青杄生長(zhǎng)素抑制蛋白基因PwARP-1的克隆及表達(dá)分析

孫帆 羅朝兵 周燕妮 張凌云

（北京林業(yè)大學(xué)林學(xué)院 森林培育與保護(hù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100083）

青杄生長(zhǎng)素抑制蛋白基因PwARP-1的克隆及表達(dá)分析

孫帆 羅朝兵 周燕妮 張凌云

（北京林業(yè)大學(xué)林學(xué)院 森林培育與保護(hù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100083）

從青杄的cDNA文庫(kù)中篩選出一個(gè)生長(zhǎng)素抑制蛋白基因PwARP-1（Auxin-repressed protein 1），并通過(guò)RACE-PCR技術(shù)獲得PwARP-1 cDNA全長(zhǎng)。生物信息學(xué)分析顯示，PwARP-1基因編碼155個(gè)氨基酸殘基的蛋白，分子量為17.1 kD，理論等電點(diǎn)為10.07，富含無(wú)規(guī)則卷曲。以多年生青杄和青杄幼苗為研究材料，通過(guò)RT-qPCR技術(shù)檢測(cè)PwARP-1的組織特異性表達(dá)、激素的響應(yīng)模式及種子萌發(fā)過(guò)程中的表達(dá)量模式。結(jié)果表明，PwARP-1在青杄各個(gè)組織中均有表達(dá)，在花粉中表達(dá)量最高，在種子中的表達(dá)量最低。PwARP-1在種子萌發(fā)過(guò)程中表達(dá)量呈先上升，在第10天表達(dá)量達(dá)到最高后開始下降。進(jìn)一步試驗(yàn)表明，PwARP-1能響應(yīng)多種逆境脅迫和激素處理。在赤霉素（GA）和生長(zhǎng)素（IAA）處理下PwARP-1的表達(dá)量被抑制。在干旱脅迫和油菜素內(nèi)酯（BR）激素處理下PwARP-1的表達(dá)量逐漸升高，而在在鹽脅迫、茉莉酸甲酯（MeJA）和脫落酸（ABA）等激素處理下PwARP-1的表達(dá)量先下降后上升。這些結(jié)果顯示PwARP-1可能參與了植物種子萌發(fā)、多種逆境脅迫和激素響應(yīng)過(guò)程。

青杄 生長(zhǎng)素抑制蛋白 表達(dá)分析 植物激素

生長(zhǎng)素在植物的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中具有重要的作用［1］。生長(zhǎng)素在胚胎形成、細(xì)胞分裂伸長(zhǎng)以及分化，側(cè)根形成和頂端優(yōu)勢(shì)的形成等過(guò)程中發(fā)揮重要的功能［2，3］。生長(zhǎng)素調(diào)節(jié)下游基因表達(dá)的機(jī)理十分復(fù)雜，近年來(lái)生長(zhǎng)素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑研究取得了較大的成果。

在生長(zhǎng)素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中，主要有兩類基因發(fā)揮了功能，包括生長(zhǎng)素素結(jié)合蛋白（Auxin binding proteins，ABFs）以及受生長(zhǎng)素調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子。生長(zhǎng)素結(jié)合蛋白和生長(zhǎng)素的結(jié)合，通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期參與了細(xì)胞的分裂和擴(kuò)增［4，5］。在生長(zhǎng)素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中有多種家族的基因（Auxin responsive gene）參與其中，包括生長(zhǎng)素響應(yīng)因子（Auxin response

factors，ARFs）和AUX/ IAA轉(zhuǎn)錄因子等。ARFsN端DNA結(jié)合域識(shí)別受生長(zhǎng)素調(diào)節(jié)基因啟動(dòng)子中的生長(zhǎng)素響應(yīng)元件（Auxin responding elements）而調(diào)節(jié)下游基因的表達(dá)［6-8］。AUX/ IAA是一種可被泛素蛋白酶體途徑（ubiquitin-proteasome pathway）降解，壽命很短暫的一種蛋白［9］。在較低的生長(zhǎng)素濃度下，AUX/ IAA不與DNA直接作用，而是和ARFs形成異源二聚體，阻止ARFs調(diào)控下游基因的表達(dá)［10］。在較高的生長(zhǎng)素濃度下，泛素化的AUX/ IAA被COP9信號(hào)（COP9 signalosome）招募到26S 蛋白酶體中水解，從而釋放出ARFs引起下游基因的表達(dá)［11］。

在植物的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，生長(zhǎng)素抑制蛋白（Auxin repressed protein）具有重要的功能。在草莓中，隨著果實(shí)的生長(zhǎng)ARP基因SAR5的表達(dá)被生長(zhǎng)素抑制，而且抑制作用和果實(shí)的成熟呈現(xiàn)正相關(guān)［12］。在煙草花粉成熟的過(guò)程中，煙草ARP基因表達(dá)量上升，但在花粉萌發(fā)的過(guò)程中表達(dá)受到抑制［13］。在之前的文獻(xiàn)報(bào)道中，ARP基因使植物停止生長(zhǎng)，維持休眠的狀態(tài)。但是ARP基因?qū)е轮参镄菝叩姆肿訖C(jī)制所知甚少。

青杄（Picea wilsoniiMast.），又名青皮云杉，為松科（Pinaceae）云杉屬（Picea）常綠喬木，是我國(guó)特有的樹種。青杄分布較廣，是一種優(yōu)良的用材和園林綠化樹種，對(duì)逆境環(huán)境具有較強(qiáng)的抵抗能力［14］。本研究在實(shí)驗(yàn)室前期研究的基礎(chǔ)上通過(guò)RACE-PCR技術(shù)從青杄 cDNA文庫(kù)中克隆到一個(gè)生長(zhǎng)素抑制蛋白基因，獲得其全長(zhǎng)cDNA序列，通過(guò)生物信息學(xué)分析命名為PwARP-1；根據(jù)其核酸序列推導(dǎo)出其氨基酸序列，通過(guò)生物信息學(xué)軟件進(jìn)行蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)。利用RT-qPCR技術(shù)測(cè)定PwARP-1在不同組織、種子萌發(fā)和不同激素逆境的響應(yīng)過(guò)程中表達(dá)量的變化。本試驗(yàn)旨在為研究生長(zhǎng)素抑制蛋白ARP-1在林木生長(zhǎng)發(fā)育和抗逆過(guò)程中的功能，及林木遺傳育種和林木抗逆基因的篩選提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 植物材料和培養(yǎng)條件 組織特異性表達(dá)試驗(yàn)參考李長(zhǎng)江等試驗(yàn)方法［15］，使用3年苗齡青杄幼苗根、莖及針葉和成年青杄的花粉及種子，青杄種子與花粉采集于中國(guó)科學(xué)院北京植物園。種子春化后播于濾紙上，保持濾紙濕潤(rùn)。種子萌發(fā)后移苗至培養(yǎng)基質(zhì)中。青杄幼苗培養(yǎng)于室溫，空氣濕度50%，光周期為16 h光照，8 h黑暗的溫室，培養(yǎng)基質(zhì)為營(yíng)養(yǎng)土和蛭石按1∶1混合，每周使用自來(lái)水充分澆灌一次。植物材料經(jīng)處理后液氮速凍于-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 試驗(yàn)試劑 青杄cDNA文庫(kù)載體為pDONR222購(gòu)自Invitrogen公司?？寺≥d體為pEASY-T1，購(gòu)自Transgene公司。PCR Taq Mix、DNA Maker（DL2000）、熒 光 定 量PCR試 劑 盒（SYBR Green SuperReal Premix）和RNA提取試劑盒（RNAprep Pure Plant Kit）購(gòu)自天根（北京）生化科技有限公司，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Revert AidTMFirst Strand cDNA Synthesis Kit）購(gòu)自Fermentas公司。所用激素購(gòu)自Sigma公司。其他試劑購(gòu)自AMRESCO公司。

1.2 方法

1.2.1 RACE-PCR 獲取目的基因PwARP-1的全長(zhǎng)以青杄cDNA文庫(kù)為模板［16］，從載體pDONR222接頭序列和目的基因的EST序列設(shè)計(jì)引物，使用引物5-F和5-R擴(kuò)增5'方向，使用3-F和3-R擴(kuò)增出3'方向的序列。5-F：CTGTTCGTTGCAACAAATTG A，5-R：TGGCAGAATTAGTAATAGTTG；3-F：AGTAATAAGTACAAAAATAAC，3-R：T TAAACAACGTTGCTTGTCCA。

1.2.2 生物信息學(xué)分析 根據(jù)PwARP-1cDNA全長(zhǎng)序列，利用DNAMAN推導(dǎo)出PwARP-1的開放閱讀框確定其蛋白氨基酸序列，運(yùn)用clustalx軟件和DNAMAN軟件多序列比對(duì)，利用MEGA5.0軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，構(gòu)樹方法為鄰連法（Neighbor-joini ng），bootstap 檢測(cè)為1 000次。利用Expasy中的Compute pI/Mw工具來(lái)計(jì)算蛋白的理論等電點(diǎn)與分子量；利用Prot- Scale工（http：//web.expasy.org/prot scale/）進(jìn)行疏水性分析；利用NCBI的保守域數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/cdd/）對(duì)目的基因的結(jié)構(gòu)域進(jìn)行預(yù)測(cè)；利用GOR4（http：//npsa-pbil. ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automa t.pl?page=npsa_gor4.html）進(jìn)行蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)。

1.2.3 激素和脅迫處理 激素和脅迫試驗(yàn)參考Li等［17］處理方法，將處理的激素處理時(shí)間和濃度加以調(diào)整。具體處理方法如下：將8周苗齡的青杄幼苗根浸入激素溶液分別處理3、6和12 h，以水為對(duì)照。試驗(yàn)中使用的激素包括ABA、IAA、GA、MeJA、SA、Br和Eth，濃度均為100 nmol/ L。鹽脅迫試驗(yàn)中，使用100 nmol/ L的NaCl溶液模擬鹽脅迫。干旱脅迫試驗(yàn)中，將8周苗齡的青杄幼苗干旱處理20 d，以正常澆水處理的青杄幼苗為對(duì)照。處理后的青杄幼苗液氮速凍，于-80℃保存?zhèn)溆?。用于該基因在不同外源激素和脅迫的響應(yīng)分析。

1.2.4 種子萌發(fā)試驗(yàn) 參考李長(zhǎng)江等［15］試驗(yàn)方法將青杄種子春化1個(gè)月后，放置于濾紙上，保持濾紙濕潤(rùn)，在室溫條件（25℃）下進(jìn)行萌發(fā)試驗(yàn)。從種子放置于濕潤(rùn)的濾紙上的第1天開始取樣，每隔1 d取1次樣，每次取樣后液氮速凍，并于-80℃保存?zhèn)溆?，用于該基因在種子不同萌發(fā)時(shí)期表達(dá)量分析。

1.2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析 通過(guò)艾德來(lái)公司植物RNA提取試劑盒提取青杄各個(gè)器官總RNA，利用Fermentas公司的反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成PwARP-1的第一鏈cDNA。以青杄EF1-α［18］為內(nèi)參基因，根據(jù)PwARP-1的CDS序列設(shè)計(jì)特異性引物。F：CTCAGTTCTTATGG AGGA；R：GCATTCACAA CAATGTCA。利用天根公司的熒光定量PCR試劑盒在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀上（ABI Step One Plus）進(jìn)行RT-qPCR試驗(yàn)，分析PwARP-1組織特異性表達(dá)、不同激素和逆境脅迫的響應(yīng)模式。

2 結(jié)果

2.1PwARP-1的克隆

PwARP-1的全長(zhǎng)cDNA序列共有956 bp，在第12 bp處發(fā)現(xiàn)起始密碼子ATG，在476 bp處發(fā)現(xiàn)終止密碼子TGA，共編碼155個(gè)氨基酸殘基。3'非編碼區(qū)包含477 bp，在序列末端發(fā)現(xiàn)Poly（A）21尾巴（圖1-A）。

圖1 PwARP-1的全長(zhǎng)序列和氨基酸序列

2.2 生物信息學(xué)分析

2.2.1 理化性質(zhì)分析 利用Protpapram工具分析，PwARP-1分子量為17.1 kD，理論等電點(diǎn)為10.07。預(yù)測(cè)的分子式為C747H1215N223O227S5。PwARP-1蛋白中的氨基酸以絲氨酸（Ser）含量最多，為12.3%，其次精氨酸（Arg）為9.7%，丙氨酸（Ala）為9%，。

不穩(wěn)定系數(shù)為69.33，表明PwARP-1狀態(tài)不穩(wěn)定。疏水性分析結(jié)果顯示其疏水性最大值為1.244，親水峰最高是-3.122，平均疏水性為-0.610，顯示PwARP-1是一個(gè)親水性蛋白質(zhì)（圖 2-A）。Foldindex固有無(wú)序化分析顯示，PwARP-1蛋白無(wú)序化較大，推測(cè)目的蛋白在生理環(huán)境下動(dòng)態(tài)活性較高（圖 2-B）。通過(guò)TMHMM工具對(duì)PwARP-1蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)分析，未發(fā)現(xiàn)含有跨膜結(jié)構(gòu)。

圖2 PwARP-1的理化性質(zhì)分析

2.2.2 多序列比對(duì)及系統(tǒng)發(fā)育樹分析 運(yùn)用NCBI的BLAST工具檢索PwARP-1的同源基因，發(fā)現(xiàn)白云杉（Picea glauca）、毛果楊（Populus trichocarpa）、蘋果（Malusx domestica）和擬南芥（Arabidopsis thaliana）等物種中的同源基因（表 1）。利用ClustalX軟件對(duì)PwARP-1及其同源基因的氨基酸序列多序列比對(duì)后發(fā)現(xiàn)ARP家族基因的在N端和C端比較保守（圖3）。結(jié)合軟件Mega5.0構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果（圖4-A）發(fā)現(xiàn)，在所比較的同源基因中，PwARP-1和PsDAAP-1（Dormancy/ Auxin association protein） 聚為一簇，親緣關(guān)系最近。

表1 PwARP-1的同源基因

2.2.3 二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè) 利用GOR4對(duì)PwARP-1的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)后發(fā)現(xiàn)，PwARP-1含有無(wú)規(guī)則卷曲（58.71%）、α-螺旋（32.26%）和和延伸鏈（9.03%）。無(wú)規(guī)則卷曲含量在整個(gè)二級(jí)結(jié)構(gòu)中最高（圖 4-B，4-C）。利用NCBI網(wǎng)站的保守域數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)，結(jié)果表明PwARP-1含有一個(gè)生長(zhǎng)素抑制蛋白家族（Auxinrepressed superfamily）的保守域，E值2.03e-13。

2.3PwARP-1的表達(dá)分析

2.3.1PwARP-1的組織表達(dá)特異性分析 分別提取3年生青杄幼苗根、莖及針葉和成年青杄種子及花粉的RNA，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證RNA提取質(zhì)量良好，28S與18S條帶清晰，適合后續(xù)的逆轉(zhuǎn)錄以及RT-qPCR試驗(yàn)。RT-qPCR結(jié)果（圖 5）分析顯示，PwARP-1在各個(gè)組織中均有表達(dá)，但在花粉中的表達(dá)量最高，依次為根、針葉、莖和種子。

2.3.2PwARP-1種子萌發(fā)過(guò)程中表達(dá)分析 提取不同萌發(fā)天數(shù)的青杄種子RNA，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證RNA提取質(zhì)量良好，28S與18S條帶清晰，可以進(jìn)行后續(xù)的試驗(yàn)。RT-qPCR結(jié)果（圖6）顯示，PwARP-1表達(dá)量隨著種子的萌發(fā)呈現(xiàn)先增加后下降的趨勢(shì)。種子萌發(fā)早期，PwARP-1表達(dá)量開始上升，在第10天表達(dá)量達(dá)到最高后，開始下降。

2.3.3PwARP-1對(duì)不同激素和非生物脅迫的響應(yīng)試驗(yàn) 相對(duì)于對(duì)照，在100 nmol/ L的IAA處理6 h和12 h后，PwARP-1的表達(dá)量被明顯的抑制。在100 nmol/ L GA和Eth的處理下PwARP-1的表達(dá)量逐漸下降。在100 nmol/ LABA、MeJA和SA分別處理后，

PwARP-1的表達(dá)量先下降，在6 h降到最低后上升。ABA和SA處理12 h后PwARP-1表達(dá)量和處理3 h表達(dá)量差異不顯著。MeJA處理12 h后PwARP-1的表達(dá)量有所上升，但和處理3 h的表達(dá)量相比差異顯著。在100 nmol/L的BR處理下，PwARP-1的表達(dá)量逐漸上升（圖 7-A）。

圖3 不同物種ARP蛋白多序列比對(duì)

圖4 青杄PwARP-1進(jìn)化樹分析和二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

利用RT-qPCR測(cè)定PwAPR-1的表達(dá)量變化。以正常澆水的青杄幼苗為對(duì)照（Mock），將8周苗

齡的青杄幼苗干旱處理20 d后，發(fā)現(xiàn)PwARP-1的表達(dá)量上升（圖7-B）。100 nmol/ L NaCl處理青杄幼苗3 h、6 h和12 h后以水（Mock）為對(duì)照，檢測(cè)PwARP-1的表達(dá)量后發(fā)現(xiàn)PwARP-1的表達(dá)量先下降而后上升，處理 12 h表達(dá)量和處理3 h的表達(dá)量相比差異不顯著。

圖5 PwARP-1組織特異性表達(dá)分析

圖 6 PwARP-1在種子萌發(fā)過(guò)程中的表達(dá)分析

圖7 PwARP-1在不同外源激素和脅迫處理下的表達(dá)量

3 討論

本研究通過(guò)RACE-PCR方法成功獲得一個(gè)分子伴侶基因PwARP-1的cDNA全長(zhǎng)序列。以青杄cDNA文庫(kù)為模板的RACE 試驗(yàn)是基于 EST 保守序列和 pDONR-222載體上特異的引物進(jìn)行的，cDNA全長(zhǎng)是由PwARP-1的末端序列和 EST 序列進(jìn)行拼接而來(lái)，進(jìn)而獲得基因cDNA全長(zhǎng)。相比之下，比傳統(tǒng)的通過(guò)同源植物保守序列設(shè)計(jì)兼并引物的方法更加便捷［18］。經(jīng)過(guò)生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，PwARP-1基因編碼了一個(gè)包含155個(gè)氨基酸的蛋白，分子量約為17.1 kD，二級(jí)結(jié)構(gòu)中無(wú)規(guī)則卷曲所占比重最大，并NCBI保守域數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)PwARP-1含有一個(gè)Auxin-repressed家族保守域。多序列比對(duì)以及構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果顯示，PwARP-1和PsDAAP-1聚為一簇，顯示青杄（Picea wilsonii）的ARP-1蛋白和北美云杉（Picea sitchensis）DAAP蛋白的親緣關(guān)系最近。DAAP-1蛋白是一個(gè)休眠和生長(zhǎng)素相關(guān)的蛋白，因此推測(cè)PwARP-1可能與植物的休眠相關(guān)。

組織特異性表達(dá)試驗(yàn)顯示，PwARP-1在花粉中的表達(dá)量最高，依次為根、針葉、莖和種子。因此推測(cè)PwARP-1在花粉的休眠和萌發(fā)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。種子萌發(fā)過(guò)程中，PwARP-1表達(dá)量在萌發(fā)前期呈上升趨勢(shì)，在第10天表達(dá)量達(dá)到最高值后開始下降。PwARP-1在青杄種子萌發(fā)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。在進(jìn)一步的激素響應(yīng)試驗(yàn)中，在100 nmol/ L的IAA處理6 h和12 h后，PwARP-1的表達(dá)量被明顯的抑制。但有趣的是，并非所有的ARP家族基因都會(huì)被生長(zhǎng)素抑制。在牛奶子（Elaeagnus umbellata）中發(fā)現(xiàn)的EuNOD-ARP1是ARP家族成員，但是生長(zhǎng)素處理葉片后EuNOD-ARP1的表達(dá)量升高，顯示出ARP家族基因功能的多樣性［19］。在100 nmol/L GA和Eth的處理下PwARP-1的表達(dá)量逐漸下降。但在100 nmol/ L的ABA、MeJA、SA和NaCl分別處理后，PwARP-1的表達(dá)量先下降，在處理6 h后降到最低后上升。處理12 h后PwARP-1的表達(dá)量恢復(fù)或者部分恢復(fù)到3 h表達(dá)水平，推測(cè)PwARP-1在上述激素處理和鹽脅迫早期發(fā)揮作用。在100 nmol/ L的BR處理下，PwARP-1的表達(dá)量逐漸上升。在干旱脅迫處理后，PwAPR-1的表達(dá)量升高。Hwang等［20］研

究發(fā)現(xiàn)，白菜（Brassica rapa）在干旱、鹽、熱擊和冷害處理下BrARP-1的表達(dá)量升高。在之前的文獻(xiàn)報(bào)道中，非生物脅迫處理后，ARP基因會(huì)被誘導(dǎo)上升［21］。在本試驗(yàn)中PwARP-1對(duì)多種激素和非生物脅迫處理都有不同響應(yīng)，顯示其在植物的生長(zhǎng)發(fā)育和脅迫響應(yīng)過(guò)程中發(fā)揮多種功能，尤其是PwARP-1在種子和花粉萌發(fā)過(guò)程以及激素早期響應(yīng)過(guò)程中的功能需要更深入的研究。

4 結(jié)論

從青杄cDNA文庫(kù)中克隆生長(zhǎng)素抑制蛋白PwARP-1，含有155個(gè)氨基酸殘基，該蛋白分子量為17.1 kD，等電點(diǎn)為10.07，富含無(wú)規(guī)則卷曲。PwARP-1響應(yīng)多種激素和逆境處理。

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（責(zé)任編輯 李楠）

The Cloning and Expression Analysis of PwARP-1 in Picea wilsonii

Sun Fan Luo Chaobing Zhou Yanni Zhang Lingyu
（Key Laboratory of Forest Silviculture and Conservation of Ministry of Education，College of Forestry，Beijing Forestry University，Beijing 100083）

An auxin repressed protein gene PwARP-1 is cloned from Picea wilsonii. The full length cDNA of PwARP-1 is obtained by RACE-PCR assays based on the cDNA library of Picea wilsonii and EST fragment of PwARP-1. Bioinformatic tools are applied for the prediction of PwARP-1. PwARP-1 encodes a protein with 155 amino acids. The molecular weight is 17.1 kD and theoretical pI is 10.07 and the protein is rich in random coil. The tissue-specific expressions and the response to phytohormones of PwARP-1 were investigated by RT-qPCR assays. The tissue-specific expression assays suggested that the expression level in pollen was the highest among all tissues and the expression level in seed was the lowest. During seed germination, the expression of PwARP-1 was increased, peaked at the 10th day and then decreased. Furthermore, the expression of PwARP-1 was significantly inhibited by Auxin and Gibberellin. However, the expression level of PwARP-1 is up-regulated by Brassinolide and drought stress treatment. The expression level of PwARP-1 declined and then up-regulated under salt stress, methyl jasmonate, and abscisic acid treatments. These results indicate that PwARP-1 has a potential function in seed germination and responding to stresses and phytohormone treatments.

Picea wilsonii Auxin-repressed protein Expression analysis Phytohormone

2014-01-17

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（31270663），國(guó)家轉(zhuǎn)基因生物新品種培育科技重大專項(xiàng)（2013ZX08009003-002-004）

孫帆，男，碩士碩士生，研究方向：植物抗逆基因克隆和功能；Email：sunfan0041@126.com

張凌云，女，博士，碩士生導(dǎo)師；研究方向：植物生殖與逆境生理；E-mail:lyzhang73@sohu.com