HPLC法測定百部止咳糖漿中苦杏仁苷的含量

1.江蘇省泰州市姜堰中醫(yī)院， 江蘇 泰州 225500；2.蘇中藥業(yè)集團股份有限公司，江蘇 泰州 225500

百部止咳糖漿為泰州市姜堰中醫(yī)院肺病科與藥劑科共同研制，具有清肺止咳功效，用于急慢性支氣管炎，小兒百日咳?？嘈尤受諡榭嘈尤实闹饕钚猿煞?，苦杏仁苷經(jīng)腸道微生物或苦杏仁本身所含苦杏仁酶能分解產(chǎn)生微量的氫氰酸，對呼吸中樞有抑制作用，該作用與鎮(zhèn)咳、平喘效應有關(guān)[1]。過量的氫氰酸可引起中毒，抑制細胞呼吸，形成“細胞內(nèi)窒息”組織缺氧[2]。因此本文采用高效液相色譜法測定百部止咳糖漿中苦杏仁苷的含量，以完善百部止咳糖漿的質(zhì)量控制標準。

1 儀器與材料

1.1 儀器 SHMADZU日本島津高效液相色譜儀，檢測器為SPD-10AVP，雙泵LC-10ATCP，大連依利特色譜工作站。電子分析天平(Max 220g,Min 10mg,e=1mg,d=0.1mg)。

1.2 材料 甲醇為色譜純，水為超純水，其它試劑為分析純;苦杏仁苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供；百部止咳糖漿由江蘇省泰州市姜堰中醫(yī)院提供(批號：20121212、20130217、20130413)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗 色譜柱：Kromasi C18柱(5μm，4.6mm×250mm)；流動相：甲醇-水(20∶80)；流速：1.0ml/min；柱溫：25℃；檢測波長：215nm[3]。在該色譜條件下苦杏仁苷與相鄰雜質(zhì)峰的分離度R>1.5，理論塔板數(shù)>3000，基線平穩(wěn)，陰性樣品在此條件下無干擾峰。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的苦杏仁苷對照品2mg置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度搖勻，制備成0.2mg/ml的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 精密量取百部止咳糖漿5.0ml于50ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，取濾液即得供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系 精密量取上述對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml分別至10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度搖勻。分別精密量取10μl進樣，記錄色譜圖，以峰面積(A)對質(zhì)量濃度(C)繪制標準曲線?？嘈尤受赵?.04～0.24mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。回歸方程為A=5396.3C+614，r=0.9995。

2.5 精密度實驗 精密吸取上述對照品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進樣6次，測定峰面積，計算RSD=1.03%，表明儀器的精密度良好。

2.6 重復性實驗 取同一批樣品依法制成6份供試品溶液，按上述色譜條件進樣10μl，測定峰面積。6次測定結(jié)果的RSD=0.95%，表明該方法的重復性良好。

2.7 穩(wěn)定性實驗 精密吸取供試品溶液及對照品溶液各10μl，在上述色譜條件下，分別于0、4、8、12、24h進樣，測定峰面積，5次測定的結(jié)果RSD=1.01%。結(jié)果分析表明，對照品溶液及供試品溶液均在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率實驗 精密量取已知含量的上述供試品溶液2.0、1.5、1.0ml，各平行3份，置10ml容量瓶中，分別加入濃度為0.2mg/ml的對照品溶液1.0、0.8、0.6ml，各平行3份，用甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件進行操作測定含量，結(jié)果見表1。

2.9 樣品的含量測定 取批號為20121212、20130217、20130413百部止咳糖漿的樣品，按2.3供試品溶液的制備方法制備樣品的溶液，精密吸取該樣品溶液10μl進樣，測定含量。結(jié)果見表2。

表1 加樣回收率實驗結(jié)果

表2 百部止咳糖漿中苦杏仁苷的含量

3 討論

苦杏仁具祛痰鎮(zhèn)咳、平喘，抗炎的功效，其有效成分主要是苦杏仁苷，為蛋白酶水解產(chǎn)物，其祛痰鎮(zhèn)咳、平喘抗炎的作用與苦杏仁的止咳平喘的機理一致。而苦杏仁經(jīng)加熱炮制后，可以殺酶保苷?？嘈尤式佑|到水，會使部分苷溶于水，也能使一部分苷水解，因此不同的炮制方法會影響苦杏仁中苦杏仁苷的含量。

本文對苦杏仁中的主要活性成分苦杏仁苷進行含量測定，且對苦杏仁苷的HPLC法做了柱效分離度、方法學的考察，確定了苦杏仁苷在百部止咳糖漿中的質(zhì)量標準，為百部止咳糖漿中苦杏仁的質(zhì)量控制提供了實驗數(shù)據(jù)。

本方法還對多種流動相的組成、流速、柱溫進行了分析，實驗表明當流動相為甲醇-水(20∶80)，柱溫25℃，流速1.0ml/min時苦杏仁苷的色譜峰的基線平穩(wěn)與雜質(zhì)峰的分離度較好。

2010版中國藥典中只有苦杏仁藥材中苦杏仁苷的含量測定方法，而沒有成品制劑中關(guān)于苦杏仁苷的含量測定的方法。但文獻中高效液相色譜法檢測苦杏仁苷含量的報道較多[4-5]，本試驗采用高效液相色譜法方法準確、快速、可靠，可用于測定百部止咳糖漿中苦杏仁苷的含量。

[1]侯家玉，方泰惠．中藥藥理學[M]．北京：中國中醫(yī)藥出版社．2007：177．

[2]李貴海，劉青，孫付軍，等．不同炮制方法對苦杏仁主要藥效作用的影響[J]．中成藥，2007，29(7)：1031-1034．

[3]錢平，賈蕓，劉志輝，等．高效液相色譜法測定郁李仁中苦杏仁苷的含量[J]．中國中醫(yī)藥信息雜志，2009，16(12)：50-51．

[4]吳迪，王建中，趙云霞，等．苦杏仁苷幾種測定方法的比較研究[J]．食品工業(yè)科技，2006，27(2)：184-185．

[5]王乾蕾，李運軍，余健，等．高效液相色譜法測定清肺合劑中苦杏仁苷含量[J]．中國藥業(yè)，2008，17(19)：31-32．