氣；發(fā)酵蔗糖，不產(chǎn)氣；吲哚試驗(yàn)和mR試驗(yàn)陽性；VP試驗(yàn)、檸檬酸鹽利用試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)和尿素分解試驗(yàn)為陰性(表1)結(jié)合培養(yǎng)特性及鏡檢結(jié)果，鑒定為大腸桿菌。

表1 離菌株的生化試驗(yàn)結(jié)果

2.3 致病性試驗(yàn)結(jié)果

雛鴨在細(xì)菌接種后24h內(nèi)死亡4只，而剩下的在48h后也死亡。剖檢發(fā)現(xiàn)雛鴨有肝周炎，心包積液，心包膜有輕微的纖維素性滲出等病變。從死亡雛鴨的肝臟和心血中，分離到了大腸桿菌。而對照組無異常表現(xiàn)。

2.4 藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果

所分離菌株對呋喃妥因、阿米卡星和痢特靈3種藥物高度敏感，對先鋒噻肟、菌必治和慶大霉素中度敏感，而對四環(huán)素、環(huán)丙沙星等藥物表現(xiàn)為耐藥性(見表2)。

表2 分離的大腸桿菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果 （mm）

3 討論

根據(jù)分離培養(yǎng)菌的特性、染色特點(diǎn)及生化試驗(yàn)結(jié)果，該細(xì)菌鑒定為大腸桿菌。經(jīng)動物試驗(yàn)表明該分離菌株有較強(qiáng)的致病性。大腸桿菌病是一種常發(fā)病，但是卻難于控制，這不僅因?yàn)槠溲逍投?，各血清型間無交叉保護(hù)性，而且不同血清型對藥物的敏感性不一致[2,3]。不同地區(qū)的大腸桿菌對藥物敏感性也各不一致[4,5]。本次藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明分離菌對呋喃妥因、阿米卡星和痢特靈3種藥物高度敏感，對先鋒噻肟、菌必治和慶大霉素中度敏感，而對四環(huán)素、環(huán)丙沙星等藥物表現(xiàn)為耐藥性，表明當(dāng)?shù)伉喆竽c桿菌分離株對常見的藥物均有較強(qiáng)的耐藥性。由于大腸桿菌極易產(chǎn)生耐藥性，且介導(dǎo)其產(chǎn)生耐藥的質(zhì)粒具有遺傳性，所以一般不建議采用抗生素低劑量長期預(yù)防用藥，臨床最好使用經(jīng)實(shí)驗(yàn)篩選的敏感性藥物治療劑量作治療性用藥，病愈后應(yīng)及時停止使用以防耐藥性的產(chǎn)生[6,7]。此外，使用高敏藥物時，應(yīng)按說明給藥，避免超量和濫用，每個療程應(yīng)在4d以上較好。當(dāng)畜主按照藥敏試驗(yàn)結(jié)果使用了高敏藥物呋喃妥因5d后，病情得到了很好的控制。

4 結(jié)論

大腸桿菌為一種條件性致病菌，鴨發(fā)大腸桿菌病除了環(huán)境衛(wèi)生條件差外，還與飼養(yǎng)密度、混群飼養(yǎng)、種蛋污染的因素有關(guān)[5]。為減少此病發(fā)生，主要措施是改善飼養(yǎng)管理，做好鴨舍的環(huán)境衛(wèi)生工作，保持合理放養(yǎng)密度，鴨棚保持良好的通風(fēng)條件，采用全進(jìn)全出飼養(yǎng)方式。塘水清潔，定期換水，飲水、飼料要衛(wèi)生消毒，特別是當(dāng)天氣驟變時要防止寒風(fēng)侵襲，導(dǎo)致鴨體質(zhì)下降而引發(fā)本病。種蛋要及時收集并清潔表面的污物，入孵前進(jìn)行熏蒸或浸泡消毒。接種大腸桿菌滅活疫苗可以有效地預(yù)防本病的發(fā)生。由于大腸桿菌的血清型多且比較復(fù)雜，在生產(chǎn)中應(yīng)考慮使用當(dāng)?shù)胤蛛x株制備滅活的自家苗或多價(jià)疫苗免疫預(yù)防。

大腸桿菌耐藥譜很廣，而且易產(chǎn)生或獲得耐藥性，因此在生產(chǎn)中使用藥物進(jìn)行預(yù)防和治療時，要定期更換藥物或幾種藥物交替應(yīng)用。最有效的方法是根據(jù)分離細(xì)菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果來選用有效的藥物進(jìn)行治療。

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