中山地區(qū)兒童空腸彎曲菌流行情況分析

譚南 袁春雷 楊曉華 林愛心

空腸彎曲菌(campylobacter jejuni，CJ)是一種微需氧的革蘭陰性桿菌，能引起散發(fā)性和地方流行性的胃腸炎暴發(fā)，是引起嬰幼兒急性腹瀉的主要病原菌之一，是目前世界上普遍存在的重要食源性病原菌[1-3]。人類常因攝入被空腸彎曲菌污染的食物和飲用水而被感染[4]。為了解中山地區(qū)兒童空腸彎曲菌腸炎的流行情況以及空腸彎曲菌的耐藥現(xiàn)狀，本研究對所檢出的127例空腸彎曲菌采用質(zhì)粒分型(Plasmid profile assay)的方法對其進(jìn)行同源性分析，以了解其來源情況和流行病學(xué)特征，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本院在2011年1月-2012年12月兒科門診或兒科住院收治的1865例急性腹瀉患兒，其中男1175例，女690 例；年齡 1～13 歲，平均（6.5±1.5）歲。

1.2 病原菌培養(yǎng)和鑒定

1.2.1 培養(yǎng)基和試劑 Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基為杭州天和微生物試劑有限公司產(chǎn)品，綿羊血平板培養(yǎng)基由廣州迪景提供、45 μm一次性無菌濾膜為MILLIPORE產(chǎn)品，微需氧袋和NH生化鑒定卡為法國生物梅里埃公司產(chǎn)品。

1.2.2 取樣方法 將無菌棉簽在滅菌生理鹽水中潤濕沾取患兒糞便的黏液或膿血部分，立即置于Carry Blair運(yùn)送培養(yǎng)基中送檢。

1.2.3 病原菌分離培養(yǎng) 標(biāo)本送至實(shí)驗(yàn)室后，取出標(biāo)本拭子置含有2 mL無菌生理鹽水的試管中，攪拌混勻，使標(biāo)本液化成標(biāo)本混懸液。將已消毒的0.45 μm無菌微孔濾膜直接放在血平板培養(yǎng)基上，吸取適量標(biāo)本懸液滴置濾膜上，放37℃停留30 min后，用攝子把濾膜取出棄去，血平板放微需氧袋42℃培養(yǎng)48 h。

1.2.4 微需氧生長試驗(yàn) 由于彎曲菌為微需氧菌，在需氧、厭氧條件下均不能生長。故將可疑單個菌落同時接種到兩個血平板，一個平板放37℃需氧培養(yǎng)24 h；另一個血平板放42℃微需氧培養(yǎng)48 h；若需氧條件下不生長，微需氧條件下生長者，可作進(jìn)一步生化反應(yīng)。

1.2.5 染色與鑒定 對微氧反應(yīng)符合者我們先涂片作革蘭染色，鏡檢若為菌體細(xì)小的革蘭陰性桿菌，可彎曲呈弧狀或逗點(diǎn)狀，也可呈S形、螺旋形或呈典型的飛翔的海鷗狀，且氧化酶、觸酶試驗(yàn)均為陽性者我們再用VITEK 2 Compact系統(tǒng)的NH鑒定卡做全面生化鑒定。

1.2.6 質(zhì)粒檢測 細(xì)菌的質(zhì)粒DNA提取，瓊脂糖凝膠電泳，質(zhì)粒DNA分子量的測定按文獻(xiàn)。實(shí)驗(yàn)過程：質(zhì)粒抽提；0.8%瓊脂糖電泳；EB染色、凝膠成像。

1.3 質(zhì)量控制 采用ATCC 33560空腸彎曲菌標(biāo)準(zhǔn)菌株作為整個試驗(yàn)過程的質(zhì)量控制，符合要求。

2 結(jié)果

2.1 病原菌檢出情況 在這1865份樣本中，一共檢測出127株空腸菌，分離率為6.81%。其中兒童的空腸菌檢出率最高，特別是0～3歲，有109株，占總數(shù)的86.0%。5歲以內(nèi)的兒童一共檢出124株，占總數(shù)的97.6%。

2.2 不同月份檢出菌株統(tǒng)計(jì) 在本研究中，患兒檢出率較高的為5～10月，陽性率均大于7.6%，其余月份檢出率較低，均低于5.0%。全年總檢出率為6.35%。見表1。

表1 不同月份檢出菌株統(tǒng)計(jì)

2.3 基因質(zhì)粒譜分型 40%的菌株含有質(zhì)粒，多數(shù)菌株含1條質(zhì)粒帶，少數(shù)菌株含2～3條質(zhì)粒帶。耐藥譜與質(zhì)粒譜比較有幾種不同模式：質(zhì)粒譜相同，耐藥譜基本相同(AS、Al、B)；耐藥譜相同，而質(zhì)粒譜不同(A 12和AI、A3和A、A、和A 6)；質(zhì)粒譜和耐藥譜均不相同等模式。

3 討論

CJ是人類腹瀉的主要細(xì)菌性病原菌，在發(fā)達(dá)國家已成為最重要的腹瀉病原菌之一，在發(fā)展中國家，CJ是小兒急性腹瀉的最常見的病原菌，在國外已有暴發(fā)流行[5]。CJ是人畜共患病致病菌之一，人類主要因接觸被空腸彎曲菌污染的動物、肉、奶、蛋以及水源等而感染該菌[6]?？漳c彎曲菌感染主要引起急性腸炎和食物中毒，免疫力極低下者會進(jìn)一步導(dǎo)致心內(nèi)膜炎、關(guān)節(jié)炎、骨髓炎、腦炎、敗血癥等全身性疾病?；蛸|(zhì)粒譜分型結(jié)果提示：兒童空腸彎曲菌感染可能是由許多在遺傳學(xué)上同源相關(guān)性較遠(yuǎn)的空腸彎曲菌所引起。

目前尚無正式應(yīng)用于臨床的CJ疫苗，對CJ感染的防治主要是加強(qiáng)對CJ的監(jiān)測，控制疫源動物的傳播，防止人和動物排泄物污染水源和食物[7-8]。病原體的分離培養(yǎng)是CJ感染確診的金標(biāo)準(zhǔn)，但目前開展對此項(xiàng)檢測的醫(yī)院并不多，建議對疑似患者在使用抗菌藥物前采集腹瀉標(biāo)本及時進(jìn)行病原菌檢測，對確診患者按消化道傳染病采取合適的隔離措施和及時有效的抗菌治療。

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