葛根提取物對(duì)阿爾茨海默病大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

何霞，季歐，李晉奇

·藥理毒理·

葛根提取物對(duì)阿爾茨海默病大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

何霞1，季歐2，李晉奇1

目的：觀察葛根提取物對(duì)阿爾茨海默病大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力的影響。方法：Morris水迷宮篩選學(xué)習(xí)記憶正常SD大鼠72只，隨機(jī)分為假手術(shù)組12只，手術(shù)組60只，在腦定位儀定位下，手術(shù)組大鼠微量注射凝聚態(tài)β淀粉樣蛋白25-35（beta-amyloid peptide 25-35）至海馬內(nèi)側(cè)腦室以建立阿爾茨海默病(AD)模型；假手術(shù)組注射等量生理鹽水。Morris水迷宮篩選模型成功大鼠，隨機(jī)分為模型組、0.42mg．kg-1多奈哌齊治療組、0.47g．kg-1、0.24g．kg-1、0.12g．kg-1葛根提取物治療組和假手術(shù)組，每組10只SD大鼠。治療組灌胃給藥，每日一次，連續(xù)四周；Morris水迷宮測(cè)試各組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。結(jié)果：(1)與假手術(shù)組比較，手術(shù)組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力明顯降低（P＜0.01)。(2)與模型組相比，多奈哌齊組、0.47 g．kg-1．d-1、0.24 g．kg-1和0.12 g．kg-1．d-1葛根提取物組均可使大鼠的逃避潛伏期變短（P＜0.05，P＜0.01)，可使大鼠跨越平臺(tái)次數(shù)及在平臺(tái)象限游程百分比均增加（P＜0.05)。(3)各劑量組之間比較，于定位航行的第四、五天，大鼠逃避潛伏期差異明顯（P＜0.05)。結(jié)論：1.大鼠側(cè)腦室內(nèi)注射Aβ25-35成功制備了大鼠AD模型。2.葛根提取物可改善AD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，是否具有劑量依賴性，還需進(jìn)一步研究。

阿爾茨海默??；葛根提取物；學(xué)習(xí)記憶能力；SD大鼠

阿爾茨海默?。ˋlzheimer Disease，AD）是一種以進(jìn)行性記憶減退、認(rèn)知功能障礙及精神異常為臨床表現(xiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。典型病理特征為海馬和大腦皮層內(nèi)神經(jīng)胞外淀粉樣β蛋白（β-amyloid, Aβ）沉積，形成老年斑（senile plaque, SP），T au蛋白異常聚集形成的神經(jīng)纖維纏結(jié)（neurofibrillary tangles, NFTs）,以及腦皮層和海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞減少。目前，65歲以上老人AD患病率隨年齡增加而增長(zhǎng)，2005年我國(guó)流行病學(xué)顯示，65歲以上老年人的癡呆患病率為7.8%，其中AD患病率為4.8%，且隨年齡增長(zhǎng)而增加[1]?，F(xiàn)AD已成為危害老年人的重要疾病之一，AD治療藥物的研究越來(lái)越多。

葛根（Radix Puerariae）為豆科植物野葛 Pueraria lobata（Willd.）Ohwi 的干燥根。其性涼，味甘、辛。具有解表退熱，生津，升陽(yáng)止瀉等功效。用于外感發(fā)熱頭痛、高血壓頸項(xiàng)強(qiáng)痛、口渴、消渴、麻疹不透、熱痢、泄瀉等。《本草綱目》載：葛根，性涼、氣平、味甘，具清熱、降火、排毒諸功效?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，葛根中的異黃酮類化合物葛根素對(duì)高血壓、高血脂、高血糖和心腦血管疾病有一定療效。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)乙醇回流提取，得到葛根提取物，以研究其對(duì)AD大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性6月齡SD（Sprage-Dawley）大鼠，體重180～220 g，購(gòu)于四川省人民醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所。

1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器 ELGA超純水系統(tǒng)(英國(guó)ELGA公司)；DNP-9052型電熱恒溫箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；ZH-藍(lán)星C型腦定位儀(淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司)；ZH-RXZ型柔性顱骨鉆(淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司)；微量進(jìn)樣器(上海高鴿工貿(mào)有限公司，平頭，10毫升)；Morris水迷宮系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)；MT-2000Morris水迷宮跟蹤分析系統(tǒng)（S7200）。

1.1.3 主要實(shí)驗(yàn)藥物和試劑 葛根提取物（Puerarin extraction）：1g相當(dāng)于原生藥31.98 g，四川省人民醫(yī)院藥學(xué)部藥研室制備；鹽酸多奈哌齊（Donepezil Hydrochloride）：5 mg/片，批號(hào)：091129A，國(guó)藥準(zhǔn)字H20050978，衛(wèi)才（中國(guó)）藥業(yè)有限公司；Aβ25-35：北京博奧森生物技術(shù)有限公司；戊巴比妥鈉：沃凱國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；苦味酸：臺(tái)山市眾誠(chéng)化工有限公司，批號(hào)：20101101。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 藥物配制 葛根提取物臨用時(shí)以溫開(kāi)水分別配成濃度為4.7%、2.4%、1.2%的混懸液；鹽酸多奈哌齊臨用時(shí)以溫開(kāi)水配成濃度為0.004%的混懸液，置于冰箱4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 給藥劑量的確定 鹽酸多奈哌齊成人劑量為5 mg．d-1。根據(jù)人和動(dòng)物體表面積計(jì)算方法[2]，將鹽酸多奈哌齊轉(zhuǎn)換為大鼠等效劑量0.42 mg．kg-1．d-1。葛根提取物劑量根據(jù)最低中毒劑量換算，預(yù)計(jì)分為高、中、低三組，分別為0.47 g．kg-1．d-1、0.24 g．kg-1．d-1和0.12 g．kg-1．d-1。

1.2.3 給藥 用藥組分別按葛根提取物和鹽酸多奈哌齊灌胃給藥，模型組和假手術(shù)組灌胃給予等容量生理鹽水，每天一次連續(xù)給藥4周，各組大鼠在用藥期間自由飲水、進(jìn)食。

1.2.4 Aβ25-35孵育 實(shí)驗(yàn)前一周以生理鹽水將白色干粉Aβ25-35溶解為2μg/μl溶液，并置于37℃溫箱中孵育一周，使其變?yōu)榫哂猩窠?jīng)毒性的凝聚狀態(tài)的Aβ25-35。

1.2.5 AD模型制備方法 大鼠用3%戊巴比妥鈉腹腔注射(30mg．kg-1)麻醉后，固定于腦立體定位儀上，俯臥位，頭部備皮，以碘伏消毒手術(shù)區(qū)皮膚后，沿顱部正中矢狀線劃開(kāi)頭皮和骨膜，在用小棉球蘸取雙氧水輕輕涂擦骨面，充分暴露前囟位置。參照《大鼠腦立體定位圖譜》，選擇右側(cè)腦區(qū)(前囟向后1.0 mm，中線右旁2.0 mm，硬腦膜下4.0 mm)為注射靶區(qū)。用骨鉆鉆開(kāi)顱骨，暴露硬腦膜，垂直進(jìn)微量進(jìn)樣針4.0 mm，將10 μg(2 μg/1 μg)聚集態(tài)的Aβ25-35溶液在5 min內(nèi)緩慢注入，并留針10 min使溶液充分彌散,拔針5 min?？p合切口，于縫合處用0.1 mL慶大霉素注射液處理。保暖至清醒后，放回籠中常規(guī)飼養(yǎng)。假手術(shù)組以等量無(wú)菌生理鹽水代替Aβ25-35溶液，其余操作同上。所有操作均在相對(duì)無(wú)菌條件下進(jìn)行。

1.2.6 Morris水迷宮測(cè)試 定位航行實(shí)驗(yàn)（Place navigation test, PNT）:用于檢測(cè)動(dòng)物在水迷宮的學(xué)習(xí)能力[3]。于大鼠最后一次灌胃給藥后一小時(shí)開(kāi)始。每只大鼠用苦味酸在背部標(biāo)記。每天分上、下午兩個(gè)時(shí)間段，每個(gè)時(shí)間段訓(xùn)練4次，每次分別從3個(gè)不同的標(biāo)記點(diǎn)將大鼠面向池壁放入水中，記錄120 s內(nèi)尋找平臺(tái)所需時(shí)間（逃避潛伏期），每次至少間隔30 min，共訓(xùn)練5天，平臺(tái)位置均保持不變。先將平臺(tái)置于東南象限中間，大鼠置于平臺(tái)上，20 s后從離平臺(tái)最遠(yuǎn)的象限面向池壁將大鼠放入水中，記錄并觀察大鼠尋找平臺(tái)的路線和逃避潛伏期等。如果大鼠在120 s內(nèi)未找到平臺(tái)，將其重新置于平臺(tái)20 s，后移出。

空間探索實(shí)驗(yàn)（Spatial probe test, SPT）:用于檢測(cè)動(dòng)物在水迷宮的空間記憶能力[3]。于第六天進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)。將平臺(tái)撤離，任選一個(gè)入水點(diǎn)將大鼠面向池壁放入水中，記錄大鼠在120 s內(nèi)跨過(guò)虛擬平臺(tái)的次數(shù)及在平臺(tái)象限游泳距離占總游程的百分比。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果

2.1 AD模型建立判斷

水迷宮實(shí)驗(yàn)的定位航行實(shí)驗(yàn)中，各組大鼠逃避潛伏期隨著游泳天數(shù)的增加而下降，說(shuō)明大鼠在五天的游泳訓(xùn)練中尋找平臺(tái)有一定的學(xué)習(xí)記憶能力。在定位航行訓(xùn)練的第五天，空白組大鼠逃避潛伏期為A（11.34±4.13）秒，手術(shù)組大鼠逃避潛伏期為B（50.64±2.42）秒，（B-A）/B%為74.66%，根據(jù)癡呆模型的判斷標(biāo)準(zhǔn)：（B-A）/B%＞20%，提示：大鼠雙側(cè)腦室注射小劑量Aβ25-35混懸液成功制備大鼠AD模型。

2.2 水迷宮檢測(cè)葛根提取物對(duì)大鼠學(xué)習(xí)能力的影響

2.2.1 定位航行實(shí)驗(yàn) 從表1和圖1可見(jiàn)，各組大鼠逃避潛伏期隨著游泳天數(shù)的增加而不斷下降，說(shuō)明各組大鼠定位航行的游泳訓(xùn)練中對(duì)于平臺(tái)均有一定的學(xué)習(xí)記憶能力，但其學(xué)習(xí)記憶能力存在很大差異。第一、二天各組的潛伏期相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，從第三天到第五天，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠逃避潛伏期顯著增加（P＜0.01）；與模型組相比，多奈哌齊組、0.47 g．kg-1．d-1、0.24 g．kg-1．d-1和0.12 g．kg-1．d-1葛根提取物組均可使大鼠的逃避潛伏期變短（P＜0.05，P＜0.01）；第四天，0.47 g．kg-1．d-1葛根提取物組與0.12 g．kg-1．d-1葛根提取物組之間差異明顯（P＜0.05），第五天，0.47 g．kg-1．d-1和0.24 g．kg-1．d-1葛根提取物組與0.12 g．kg-1．d-1葛根提取物組有差異（P＜0.05）。

表1 葛根提取物對(duì)大鼠逃避潛伏期的影響（，n=10）

表1 葛根提取物對(duì)大鼠逃避潛伏期的影響（，n=10）

與假手術(shù)組比較▲P ＜0.01；與模型組比較**P ＜0.01，*P ＜0.05；與0.12g．kg-1葛根總皂苷治療組比較?P＜0.05▲P ＜0.01υs sham operation group；**P ＜0.01，*P ＜0.05υs model group；?P＜0.05υs 0.12g．kg-1Puerarin extracttreatment group

逃避潛伏期(S)第一天 第二天 第三天 第四天 第五天假手術(shù)組 — 111.28±3.92 92.94±2.49 44.92±1.54 20.59±2.64 10.18±2.48模型組 — 115.24±5.69 98.08±1.88 64.33±2.85▲61.49±3.53▲50.94±2.42▲多奈哌齊 0.42mg．kg-1112.53±2.94 95.57±1.76 54.40±2.28*35.16±1.86**20.33±3.28**葛根總皂苷 0.12g．kg-1114.23±6.11 96.49±2.38 56.41±3.24*43.82±2.15**32.52±2.83**葛根總皂苷 0.24g．kg-1113.86±2.98 95.93±2.06 54.79±4.13*40.39±3.32**28.85±3.20**?葛根總皂苷 0.47g．kg-1111.81±3.14 94.39±2.62 50.60±2.61**34.30±2.46**?19.53±3.20**?組別 劑量

圖1 葛根提取物對(duì)大鼠逃避潛伏期的影響

2.2.2 空間探索實(shí)驗(yàn) 從表2可見(jiàn)，與假手術(shù)組相比，模型組跨越平臺(tái)次數(shù)及在平臺(tái)象限游程百分比顯著下降（P＜0.01，P＜0.05）；與模型組相比，多奈哌齊組、0.47 g．kg-1．d-1、0.24 g．kg-1和0.12 g．kg-1．d-1葛根提取物組均可使大鼠跨越平臺(tái)次數(shù)及在平臺(tái)象限游程百分比均增加（P＜0.05）;葛根提取物三劑量組之間比較，大鼠跨越平臺(tái)次數(shù)和在平臺(tái)象限游程百分比差異較小，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 葛根提取物對(duì)大鼠跨域平臺(tái)次數(shù)及平臺(tái)象限游程百分比的影響(，n=10)

表2 葛根提取物對(duì)大鼠跨域平臺(tái)次數(shù)及平臺(tái)象限游程百分比的影響(，n=10)

注：與假手術(shù)組比較▲P ＜0.01；與模型組比較*P ＜0.05▲P ＜0.01υs sham operation group；**P ＜0.01，*P ＜0.05υs model group

組別 劑量 跨越平臺(tái)次數(shù) 平臺(tái)象限游程百分比(次數(shù)／120S) （%）假手術(shù)組 —— 11.20±2.86 30.85±2.33模型組 —— 2.50±1.02▲16.04±1.65▲多奈哌齊組 0.42mg．kg-18.00±2.05*25.85±1.40**葛根提取物 0.47g．kg-18.80±1.25**23.42±2.12*葛根提取物 0.24g．kg-16.50±1.50**17.73±1.81葛根提取物 0.12g．kg-15.80±2.13 20.33±1.73

3 討論

3.1 AD模型建立及其可靠性

3.1.1 模型動(dòng)物的選擇 近年來(lái)，隨著人口的老齡化，阿爾茨海默病越來(lái)越成為威脅人類的一種嚴(yán)重疾病，對(duì)于探討AD的發(fā)病機(jī)制及開(kāi)放篩選有效防治AD疾病的藥物也越來(lái)越引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。人類疾病的研究，可通過(guò)動(dòng)物模型的建立，來(lái)進(jìn)行相關(guān)研究。目前動(dòng)物模型采用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有小鼠、大鼠、家兔和狗等。

本實(shí)驗(yàn)選用的雄性SD大鼠，其具有多個(gè)優(yōu)點(diǎn)。首先，大鼠在神經(jīng)解剖方面與人類極為相似[5]，其腦血管解剖及海馬的結(jié)構(gòu)與人類的結(jié)構(gòu)有較高的相似度。其次，由于雌激素[6]可增強(qiáng)膽堿神經(jīng)生長(zhǎng)因子的敏感性，增強(qiáng)膽堿神經(jīng)元的功能，改善AD患者的認(rèn)知功能。為了更好地模擬AD的病理改變，減少性別差異對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，本實(shí)驗(yàn)選用雄性大鼠。最后，大鼠的生長(zhǎng)繁殖能力較強(qiáng)，飼養(yǎng)管理方便，成本較低，能大批量應(yīng)用統(tǒng)計(jì)，且大鼠生理、生化、藥理等方面的實(shí)驗(yàn)已經(jīng)資料較為豐富。因次，本實(shí)驗(yàn)選用雄性SD大鼠做為模型動(dòng)物。

3.1.2 AD模型評(píng)價(jià) 阿爾茨海默病的發(fā)病機(jī)制目前尚未完全明確，現(xiàn)有多種學(xué)說(shuō)和假說(shuō)，如遺傳學(xué)說(shuō)、膽堿能假說(shuō)、鉛中毒假說(shuō)、淀粉樣蛋白級(jí)聯(lián)反應(yīng)假說(shuō)和Aβ沉積學(xué)說(shuō)等。根據(jù)這些學(xué)說(shuō)，模擬AD的動(dòng)物模型方法大致分為損害模型、自然衰老模型、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型和Aβ動(dòng)物模型。

實(shí)驗(yàn)采用A β動(dòng)物模型。阿爾茨海默?。ˋlzheimer disease, AD）最主要的病理特征之一是老年斑（SP）形成。β-淀粉樣蛋白是SP的核心成份。AD病人腦中SP的數(shù)量與癡呆的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。Aβ是由淀粉樣前體蛋(amyloid precursor protein，APP)分解而來(lái)的～種含39.43個(gè)氨基酸殘基的疏水肽，它包括多種活性片段，如Aβ25-35，Aβ1-40和Aβ1-42。腦內(nèi)急性注射Aβ可使動(dòng)物產(chǎn)生與AD相似的行為障礙和記憶缺損癥狀，并出現(xiàn)Aβ沉積。在AD中，Aβ的沉積存在一個(gè)惡性循環(huán)，即中樞膽堿能耗竭增加Aβ的產(chǎn)生和神經(jīng)毒性，而Aβ又進(jìn)一步削弱膽堿能神經(jīng)傳遞的效應(yīng)。凝聚狀態(tài)與可溶性的單體物質(zhì)相比，前者對(duì)神經(jīng)元的毒性更大[7]。故采用孵育一周后凝聚態(tài)Aβ25-35作為注射。

3.2 葛根提取物對(duì)AD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改善

目前，測(cè)試學(xué)習(xí)記憶能力的方法主要有：Y-迷宮實(shí)驗(yàn)、放射狀迷宮實(shí)驗(yàn)、跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)、穿梭實(shí)驗(yàn)、高架迷宮實(shí)驗(yàn)、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)和Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)等。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)是由Richard Morris在1984年設(shè)計(jì)用來(lái)測(cè)試實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)習(xí)和記憶能力的一種模型[8]。它通過(guò)記錄動(dòng)物入水后搜索水下平臺(tái)的時(shí)間和游泳游程，用于分析和推斷動(dòng)物的學(xué)習(xí)、記憶和空間認(rèn)知等方面的能力，它能較準(zhǔn)確反映動(dòng)物的空間學(xué)習(xí)和記憶能力，可作為測(cè)試實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶水平的重要工具。

Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)包括定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)。（1）定位航行實(shí)驗(yàn)：通過(guò)反復(fù)訓(xùn)練，大鼠能夠利用周圍環(huán)境的空間線索對(duì)水下的平臺(tái)進(jìn)行定位，以測(cè)定大鼠的學(xué)習(xí)能力，這種能力采用入水至爬上平臺(tái)的游泳路程，即逃避潛伏游程來(lái)表示。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：從第三天開(kāi)始，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠逃避潛伏期顯著增加，與模型組相比，多奈哌齊組、0.47 g．kg-1．d-1、0.24 g．kg-1．d-1和0.12 g．kg-1．d-1葛根提取物組均可使大鼠的逃避潛伏期變短，說(shuō)明模型組在實(shí)驗(yàn)期間學(xué)習(xí)能力有所下降，多奈哌齊組、0.47 g．kg-1．d-1、0.24 g．kg-1．d-1和0.12 g．kg-1．d-1葛根提取物組學(xué)習(xí)能力均明顯改善。第五天，0.47 g．kg-1．d-1和0.24 g．kg-1．d-1葛根提取物組與0.12 g．kg-1．d-1葛根提取物組有差異，但差異具有依賴性。逃避潛伏游程變化趨勢(shì)看，假手術(shù)組來(lái)越短，符合學(xué)習(xí)越來(lái)越快特點(diǎn)，模型組逃避潛伏游程上下波動(dòng)，多奈哌齊組、0.47 g．kg-1．d-1、0.24 g．kg-1．d-1和0.12 g．kg-1．d-1葛根提取物組變化趨勢(shì)不如假手術(shù)組，但是優(yōu)于模型組，推測(cè)可能是注射Aβ25-35造成海馬損傷，導(dǎo)致學(xué)習(xí)過(guò)程不穩(wěn)定，而多奈哌齊組、0.47 g．kg-1．d-1、0.24 g．kg-1．d-1和0.12 g．kg-1．d-1葛根提取物組相對(duì)于模型組有所改善。（2）空間探索實(shí)驗(yàn)：撤掉平臺(tái)，大鼠根據(jù)記憶對(duì)平臺(tái)的反復(fù)尋找，以測(cè)定大鼠的記憶能力。利用大鼠跨越平臺(tái)的次數(shù)和在原平臺(tái)象限游泳路程的百分比例來(lái)表示大鼠的記憶能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與假手術(shù)組相比，模型組跨越平臺(tái)次數(shù)及在平臺(tái)象限游程百分比顯著下降，說(shuō)明模型組的實(shí)驗(yàn)期間記憶能力有所下降；與模型組相比，多奈哌齊組、0.47 g．kg-1．d-1、0.24 g．kg-1．d-1和0.12 g．kg-1．d-1葛根提取物組均可使大鼠跨越平臺(tái)次數(shù)及在平臺(tái)象限游程百分比均增加，說(shuō)明多奈哌齊組、0.47 g．kg-1．d-1、0.24 g．kg-1．d-1和0.12 g．kg-1．d-1葛根提取物組在實(shí)驗(yàn)期間記憶能力得到一定改善。

4 結(jié)論

4.1 大鼠側(cè)腦室內(nèi)注射Aβ25-35成功制備了大鼠AD模型。

4.2 葛根提取物可改善AD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，是否具有劑量依賴性，還需進(jìn)一步研究。

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（責(zé)任編輯：蔣淼）

The pharmacological effect of Puerarin extract on learning and memory ability of rats with Alzheimer disease

HE Xia1, JI Ou2, LI Jin-qi1// (1.Department of Pharmacy, Sichuan Academy of Medical Sciences &Sichuan Provincial People’s Hospital, Chengdu 610072, Sichuan; 2 .Sichuan Orthopaedic Hospital, Chengdu 610041, Sichuan)

Objective:To investigate the effects of Puerarin extraction on the learning and memory ability in the rat model of Alzheime disease (AD). Method:72 normal SD rats were randomly divided into Sham-operated group (12 rats) and surgery group (60 rats) after being screened by Morris water maze method. 10 μg of beta-amyloid peptide 25-35（2 μg．μL-1）was injected into the lateral ventricle to establish AD rat model with stereotaxis instrument, and equivalent volume of saline was injected into sham operated group. Then the rats were randomly divided into sham operated group, AD model control group, 0.42 mg．kg-1Donepezil treated group, 0.47g．kg-1, 0.24g．kg-1, and 0.12g．kg-1Puerarin treated group (10 SD rats for each group). The rats of Donepezil treated group were intragastric administered with Donepezil daily, and 0.47g/kg, 0.24g/kg, and 0.12g/kg Puerarin treated group were intragastric administered with Puerarin extract once a day for 4 weeks. The Morris water maze was used to investigate the ability of learning and memory of rats. Result:(1) Compared with the sham-operated group, the learning and memory ability of the rats in operation groups were decreased signifcantly（P＜0.01). (2) Compared with the model group, 0.42 mg．kg-1Donepezil treated group, 0.4 7g．kg-1, 0.24 g．kg-1and 0.12 g．kg-1Puerarin extract treated group demonstrated shortened escape latency of rats（P＜0.05，P＜0.01), increased number of Crossing platform and run percentage of target quadrant（P＜0.05).(3)Compared among the Puerarin extract treated groups, there were signifcant differences in the escape latency of rats, in the fourth and ffth day of the navigation test(P＜0.05).Conclusion:(1) In this study, AD rat model is successfully established by injecting Aβ25-35 into lateral ventricle. (2) Puerarin extract can improve the learning and memory ability in the rat model of Alzheime disease, but urther study is still needed to explore the dose-dependent relationship.

R 285

A

1674-926X(2014)05-013-04

1. 四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院，四川 成都 610072 2.四川省骨科醫(yī)院, 四川 成都 610041

何霞，女，碩士研究生，主管藥師，主要從事臨床藥理學(xué)和藥物基因組學(xué)的研究Tel:02887393405 Email:66280253@qq.com

李晉奇，男，博士，副研究員，主要從事藥理學(xué)研究 Tel:02887393316 Email:lijinqi2002@126.com

2014-03-03