鼻炎通竅噴霧劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

盛蓉，周立，張勤修，呼梅，蒲志強(qiáng)

·炮制制劑·

鼻炎通竅噴霧劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

盛蓉1，周立1，張勤修1，呼梅1，蒲志強(qiáng)2

目的：建立鼻炎通竅噴霧劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法對麻黃、黃芩、白芷進(jìn)行定性鑒別；用高效液相色譜法測定鹽酸麻黃堿和黃芩苷的含量。結(jié)果：麻黃、黃芩、白芷的薄層色譜圖斑點(diǎn)清晰，陰性無干擾。鹽酸麻黃堿進(jìn)樣量在0.0798 μg～1.1172 μg 濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，平均回收率為97.26%，RSD為2.33%（n=6）；黃芩苷進(jìn)樣量在0.1364 μg～2.046 μg 濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，平均回收率為98.15%，RSD值為2.03%(n=6)。結(jié)論：所用方法專屬性強(qiáng)，靈敏度高，重現(xiàn)性好，可用于鼻炎通竅噴霧劑的質(zhì)量控制。

]鼻炎通竅噴霧劑；薄層色譜法；高效液相色譜法；麻黃堿；黃芩苷

鼻炎通竅噴霧劑為我院開發(fā)的新醫(yī)院制劑，該方由麻黃、黃芩、白芷、辛夷等中藥組成，具有通利鼻竅的功效，臨床用于鼻塞不通、流黃稠涕、急慢性鼻炎、副鼻竇炎。為有效控制該制劑質(zhì)量，參考藥典[1]及相關(guān)文獻(xiàn)[2～10]，建立了麻黃、黃芩、白芷的薄層色譜鑒別方法，并對方中君藥麻黃和黃芩制定了高效液相色譜測定鹽酸麻黃堿和黃芩苷含量的方法[11～14]，所用方法簡便，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，可用于鼻炎通竅噴霧劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

HP-1100型高效液相色譜儀（美國惠普），四元泵，DAD檢測器，HP化學(xué)工作站；AS10200超聲波清洗器（220V，280W），電子分析天平BP211D（德國Sartorius）。

對照品：鹽酸麻黃堿 (171241-200506)、黃芩苷（110715-200514）、黃芩素（111595-200402）、漢黃芩素（1514-200202）、歐前胡素 (110826-200712)、異歐前胡素（110827-200407 ）；對照藥材：麻黃（121051-200704）、黃芩（120955-200607）、白芷（120945-200707），均由中國藥品生物制品檢定所提供。乙腈、甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純，硅膠G、硅膠H（青島海洋化工廠）；鼻炎通竅噴霧劑3批(100601、100602、100603)及陰性樣品均由本院制劑室提供。

2 薄層色譜鑒別

2.1 麻黃

取本品10 mL，加濃氨試液1 mL，用乙醚振搖提取2次，每次10 mL，合并乙醚液，加鹽酸乙醇溶液（1→20）1 mL于乙醚液中，搖勻，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取麻黃對照藥材1 g，加濃氨試液數(shù)滴，再加三氯甲烷10 mL，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL充分振搖，濾過，取濾液作為對照藥材溶液。另取鹽酸麻黃堿對照品適量，加甲醇制成每1 mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。取缺麻黃陰性樣品按供試品溶液的制備方法制備，作為陰性樣品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一以0.2%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－濃氨試液(20:5:0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性均無干擾，薄層色譜見圖1。

2.2 黃芩

取本品10 mL，加鹽酸調(diào)節(jié)pH至3，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次10 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取黃芩對照藥材1 g，加乙酸乙酯－甲醇（3:1）的混合溶液30 mL，加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，取上清液作為對照藥材溶液。另取黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg、0.5 mg、0.5 mg的對照品溶液。取缺黃芩陰性樣品按供試品溶液的制備方法制備，作為陰性樣品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯－乙酸乙酯－甲醇－甲酸(10:3:1:2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同的暗斑，陰性均無干擾，薄層色譜見圖1。

2.3 白芷

取本品10 mL，加乙醚振搖提取2次，每次10 mL，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液。另取白芷對照藥材0.5 g，加乙醚10 mL，浸泡1小時，時時振搖，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為對照藥材溶液。另取歐前胡素、異歐前胡素對照品，加乙酸乙酯制成每1 mL各含1 mg的混合溶液，作為對照品溶液。取缺白芷陰性樣品按供試品溶液的制備方法制備，作為陰性樣品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一以0.2%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(30-60℃)－乙醚 (3:2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色熒光斑點(diǎn)，陰性均無干擾，薄層色譜見圖1。

圖1 麻黃、黃芩、白芷薄層鑒別

3 鹽酸麻黃堿含量測定

3.1 色譜條件

色譜柱：迪馬柱Diamonsil-C18(250×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈:0.1%磷酸（含0.1%的三乙胺）（3:97）；流速：1 mL．min-1；檢測波長210 nm；柱溫30℃。

3.2 溶液制備

3.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸麻黃堿對照品7.98 mg，加甲醇制成每1 mL含鹽酸麻黃堿159.6 μg的溶液，搖勻，作為對照品溶液。

3.2.2 供試品溶液制備 精密量取樣品液2 mL ，置25 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

3.2.3 陰性樣品溶液的制備 取缺麻黃陰性樣品溶液2 mL，按3.2.2“供試品溶液制備”方法制備，作為陰性樣品溶液。

3.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取上述對照品、陰性樣品和供試品溶液各5 μL，照“3.1”項(xiàng)下的色譜條件注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖2。結(jié)果陰性無干擾，待測峰與其他峰分離度良好。理論塔板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)不低于3000，分離度大于1.5。

圖2 鹽酸麻黃堿色譜圖

3.4 方法學(xué)考察

3.4.1 線性關(guān)系考察 取對照品溶液，按照“3.1”項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣0.5、1、3、5、7 μL，記錄色譜圖，以鹽酸麻黃堿的進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：Y=1992.10165X-1.62788（R=0.9999），結(jié)果表明鹽酸麻黃堿進(jìn)樣量在0.0798 μg～1.1172 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.4.2 精密度試驗(yàn) 取對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次5 μL，測定，峰面積的RSD為1.87% (n=6)，表明方法精密度良好。

3.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批供試品溶液，分別在0、1、2、4、8 h依次進(jìn)樣，鹽酸麻黃堿峰面積的RSD為1.83%(n=5)，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

3.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品(批號100601) 2 mL，共6份，按供試品溶液制備方法制備樣品，測定，結(jié)果鹽酸麻黃堿的平均含量為 1.011 mg．mL-1，RSD值為1.94%(n=6)。

3.4.5 加樣回收試驗(yàn) 精密量取已知含量的樣品(批號100601) 1 mL，共6份，至25 mL量瓶中，分別精密加入鹽酸麻黃堿對照品溶液(0.1596 mg．mL-1)5 mL，用甲醇定容至刻度，搖勻，按上述色譜條件測定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 鹽酸麻黃堿加樣回收試驗(yàn)

結(jié)果平均回收率為 97.26 % ，回收率在 95 %～105 %之間，RSD 值為2.33 % , 表明本法回收率良好。

3.4.6 樣品測定 取3批鼻炎通竅噴霧劑樣品，按供試品溶液制備方法制備樣品，在上述色譜條件下進(jìn)行測定，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定（n=2）

4 黃芩苷含量測定

4.1 色譜條件

色譜柱：依利特Hypersil ODS2（150×4.6mm， 5μm）；流動相：甲醇：0.2%磷酸（42:58）；流速1 mL．min-1，檢測波長280 nm，柱溫25℃。

4.2 溶液制備

4.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對照品3.41 mg，加甲醇制成每1 mL含136.4 μg的溶液，搖勻，作為對照品溶液。

4.2.2 供試品溶液制備 精密量取樣品液2 mL ，置50 mL量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

4.2.3 陰性樣品溶液的制備 取缺黃芩陰性樣品溶液1 mL，按4.2.2“供試品溶液制備”方法制備，作為陰性樣品溶液。

4.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取上述對照品、陰性樣品和供試品溶液，照“4.1”項(xiàng)下的色譜條件注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖3。結(jié)果陰性無干擾，待測峰與其他峰分離度良好。理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算不低于2500，分離度＞1.5。

圖3 黃芩苷色譜圖

4.4 方法學(xué)考察

4.4.1 線性關(guān)系考察 取對照品溶液，分別進(jìn)樣1、2、5、10、15 μL記錄色譜圖，以黃芩苷的進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=2417X+10.285，r=0.9999，結(jié)果表明，進(jìn)樣量在0.1364 μg～2.046 μg范圍內(nèi)，黃芩苷峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。

4.4.2 精密度試驗(yàn) 取對照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次測定，結(jié)果峰面積的RSD為1.92% (n=6)，表明方法精密度良好。

4.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批供試品溶液，分別在0、1、 2、4、8 h依次進(jìn)樣，黃芩苷峰面積的RSD為1.81%(n=5)，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

4.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品(批號100601)6份，每份2 mL，按供試品溶液制備方法制備樣品，測定，結(jié)果黃芩苷的平均含量為12.54 mg．mL-1，RSD值為1.89%(n=6)。

4.4.5 加樣回收試驗(yàn) 精密量取已知含量的樣品(批號100601) 1 mL，共6份，至50 mL量瓶中，分別精密加入黃芩苷對照品溶液(2.342 mg．mL-1)5 mL，按供試品制備方法制樣，按上述色譜條件測定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表3。

表3 黃芩苷加樣回收試驗(yàn)

結(jié)果黃芩苷的平均回收率為98.15%，回收率在95 %～105 %之間，RSD值為2.03%(n=6)，表明本法回收率良好。

4.4.6 樣品測定 取3批鼻炎通竅噴霧劑樣品，按供試品溶液制備方法制備樣品，在上述色譜條件下進(jìn)行測定，結(jié)果見表4。

表4 樣品含量測定（n=2）

5 討論

5.1 在后期初步穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，樣品放置一段時間后，白芷薄層色譜圖中歐前胡素斑點(diǎn)極不明顯，而異歐前胡素較穩(wěn)定。查閱相關(guān)文獻(xiàn)[15]，有研究表明，白芷中歐前胡素的含量隨溫度及放置時間的延長有明顯降低，故該制劑在擬訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時，未將白芷的薄層鑒別列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

5.2 麻黃含量測定中，在制備供試品溶液時，對提取溶媒進(jìn)行了考察，分別用水、甲醇、50%甲醇、0.1%鹽酸甲醇、流動相作為樣品提取溶媒，結(jié)果表明用甲醇作為提取溶媒，鹽酸麻黃堿含量較高。

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（責(zé)任編輯：李蕓霞）

Study on the quality standard of Biyan Tongqiao Spray/

SHENG Rong1, ZHOU Li1, ZHANG Qin-xiu1, HU mei1, PU Zhi-qiang2//(1. Affiliated Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610072, China ; 2. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075,China )

Objective: To establish the quality standard of Biyan Tongqiao Spray. Method: TLC was used for the qualitative identifcation of Ephedra Herb, Scutellariae Radix and Angelicae Dahuricae Radix in Biyan Tongqiao Spray. HPLC was used to simultaneously determine the contents of ephedrine and baicalin. Result: TLC spots were clear without negative interference. HPLC experiment showed good linear relationship at the ranges of 0.0798 μg ～1.1172 μg for ephedrine and 0.1364 μg～2.046 μg for baicalin. The average recoveries were 97.26% with RSD of 2.33% (n=6) for ephedrine and 98.15% with RSD of 2.03% for baicalin (n=6).Conclusion: The method has characters of good specifcity, sensitivity and reproducibility, so it can be used for the quality control of Biyan Tongqiao Spray.

Biyan Tongqiao Spray; TLC; HPLC; ephedrine; baicalin.

P 917

A

1674-926X(2014)02-015-04

成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院科研基金：鼻炎通竅噴霧劑的研制，課題編號：2008-D-YY-02

1.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，四川 成都 610072；

2.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610075

盛蓉(1967-)，女，副主任藥師，主要從事中藥質(zhì)量控制與醫(yī)院制劑研發(fā)

Tel:028-87783257 Email:sheng6710@126.com

2013-07-31