不同類型消化道腫瘤患者化療前后T淋巴細(xì)胞亞群變化及其意義

彭潔雅 何雅軍 曾小丹

1.廣州市紅十字會(huì)醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東廣州510220；2.廣州醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)系，廣東廣州510182

不同類型消化道腫瘤患者化療前后T淋巴細(xì)胞亞群變化及其意義

彭潔雅1何雅軍1曾小丹2

1.廣州市紅十字會(huì)醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東廣州510220；2.廣州醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)系，廣東廣州510182

目的探討不同類型消化道腫瘤患者在化療前后T細(xì)胞亞群總T細(xì)胞（CD3+）、T輔助淋巴細(xì)胞（CD4+）、T抑制淋巴細(xì)胞（CD8+）、CD4+/CD8+比值的變化情況及臨床意義。方法應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析不同類型消化道腫瘤患者在化療前后及對(duì)照組CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞百分率和CD4+/CD8+比值。結(jié)果消化道腫瘤患者化療前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比例均低于對(duì)照組，CD8+高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；結(jié)腸癌和胃癌患者化療后CD3+、CD4+百分比較化療前均增高，CD8+百分比降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。直腸癌患者化療后CD3+百分比較化療前增高，CD8+百分比降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），CD4+、CD4+/CD8+比值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論通過檢測(cè)消化道腫瘤患者T淋巴細(xì)胞亞群化療前后的變化，對(duì)了解機(jī)體的免疫動(dòng)態(tài)有著重要的臨床意義。

消化道腫瘤；化療前后；T淋巴細(xì)胞亞群

T淋巴細(xì)胞是一種胸腺依賴性淋巴細(xì)胞，是構(gòu)成機(jī)體免疫防御系統(tǒng)的重要成分，隨著對(duì)腫瘤免疫機(jī)制的了解和腫瘤免疫治療的應(yīng)用，越來越多的細(xì)胞免疫檢測(cè)指標(biāo)被用來監(jiān)測(cè)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和判斷治療效果及預(yù)后，目前應(yīng)用較廣泛的是T細(xì)胞亞群的測(cè)定，對(duì)于判斷癌癥患者的免疫狀態(tài)具有重要的意義。T淋巴細(xì)胞包括兩個(gè)主要亞群（CD4和CD8）。在正常情況下，機(jī)體內(nèi)兩個(gè)T細(xì)胞亞群之間，保持一定的數(shù)量比例，維持平衡狀態(tài)。當(dāng)機(jī)體發(fā)生腫瘤時(shí)，該平衡狀態(tài)被破壞，嚴(yán)重影響兩個(gè)T細(xì)胞亞群之間的數(shù)量比例，導(dǎo)致機(jī)體免疫功能紊亂[1]。本研究通過總結(jié)各類消化道腫瘤患者化療前后T淋巴細(xì)胞亞群變化，探討各類消化道腫瘤患者化療前后免疫功能的變化。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2010年1月～2013年6月廣州市紅十字會(huì)醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）收治的各類消化道腫瘤患者在化療前1 d及化療后15 d均檢測(cè)T淋巴細(xì)胞含量的166例成人患者資料，其中，男108例，女58例，年齡46～82歲。相關(guān)腫瘤類型均得到病理學(xué)形態(tài)證實(shí)。胃癌21例，結(jié)腸癌100例，直腸癌45例。按《臨床病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》[2]中的消化道疾病診斷，經(jīng)每周期方案化療結(jié)束后15 d可經(jīng)相關(guān)檢驗(yàn)驗(yàn)證取得療效。另以30名正常人（來自我院體檢中心健康體檢者）作為對(duì)照組，其中，男16名，女14名，年齡19～74歲。

1.2 方法

各類消化道腫瘤患者在化療前1 d及化療后15 d均檢測(cè)T淋巴細(xì)胞含量。清晨空腹抽取靜脈血2 m L，EDTA-2K抗凝，取患者新鮮抗凝血標(biāo)本100μL，放入樣品測(cè)定管，加入相應(yīng)的熒光標(biāo)記單克隆抗體，振蕩混勻，室溫下避光孵育20～30 min，加入溶血素，溶血完畢后上機(jī)檢測(cè)。采用流式細(xì)胞儀BD Facs calibur，上機(jī)獲取10 000個(gè)淋巴細(xì)胞，對(duì)CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞的百分比進(jìn)行檢測(cè)分析。本次實(shí)驗(yàn)所有檢測(cè)實(shí)行全過程質(zhì)量控制。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、配對(duì)t檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 消化道腫瘤患者化療前后外周血T淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)（x±s）

表2 不同病理類型消化道腫瘤患者化療前后T細(xì)胞亞群比較（x±s）

2 結(jié)果

與對(duì)照組相比，消化道腫瘤患者化療前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比例均較低（P＜0.05），CD8+細(xì)胞百分比明顯升高（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。消化道腫瘤患者化療后CD3+、CD4+百分比和CD4+/CD8+比值較化療前均增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05），CD8+降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

不同病理類型的腫瘤患者化療前后T細(xì)胞亞群結(jié)果比較顯示，結(jié)腸癌和胃癌患者化療后CD3+、CD4+百分比較化療前均增高（P＜0.05），CD8+降低（P＜0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；直腸癌患者化療后CD3+百分比較化療前增高（P＜0.05），CD8+百分比降低（P＜0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，化療前后CD4+、CD4+/CD8+比值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

3 討論

腫瘤與免疫的關(guān)系復(fù)雜，免疫功能低下或抑制均有可能導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。外周血T細(xì)胞亞群是經(jīng)研究證實(shí)能較好反映機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài)的指標(biāo)。免疫學(xué)機(jī)制中，CD3+體現(xiàn)總細(xì)胞免疫狀態(tài)。CD4+稱為輔助性T淋巴細(xì)胞，和其他免疫細(xì)胞一起參與免疫應(yīng)答，以達(dá)到抗腫瘤作用。文獻(xiàn)報(bào)道[3-5]，CD3+、CD4+淋巴細(xì)胞減少會(huì)導(dǎo)致免疫功能低下。CD8+通過自身及抑制因子在免疫反應(yīng)中起負(fù)向作用，抑制CD4+細(xì)胞和B細(xì)胞功能，從而抑制抗體形成及細(xì)胞免疫反應(yīng)，CD8+細(xì)胞增多有利于腫瘤持續(xù)增長(zhǎng)，而在腫瘤發(fā)展過程中又可誘導(dǎo)和激發(fā)CD8+細(xì)胞，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤增殖。CD3+、CD4+細(xì)胞能促進(jìn)效應(yīng)細(xì)胞抗腫瘤作用，CD3+、CD8+細(xì)胞主要為抑制性T細(xì)胞，抑制機(jī)體免疫應(yīng)答。研究證實(shí)，在腫瘤或其他疾病進(jìn)展過程中，機(jī)體免疫功能常呈現(xiàn)紊亂，其中一個(gè)明顯表現(xiàn)為T淋巴細(xì)胞亞群在數(shù)量上和功能上發(fā)生改變[6-7]。在消化道腫瘤形成中，由于腫瘤細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生一些免疫抑制因子，使得CD4+減少，CD8+反應(yīng)性增多；同時(shí)，由于增多的CD8+細(xì)胞可能是以抑制性T細(xì)胞（TS）居多，這變相對(duì)CD4+細(xì)胞產(chǎn)生一定抑制作用，使CD4+/CD8+比值下降。正常生理狀態(tài)下，CD4+/ CD8+處于相對(duì)穩(wěn)定狀態(tài)，實(shí)現(xiàn)機(jī)體細(xì)胞免疫功能穩(wěn)定。若T細(xì)胞總數(shù)或CD4+/CD8+T細(xì)胞比值發(fā)生異常時(shí)，反映機(jī)體正常T細(xì)胞亞群狀態(tài)被打破，視為免疫調(diào)節(jié)紊亂，宿主免疫功能低下或受抑制，易發(fā)生腫瘤或自身免疫疾病，機(jī)體正常的免疫功能會(huì)發(fā)生變化，呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。

本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，消化道腫瘤患者化療前CD3+、CD4+百分比較低（P＜0.05），CD8+較對(duì)照組升高（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示腫瘤患者確實(shí)存在免疫功能低下表現(xiàn)，與國(guó)內(nèi)外報(bào)道相符[8-9]。而CD4+/CD8+比值明顯下降，說明消化道腫瘤患者體內(nèi)細(xì)胞免疫功能處于抑制狀態(tài)，對(duì)識(shí)別和殺傷癌變細(xì)胞的能力下降，引起機(jī)體免疫平衡狀態(tài)被打破?；熀驝D3+、CD4+較化療前有所增高（P＜0.01），趨于正常，化療后CD4+/CD8+比值較化療前增高（P＜0.05），與文獻(xiàn)報(bào)道相符[10-11]。提示消化道腫瘤患者體內(nèi)免疫功能有不同程度的恢復(fù)[12]。CD4+/CD8+比值用于反映患者淋巴系統(tǒng)的機(jī)能狀態(tài)，但目前對(duì)于腫瘤患者化療效果、淋巴細(xì)胞亞群以及CD4+/CD8+并沒有一個(gè)統(tǒng)一的參考標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)，不同腫瘤類型可導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞亞群發(fā)生不同程度的改變，在臨床中通過比較化療前后淋巴細(xì)胞亞群變化情況，客觀地反映機(jī)體的免疫狀況，判斷患者的病情進(jìn)展以及評(píng)價(jià)療效[13]。

本研究結(jié)果顯示，直腸癌CD4+在化療前后的變化不如結(jié)腸癌和胃癌CD4+在化療前后的變化明顯，說明直腸癌化療對(duì)CD4+的影響不顯著，這與部分文獻(xiàn)報(bào)道[14]不符。探究其原因，可能由于本次研究病例中有部分患者已接受多周期化療療程，患者細(xì)胞免疫功能逐漸減低，且細(xì)胞活化能力較前減低，同時(shí)或許與患者T淋巴細(xì)胞水平、年齡有關(guān)，更與其選擇的化療方案，如FOLFOX4（奧沙利鉑+5-氟尿嘧啶+亞葉酸鈣）、FOLFRI（伊立替康+5-氟尿嘧啶+亞葉酸鈣）或XELOX（奧沙利鉑+卡培他濱）等方案的不同、療程次數(shù)、療程長(zhǎng)短等因素有關(guān)。在不同病理類型的腫瘤患者中，化療后CD4+/CD8+比值雖有增高，但直腸癌和胃癌化療前和化療后CD4+/CD8+的變化差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），與部分文獻(xiàn)報(bào)道不符[15-16]。究其原因主要為CD4+化療前后變化值不明顯所造成的。另外，消化道腫瘤患者外周血總T細(xì)胞CD3+、CD4+和CD4+/ CD8+比值在化療后均高于化療前，提示化療改變了體內(nèi)的免疫狀態(tài)，而T淋巴細(xì)胞增高提示化療后腫瘤負(fù)荷減少，能一定程度恢復(fù)細(xì)胞免疫調(diào)控能力。

綜上所述，通過檢測(cè)消化道腫瘤患者T淋巴細(xì)胞亞群化療前后的變化，對(duì)了解機(jī)體的免疫動(dòng)態(tài)，有著重要的臨床意義。同時(shí)，也為免疫調(diào)節(jié)治療和免疫增強(qiáng)治療提供理論依據(jù)。

[1]Baue AE，F(xiàn)aist E，F(xiàn)ry DE，et al.Multiple organ failure[M]. New York：Springer Verlag，2000：3213.

[2]張之南，沈悌.臨床病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)[M].北京：科學(xué)出版社，2007：103-121.

[3]黃輝，俞紅，林云璐，等.CD4+T細(xì)胞的抗瘤作用[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)：免疫學(xué)分冊(cè)，2000，23（1）：51.

[4]陳派強(qiáng).外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)在惡性腫瘤中的價(jià)值[J].醫(yī)藥論壇雜志，2012，33（4）：118-119.

[5]楊小猛，趙丹，蘇卓娃.CD30在強(qiáng)直性脊柱炎患者外周血T細(xì)胞亞群的表達(dá)及意義[J].重慶醫(yī)學(xué)，2010，39（20）：2763-2765.

[6]邵明海，王建華，丁維軍，等.惡性腫瘤患者外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的檢測(cè)及其臨床意義[J].現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué)，2009，21（2）：142-143.

[7]張國(guó)慶，趙宏，溫新宇，等.大腸癌患者化療前后淋巴細(xì)胞亞群變化[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，35（2）：155-160.

[8]馮利得.外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)在惡性腫瘤中的價(jià)值[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2012，18（3）：111-113.

[9]D'Acquisto F，Crompton T.CD3+CD4+CD8+（double negative）T cells：savioursorvillainsof the immune response?[J]. Biochem Pharmacol，2011，82（4）：333-340.

[10]王英麗，張陽(yáng)，劉力華，等.手術(shù)前后卵巢癌患者外周血T細(xì)胞亞群及CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)圖書，2009，30（3）：4363.

[11]方治.惡性腫瘤患者外周血T細(xì)胞CD8+CD28+、CD8+CD28+及CD4+CD25+的表達(dá)及意義[J].現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué)，2011，23（6）：660-661.

[12]Kim EY，Juvet SC，Zhang L.Regulatory CD4（-）CD8（-）double negative T cells[J].Methods Mol Biol，2011，677：85-98.

[13]孫林，溫江濤，劉海紅.乳腺癌患者外周血淋巴細(xì)胞及NK細(xì)的檢測(cè)及其臨床意義[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2006，14（9）：1069.

[14]查兵兵，劉軍.Graves病患者131I治療前后CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的變化[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志，2012，28（11）：1032-1035.

[15]段云，徐蓉生，武鴻文，等.骨轉(zhuǎn)移瘤患者89SrCl2治療前后外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及Foxp3mRNA的表達(dá)變化[J].四川大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2011，42（5）：649-652.

[16]唐述森，王海英，郝桂蘭，等.骨惡性腫瘤化療前后外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg細(xì)胞的變化[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2010，26（12）：2162-2164.

Changes of lym phocyte subsets and its significance in patients w ith digestive tract tumor before and after chemotherapy

PENG Jieya1HE Yajun1ZENG Xiaodan2
1.Department of Clinical Laboratory,Guangzhou Red Cross Hospital,Guangdong Province,Guangzhou 510220,China; 2.Laboratory Medical Science,Guangzhou Medical University,Guangdong Province,Guangzhou 510182,China

Objective To investigate the T cell subsets(CD3+)T cells,T lymphocytes(CD4+),T lymphocytes(CD8+)and CD4+/CD8+ratio digestive tract tumor before and after chemotherapy changes and clinical significance of patients with digestive tract tumor before and after chemotherapy.Methods Flow cytometry was used to analyze the CD3+,CD4+, CD8+cell percentage and the ratio of CD4+/CD8+in different types of gastrointestinal cancer patients before and after chemotherapy and the healthy(control group).Resu lts Compared with the control group,the former chemotherapy CD3+,CD4+,CD4+/CD8+ratio of gastrointestinal cancer patients were lower than that of control group(P＜0.05),and CD8+was higher than the control group(P＜0.05),the differenceswere statistically significant.Colon cancer and stomach cancer patients after chemotherapy CD3+,CD4+percentages were higher than before chemotherapy(P＜0.05),the percentage of CD8+was lower(P＜0.05),the differenceswere statistically significant.Patients with rectal cancer after chemotherapy CD3+percentagewas higher before chemotherapy(P＜0.05),the percentage of CD8+was lower(P＜0. 05),the differences were statistically significant;while CD4+and CD4+/CD8+ratio had no statistical significance(P＞0.05).Conclusion For the digestive tract tumor,detecting the changes of T lymphocyte subsets to understand the immune dynamic,in determining the clinical curative effect,and assess the prognosismonitoring,etc.,all have very important clinical significance.

Digestive tract tumor;Before and after chemotherapy;T-lymphocyte subsets

R734

A

1673-7210（2014）08（a）-0040-03

2014-04-03本文編輯：程銘）

廣州市紅十字會(huì)醫(yī)院院內(nèi)課題（編號(hào)2013-34）。