食品中安定和氯丙嗪殘留檢測研究進(jìn)展

李向麗, 張 娜， 王文林

(中山火炬職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣東中山 528436)

食品安全是關(guān)系到國計(jì)民生的大事。近幾年來，世界各地發(fā)生了諸多有關(guān)食品安全的事件，引起了國際、國內(nèi)社會(huì)的廣泛關(guān)注和高度重視，而肉、蛋、奶等動(dòng)物性食品，在我國消費(fèi)食物構(gòu)成中已占有愈加重要的位置。在食品安全問題備受關(guān)注的同時(shí)，鎮(zhèn)靜劑的使用也逐漸引起人們的重視。主要是個(gè)別商販在畜禽飼養(yǎng)及運(yùn)輸過程中擅自非法使用鎮(zhèn)靜劑類藥物，最終可能導(dǎo)致畜禽產(chǎn)品中該類藥物的殘留，造成食品安全隱患，嚴(yán)重威脅人們的身體健康。目前，我國已將鎮(zhèn)靜劑類藥物列入食品動(dòng)物禁用的獸藥及其他化合物清單[1-3]。

近年來，個(gè)別飼料生產(chǎn)企業(yè)為了追求飼料的轉(zhuǎn)化率和高額利潤，不顧國家的法律法規(guī)，在生產(chǎn)環(huán)節(jié)加入鎮(zhèn)靜劑類藥物，尤其是養(yǎng)豬生產(chǎn)中，飼喂安定等可導(dǎo)致神經(jīng)麻痹、安靜嗜睡從而使豬活動(dòng)量降低，達(dá)到快速催肥，縮短出欄時(shí)間，增加飼料報(bào)酬的目的。在運(yùn)輸過程中，安定和氯丙嗪均可降低豬的應(yīng)激反應(yīng)程度，減少能耗，降低成本。但飼喂過安定的畜禽體內(nèi)會(huì)有該藥物的殘留，人類通過進(jìn)食攝入，并經(jīng)長期蓄積后可引起中毒。目前，在動(dòng)物源性食品中已全面被禁止檢出安定[5-8]。想要對食品中的這些鎮(zhèn)靜劑進(jìn)行有效監(jiān)控，建立靈敏度高、快速的檢測方法尤為必要。筆者就常見的安定和氯丙嗪兩類鎮(zhèn)靜劑在食品中的檢測現(xiàn)狀進(jìn)行了綜述。

1 免疫學(xué)方法

2 色譜技術(shù)的應(yīng)用

色譜法用于測定鎮(zhèn)靜劑類成分的殘留具有分離效率高、分析速度快、檢測靈敏度高、樣品用量少、選擇性好、可多組分同時(shí)分析測定、易于自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，但因其定性能力較差，現(xiàn)已大量發(fā)展了色譜與其他多種分析技術(shù)聯(lián)用。

2.1氣相色譜法張玉潔等利用氣相色譜-微電子捕獲(GC-uECD)檢測法建立了快速檢測豬肉中地西泮殘留的方法[13]。首先用乙腈超聲提取豬肉中的地西泮，C18固相萃取柱凈化，利用GC-uECD法進(jìn)行殘留檢測，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，在1～1 000 μg/L范圍內(nèi)藥物色譜峰面積與濃度線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.999 4。對空白豬肉進(jìn)行藥物添加回收試驗(yàn)，平均回收率為83.5%～94.9%，檢出限為0.31 μg/kg，定量限為1.00 μg/kg。張澤楷等提出了氣相色譜法測定動(dòng)物飼料中安定的殘留量的方法[14]。飼料經(jīng)過有機(jī)溶劑提取，采用SE-54毛細(xì)管柱(30 m×0.32 mm，0.32 μm)分離，電子捕獲檢測器檢測，檢出限(2S/N)為0.007 mg/L。方法的平均回收率為79.5%～93.1%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=8)為2.11%～4.02%。

2.3液相色譜法范盛先等建立了豬腎臟中氯丙嗪和異丙嗪殘留量檢測的高效液相色譜法[20]。豬腎臟中殘留的氯丙嗪和異丙嗪，用乙腈提取，再依次用酸化乙腈和正己烷凈化，氮?dú)獯蹈?，甲醇溶解后，用Waters高效液相色譜系統(tǒng)，Hypersil C18柱，UV檢測器，用乙腈-水-0.5 mol/L 乙酸銨(V/V/V，50∶49∶1)為流動(dòng)相，流速1.2 ml/min，波長254 nm 測定，內(nèi)標(biāo)法定量。結(jié)果表明，氯丙嗪在豬腎臟中的最低檢測限均為10 μg/kg，組織中添加量為10 μg/kg時(shí)，氯丙嗪的回收率為83%，批間變異系數(shù)均小于20%。王海嬌等建立了測定豬肉中安定殘留量的反相高效液相色譜法[21]。利用Al2O3層析柱對安定提取液進(jìn)行凈化，高效液相色譜儀測定參數(shù):C18柱(2 mm×150 mm,3 μm);流動(dòng)相為甲醇-水-25 mmol/L乙酸銨溶液(64.8∶35.0∶0.2，V/V)；流速0.12 ml/min；光電二極管陣列檢測器，波長254 nm。試驗(yàn)結(jié)果表明，提取液中各組分分離良好，安定濃度在100 ng/ml～40 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈線性相關(guān)，r=0.997 19,平均回收率80.8%,RSD<5%。湯文利等用高效液相色譜儀(HPLC)同時(shí)測定飼料中地西泮、安眠酮的含量[22]。在堿性條件下, 用有機(jī)溶劑提取飼料中的地西泮和安眠酮, 利用硅酸鎂小柱對提取液進(jìn)行富集、凈化，用高效液相色譜儀進(jìn)行檢測。HPLC 測定參數(shù)：C18柱(4.00 mm×250 mm i.d.,5 μm);流動(dòng)相為乙腈-25 mmol/L乙酸銨溶液(30∶70)；流速1.00 ml/min；利用二極管陣列檢測器測定地西泮、安眠酮紫外光區(qū)的特征光譜進(jìn)行定性，外標(biāo)法在254、226 nm處進(jìn)行定量。樣品提取液中各組分分離良好，地西泮濃度在200 ng/ml～ 100 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈線性相關(guān)，R=0.999 2,平均回收率92.28%～114.9%,變異系數(shù)(RSD)<5%,檢測限(S/N=3)4 ng。

2.4液相色譜-質(zhì)譜法液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法由于進(jìn)樣體積小、溶劑消耗少、靈敏度高、定性準(zhǔn)確及檢測速度快等特點(diǎn)，是鎮(zhèn)靜劑殘留檢測的最主要手段。周德剛等采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜建立了豬肌肉中安定的檢測方法[23]。豬肌肉組織的藥物用乙腈提取，經(jīng)HLB固相柱凈化，采用正電噴霧離子源，在多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式下測定。結(jié)果表明，安定在0.1～100 ng/ml內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)r為0.998 5。在0.5、2.0、10.0 μg/kg添加水平下,加標(biāo)回收率為68.2%～97.6%,檢測限為0.1 μg/kg，定量限為0.5 μg/kg。孫雷等建立了豬肉和豬腎中包括安定和氯丙嗪在內(nèi)的10種鎮(zhèn)靜劑超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析方法[24]。樣品經(jīng)酶解后，調(diào)節(jié)pH呈堿性，分別用乙酸乙酯和叔丁基甲醚進(jìn)行萃取，高速冷凍離心去除脂肪等雜質(zhì)。提取液經(jīng)Waters Acquity UPLC BEH C18色譜柱分離，以0.1%甲酸乙腈溶液和0.1%甲酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。電噴霧正離子(ESI + )模式電離，多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式檢測，基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液法進(jìn)行定量。結(jié)果表明，10 種鎮(zhèn)靜劑在2～100 μg/L 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)(r)均大于0.998;10 種鎮(zhèn)靜劑的檢出限(S/N>3)為0.5 μg/kg，定量限(S/N>10)為1 μg/kg。3 個(gè)添加水平的回收率為64.5%～111.4%，批內(nèi)、批間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均小于15%。該方法具有簡便快捷、靈敏度高、定性準(zhǔn)確等特點(diǎn)。錢曉東等采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法建立了同時(shí)測定水產(chǎn)品中地西泮、去甲地西泮、奧沙西泮和替馬西泮4種鎮(zhèn)靜劑藥物殘留的檢測方法[25]。樣品用含1%氨水的乙腈提取2次，濃縮，經(jīng)正己烷去脂、HLB固相萃取柱凈化后，減壓蒸干，用甲醇-水(5∶5，V/V)定容。采用CAPCELL PAK MGⅡC18(100 mm×2.1 mm id，3.5 μm)做分離柱，以甲醇和0.1%甲酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。采用電噴霧電離，正離子掃描，選擇反應(yīng)監(jiān)測，同位素內(nèi)標(biāo)法定量。結(jié)果表明，4 種藥物在4～250 ng/ml 范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2均大于0.990，定量下限均為1 μg/kg，以1、10、50 μg/kg 這3 個(gè)水平進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，4種藥物的平均回收率為81.7%～119.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.7%～17.3%。方法高效、靈敏，適合于水產(chǎn)品中這4 種鎮(zhèn)靜劑藥物的定量及確證分析。渠巖等建立了同時(shí)測定畜禽肉中地西泮等13種鎮(zhèn)靜藥物殘留量的基質(zhì)固相分散-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法[26]。樣品經(jīng)基質(zhì)固相分散樣品制備試劑盒凈化后，進(jìn)行超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析，采用多反應(yīng)監(jiān)測模式，外標(biāo)法定量。采用BEH C18液相色譜柱分離，以10 mmol/L 乙酸銨溶液- 甲醇為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。結(jié)果表明，13種鎮(zhèn)靜藥物的方法檢出限為0.05～3.00 μg/kg，線性范圍內(nèi)低、中、高3個(gè)添加水平的回收率為77.4%～100.2%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.3%～14.8%。嚴(yán)麗娟等利用超高效液相色譜-高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜，結(jié)合數(shù)據(jù)庫，建立了乳制品中地西泮、氯丙嗪等20種鎮(zhèn)靜劑的高通量篩查方法[27]。樣品以乙腈和酸化乙腈沉淀蛋白質(zhì)和脂肪，冷凍離心濃縮，經(jīng)超高效液相色譜分離，采用電噴霧離子源，正離子模式，基質(zhì)匹配法進(jìn)行定量分析，可在9 min內(nèi)對20種鎮(zhèn)靜劑進(jìn)行高通量篩查和定量分析。結(jié)果表明，地西泮和氯丙嗪的質(zhì)量濃度分別在5～1 000 μg/L和1～500 μg/L范圍內(nèi)具有較好的線性關(guān)系，檢出限分別為1.5 μg/L和0.3 μg/L，平均回收率為76.1%～108.2%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.5%～9.0%。利用TargetAnalysis 軟件建立鎮(zhèn)靜劑數(shù)據(jù)庫,并應(yīng)用于加標(biāo)樣品的篩查分析。通過數(shù)據(jù)庫比對,樣品中添加的鎮(zhèn)靜劑被全部篩查出來,鑒定準(zhǔn)確度達(dá)到了100%，保留時(shí)間偏差小于0.1 min，質(zhì)量偏差小于3 mDa，同位素峰形匹配度大于89.5%。利用此方法對購自超市的8個(gè)不同品牌的50余份乳制品進(jìn)行了篩查分析,均未檢出陽性樣品。

3 化學(xué)發(fā)光法

化學(xué)發(fā)光法用于測定鎮(zhèn)靜劑類成分的殘留具有靈敏度高、選擇性好、分析速度快、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，但因其檢測結(jié)果穩(wěn)定性和重現(xiàn)性較差，并且目前可被利用的發(fā)光試劑較少，使該方法的推廣應(yīng)用受到制約。何樹華等利用魯米諾-鐵氰化鉀化學(xué)發(fā)光體系結(jié)合流動(dòng)注射技術(shù)建立了測定氯丙嗪的化學(xué)發(fā)光新方法[28]。該方法有很高的靈敏度，檢測限為5.17×10-9g/ml(IUPAC)，線性范圍為1.0×10-8～1.0×10-6g/ml，對1.0×10-7g/ml氯丙嗪平行測定11次，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.7%。張迎雪等提出了一種毛細(xì)管電泳化學(xué)發(fā)光聯(lián)用技術(shù)同時(shí)測定氯丙嗪和異丙嗪[29]。在酸性條件下，氯丙嗪和異丙嗪能被 Ce(Ⅳ)氧化，然后將能量轉(zhuǎn)移給熒光發(fā)射體——羅丹明6G，并以化學(xué)發(fā)光形式釋放能量?；诖耍Y(jié)合流動(dòng)注射技術(shù)，以10 mmol/L KH2PO4/H3PO4(pH 3.5)為運(yùn)行緩沖液, 實(shí)現(xiàn)了2種藥物的分離。此方法的線性范圍分別為4.0×10-8～2.0×10-6g/ml和2.0×10-8～2.0×10-6g/ml, 檢出限分別為 5.6 ng/ml和 3.4 ng/ml，對2.0×10-6g/ml異丙嗪平行測定9次, 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.8%。

4 總結(jié)與展望

隨著鎮(zhèn)靜劑的應(yīng)用越來越廣泛，種類越來越多，檢測方法不僅要求高效、靈敏和準(zhǔn)確，還要求重現(xiàn)性和穩(wěn)定性好。目前，色譜法在鎮(zhèn)靜劑的檢測中應(yīng)用最為廣泛。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測技術(shù)對于鎮(zhèn)靜劑類藥物殘留的檢測，因其具有分辨率高、靈敏度好和分析速度快的優(yōu)勢，被農(nóng)業(yè)部等部門定為標(biāo)準(zhǔn)方法在廣泛應(yīng)用。隨著氣相色譜法-質(zhì)譜聯(lián)用檢測技術(shù)的發(fā)展，因其在靈敏度、專屬性和分離效能等方面都有優(yōu)勢，在鎮(zhèn)靜劑類藥物殘留分析中受到越來越廣泛的關(guān)注。但檢測手段只是監(jiān)控作用，從根源上解決問題還依賴于提高大眾食品安全的意識(shí)，規(guī)范食品加工企業(yè)的生產(chǎn)。

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