高效氟苯尼考粉劑研究

劉懷珠，張建平，胡海英，趙清斌，張正全

（1.鄭州大學(xué)藥學(xué)院，河南 鄭州450001；2.上海邦森生物科技有限公司，上海 奉賢201422）

氟苯尼考（Florfenicol），是一種新型獸醫(yī)專用廣譜抗菌藥，具有抗菌后效應(yīng)顯著、無(wú)潛在致再生障礙性貧血作用等特點(diǎn)。2010年版《中國(guó)獸藥典》已收載氟苯尼考粉劑、注射劑、溶液劑等。據(jù)報(bào)道，不同廠家的氟苯尼考產(chǎn)品在使用中也存在顯著差異，所以目前國(guó)內(nèi)重點(diǎn)研究了氟苯尼考快速溶出制劑，如氟苯尼考包合物研究[1]、氟苯尼考納米乳研究[2]等。但其固體口服給藥療效仍差于國(guó)外同類產(chǎn)品，鑒于此，課題組已對(duì)氟苯尼考的溶解度行為、脂水分配系數(shù)[3]及其在體生物吸收行為進(jìn)行了研究[4]，結(jié)果顯示、氟苯尼考溶解度低（1.2mg/mL)、脂水分布系數(shù)P在2.5左右，本應(yīng)有利于藥物的吸收[5]，但藥物吸收速度卻較慢，2 h僅吸收17.875%[4]。因此，本試驗(yàn)擬采用無(wú)定形技術(shù)和藥物吸收促進(jìn)技術(shù)，提高氟苯尼考在水中的溶解度和通過(guò)生物膜的速度，以保證藥物能夠快速溶出和吸收。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 氟苯尼考原料藥（湖北龍翔藥業(yè)有限公司，含量99.9%，批號(hào)∶101152）、國(guó)外產(chǎn)品對(duì)照（批號(hào)：RKPB1575）、甲醇（色譜純）、吐溫-80（化學(xué)純）、淀粉（藥用），其余試劑均為分析純。

1.2 試驗(yàn)儀器 Angilent-1200高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；AKasil C18色譜柱(Agela Tech?nologies)、RC-6溶出度測(cè)試儀（天津市光學(xué)儀器廠）；BUCHIB-290微型噴霧干燥器（瑞士，BUCHI公司）。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物 普通級(jí)昆明系小鼠，體重18～22 g，河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)：410118；清潔級(jí)健康大鼠，體重200±10 g，鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)：SCXK(豫)2012-0002。

1.4 氟苯尼考含量測(cè)定方法[4]采用高效液相色譜法，在波長(zhǎng)為224 nm處進(jìn)行氟苯尼考的含量測(cè)定，結(jié)果應(yīng)符合含量測(cè)定要求。

1.5 氟苯尼考高效粉劑處方優(yōu)化試驗(yàn)

1.5.1 氟苯尼考吸收促進(jìn)劑的篩選 將適量氟苯尼考原藥用水溶解并稀釋成0.1mg/mL的氟苯尼考水溶液，分別加入吸收促進(jìn)劑乙二胺四乙酸二鈉鹽、十二烷基硫酸鈉鹽、膽酸鹽、吐溫-80，制成含0.1%吸收促進(jìn)劑的氟苯尼考溶液；另取對(duì)應(yīng)量國(guó)外粉劑（陽(yáng)性對(duì)照），用水溶出藥物，過(guò)濾并稀釋至相同濃度；同樣操作，以氟苯尼考水溶液為陰性對(duì)照。取試驗(yàn)前禁食12 h不禁水大鼠18只，稱重并編號(hào)，隨機(jī)分6組，依照張建平[4]氟苯尼考大鼠腸吸收方法，分別給予大鼠上述6種不同氟苯尼考水溶液，進(jìn)行大鼠腸循環(huán)試驗(yàn)，平行操作，檢測(cè)氟苯尼考在體大鼠腸的吸收情況，以氟苯尼考的腸吸收百分率為評(píng)價(jià)指標(biāo)。

1.5.2 氟苯尼考吸收促進(jìn)劑的再優(yōu)化 取適量氟苯尼考原藥用水溶解并稀釋成0.1mg/mL的氟苯尼考水溶液，同時(shí)加入吸收促進(jìn)劑EDTA和SDS，制成含0.2%吸收促進(jìn)劑的氟苯尼考溶液；另取對(duì)應(yīng)量國(guó)外產(chǎn)品（陽(yáng)性對(duì)照），用水溶出藥物，過(guò)濾，用水稀釋至相同濃度；同樣操作，以氟苯尼考原料藥為陰性對(duì)照。按照1.5.1項(xiàng)下方法操作。

1.5.3 氟苯尼考高效粉劑的制備[6]稱取氟苯尼考10 g，用丙酮60mL溶解，備用。另稱取多孔性微粉硅膠45 g、淀粉44.5 g，用水450mL分散，再加入EDTA 0.5 g，SDS 0.5 g溶解；將氟苯尼考的丙酮溶液加入到含有多孔性微粉硅膠和淀粉的混懸液中，快速攪拌、噴霧干燥，優(yōu)化操作條件為：進(jìn)風(fēng)溫度150℃～180℃，出風(fēng)溫度40℃～50℃，噴霧空氣流量30～45m3/h，噴霧壓力0.5～0.6Mpa，控制真空度在20～50mbar之間，收集產(chǎn)品再60℃～70℃干燥5 h，即得產(chǎn)品。

1.6 體外溶出試驗(yàn) 按中華人民共和國(guó)獸藥典2010年版一部附錄97第二法(槳法)，以氟苯尼考原料藥對(duì)比考察優(yōu)化后產(chǎn)品溶出·速率。溶出介質(zhì)為脫氣的去離子水900mL，溫度37℃，轉(zhuǎn)速100 r/min，分別于0、5、10、15、20、30、45、60min處取樣5 mL，同時(shí)補(bǔ)等量同溫介質(zhì)5 mL，經(jīng)0.2μm微孔濾膜過(guò)濾，HPLC法測(cè)定藥物濃度，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)的累積溶出率。

1.7 生物利用度對(duì)比試驗(yàn) 取優(yōu)化后的氟苯尼考粉、氟苯尼考原料藥、國(guó)外產(chǎn)品適量分別用水溶解過(guò)濾，制得濃度為0.5mg/mL的氟苯尼考水溶液3份，備用。將小鼠稱重并編號(hào)，隨機(jī)分3組，每組36只，禁食12 h但不禁水，灌胃給藥50mg/kg體重，分別于給藥后0、0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、24 h眼球取血0.3mL于1%肝素化的離心管中5 000 r/min離心15min，取上層血漿，平行操作。HPLC法測(cè)定血藥濃度，繪制氟苯尼考藥時(shí)曲線。將試驗(yàn)結(jié)果通過(guò)PKSolver藥動(dòng)學(xué)處理軟件進(jìn)行擬合；并用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，P＞0.05（雙側(cè)）表示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05（雙側(cè)）表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.01（雙側(cè)）為差異非常顯著。

2 結(jié)果

2.1 不同吸收促進(jìn)劑對(duì)氟苯尼考吸收的影響 按照1.5.1項(xiàng)下方法，以國(guó)外產(chǎn)品為陽(yáng)性對(duì)照、氟苯尼考原料藥為陰性對(duì)照，對(duì)吸收促進(jìn)劑進(jìn)行篩選，結(jié)果見(jiàn)圖1。

由圖1可見(jiàn)，各吸收促進(jìn)劑對(duì)氟苯尼考腸吸收有不同程度的影響：EDTA可使藥物的腸吸收率達(dá)32%，產(chǎn)生最強(qiáng)的吸收促進(jìn)作用（P＜0.01）、SDS次之（P＜0.01），膽酸鹽和吐溫-80對(duì)藥物的吸收沒(méi)有顯著（P＞0.05）促進(jìn)效果。

依據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果，按照2.2.2項(xiàng)下方法進(jìn)行吸收促進(jìn)劑混合使用，以進(jìn)一步優(yōu)化處方，結(jié)果見(jiàn)圖2。

由圖2可見(jiàn)，EDTA和SDS聯(lián)用后，氟苯尼考的腸吸收率升至40%，藥物的吸收速度顯著高于原溶液（P＜0.05），與國(guó)外產(chǎn)品相當(dāng)（P＞0.05）。研究證明，聯(lián)用EDTA和SDS優(yōu)選為氟苯尼考的吸收促進(jìn)劑。

圖1 氟苯尼考在體大鼠腸吸收 （100μg/mL）

圖2 氟苯尼考在體大鼠吸收 （100μg/mL）

2.2 氟苯尼考高效粉體外溶出 按中華人民共和國(guó)獸藥典2010年版一部附錄97第二法(槳法)考察藥物溶出速率結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3 不同時(shí)間氟苯尼考累積溶出度

如圖3所示：體外溶出5min時(shí)，氟苯尼考無(wú)定形物（粉）的累積溶出已達(dá)85%以上，而氟苯尼考原料藥僅釋放5%左右，相差17倍。結(jié)果表明，氟苯尼考高效粉能顯著（P＜0.01）提高原料藥的溶出速率。

2.3 高效氟苯尼考粉劑生物利用度試驗(yàn) 按照

2.4項(xiàng)下方法對(duì)高效氟苯尼考粉生物利用度進(jìn)行考察，藥時(shí)曲線見(jiàn)圖4。

圖4 氟苯尼考小鼠灌胃給藥藥時(shí)曲線 (50mg/kg)

將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用PKSolver藥動(dòng)學(xué)處理軟件進(jìn)行擬合，結(jié)果見(jiàn)表4。

根據(jù)C-t曲線和藥動(dòng)學(xué)參數(shù)可知：本制劑組水溶液小鼠灌胃后，能快速溶出吸收入血，達(dá)峰最快且血藥濃度最高，36min即達(dá)Cmax為54.08μg/mL，是原藥溶液的近1倍，與陽(yáng)性對(duì)照55 min達(dá)Cmax49.8 6μg/mL相比，差異顯著（P＜0.05）；生物利用度是陽(yáng)性對(duì)照的99.08%、是原藥溶液的124.4%。結(jié)果表明，本制劑組有效的提高了藥物的溶出和吸收速率，改善了藥物在體內(nèi)的吸收和分布，顯著提高了藥物的生物利用度。

3 討論

在高效氟苯尼考粉的優(yōu)化試驗(yàn)中，鑒于吸收促進(jìn)劑EDTA（螯合效應(yīng)）和SDS（表面活性劑作用）促進(jìn)吸收機(jī)理的差異和其對(duì)藥物在體腸吸收的顯著促進(jìn)作用，試驗(yàn)試將其合用，結(jié)果證明，EDTA和SDS聯(lián)用對(duì)藥物的吸收能產(chǎn)生正協(xié)同作用；試驗(yàn)同時(shí)采用噴霧干燥法，利用多孔性微粉硅膠的多孔性及高比表面積特征，使藥物在其表面高度分散，呈現(xiàn)出一種高能狀態(tài)，進(jìn)而達(dá)到使藥物快速溶出的目的。通過(guò)對(duì)其生物利用度的考察，本研究制劑達(dá)峰最快、時(shí)間最短，在體內(nèi)MRT與國(guó)外產(chǎn)品相似，均能很快完全吸收；且由于氟苯尼考是一種濃度依耐型抗生素，劑量后效顯著，Cmax越大越有利抗菌素后效應(yīng)的發(fā)揮、藥物療效就越好，所以本制劑最大的Cmax對(duì)克服細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生、提高藥物療效具有重要意義。

表1 小鼠灌胃相同劑量國(guó)外產(chǎn)品、高效氟苯尼考粉和原料液（50mg/kg）的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（n=3）

4 結(jié)論

本試驗(yàn)采用無(wú)定形（非晶型）技術(shù)和藥物吸收促進(jìn)技術(shù)，成功制備了含有氟苯尼考10%、氟苯尼考無(wú)定形物吸附載體89.8%、十二烷基硫酸鈉鹽0.1%和乙二胺四乙酸二鈉鹽0.1%的高效氟苯尼考粉劑，其在體外能快速釋放，體內(nèi)能快速吸收、血藥峰值濃度高、比國(guó)外同類產(chǎn)品有更好的治療效果，且因制備方法簡(jiǎn)單、成本低，具有推進(jìn)工業(yè)化大生產(chǎn)的前景。

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