毛細管氣相色譜法測定阿莫曲坦原料藥中8種有機溶劑殘留量

馮光玲，丁文娟，馮愛國，馬新成，李 丹（1.山東省醫(yī)藥工業(yè)研究所，濟南 250101；2.山東省化學藥物重點實驗室，濟南 250101；.山東臨沂動植物園，山東臨沂 27607）

阿莫曲坦（Almotriptan）是西班牙Almirall-Prodesfarma 公司開發(fā)的一種抗偏頭痛藥物，于2000年在西班牙獲批準上市，臨床上用于有（或無）先兆的偏頭痛發(fā)作的頭痛期的急性治療[1]。偏頭痛是一種常見的復發(fā)性、間歇性頭痛，其發(fā)病機制尚未完全清楚，但學者們認為神經(jīng)遞質5-羥色胺（5-HT，一種強效的血管收縮因子）在偏頭痛的發(fā)病機制中起著主要作用[2]。阿莫曲坦原料藥國內正處于研發(fā)狀態(tài)，其在合成過程中使用了乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、異丙醇與甲苯等有機溶劑，因此在制訂質量標準時必須考察該原料藥的有機溶劑殘留量問題。本文按照2010年版《中國藥典》二部殘留溶劑測定法指導原則[2]，采用毛細管氣相色譜法對8種有機溶劑殘留量進行測定和驗證，結果表明建立的方法操作簡便，可對阿莫曲坦原料藥中殘留的8種有機溶劑進行有效控制，從而為藥品質量標準的修訂提供科學依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

6890 氣相色譜儀、7694E 自動頂空進樣器（美國Agilent公司）。

1.2 藥品與試劑

阿莫曲坦原料藥（山東省醫(yī)藥工業(yè)研究所合成室提供，批號：130201、130202、130203，純度：99.82%、99.72%、99.76%）；乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、異丙醇、甲苯、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）均為分析純（含量均大于99.0%）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent DB-5毛細管柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm），以（5%）苯基-（95%）甲基聚硅氧烷為固定液；柱溫采取程序升溫：35 ℃保持5 min，再以50 ℃/min的速率升溫至200 ℃，保持10 min；氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度：250 ℃；載氣：高純N2，流速：10 ml/min；進樣口溫度：200 ℃，分流比：10∶1；頂空氣體進樣，平衡溫度：100 ℃，平衡時間：30 min，進樣瓶裝量：2 ml。

2.2 溶液配制

空白溶液：精密量取DMF 2 ml，置于頂空進樣瓶中，作為空白溶液。

標準溶液貯備液：稱取乙醇約500 mg、乙腈約41 mg、二氯甲烷約60 mg、正己烷約29 mg、乙酸乙酯約500 mg、四氫呋喃約72 mg、異丙醇約500 mg、甲苯約89 mg，置于含有適量DMF的100 ml 量瓶中，充分振搖使溶解，加DMF 稀釋至刻度，搖勻，即得。

標準溶液：精密量取上述貯備液10 ml 置于100 ml 量瓶中，加DMF至刻度，搖勻，作為標準溶液。

供試品溶液：精密稱取阿莫曲坦原料藥0.2 g，置于頂空進樣瓶中，加DMF 2 ml，作為供試品溶液。

取標準溶液和供試品溶液進樣分析，結果各溶劑分離良好，空白溶液無干擾。色譜圖見圖1。

圖1 毛細管氣相色譜圖A.標準溶液；B.供試品溶液；1.乙醇；2.乙腈；3.二氯甲烷；4.正己烷；5.乙酸乙酯；6.四氫呋喃；7.異丙醇；8.甲苯；9.DMFFig 1 Capillary GC chromatogramsA.reference solution；B.test solution；1.ethanol；2.acetonitrile；3.dichlormethane；4.n-hexane；5.acetic ether；6.tetrahydrofuran；7.isopropanol；8.methylbenzene；9.DMF

2.3 標準曲線的繪制

分別精密量取標準溶液貯備液0.50、0.75、1.00、1.25、1.50 ml，置于10 ml 量瓶中，加DMF 稀釋至刻度，搖勻。各取上述溶液2 ml，置于頂空進樣瓶中，按“2.1”項下色譜條件分別進樣。分別以乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、異丙醇與甲苯的質量濃度（c）為橫坐標、峰面積（A）為縱坐標繪制標準曲線，其線性關系見表1。由表1可知，各有機溶劑在各自的檢測質量濃度范圍內線性關系良好（r為0.999 6～0.999 9），表明方法可靠。

表1 各有機溶劑線性關系試驗結果Tab 1 Linear relationship of organic solvents

2.4 精密度試驗

取標準溶液，按“2.1”項下色譜條件，連續(xù)進樣6 次，記錄色譜圖，計算峰面積的RSD。結果乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、異丙醇與甲苯的RSD分別為0.18%、0.19%、0.22%、0.15%、0.29%、0.32%、0.33%、0.27%（n＝6），表明精密度符合要求。

2.5 回收率試驗

精密稱取樣品（批號：130201）0.2 g，共10 份，其中一份加入2 ml DMF 作為空白溶液；分別配制低（80%）、中（100%）、高（120%）3種質量濃度的標準溶液，各取2 ml，加入盛有樣品的頂空進樣瓶中，平行3 份操作。以“2.2”項下的標準溶液作為對照，進樣分析，計算回收率。結果平均回收率為99.8%～100.8%（RSD＝0.87%～2.11%，n＝3），均符合要求，見表2。

表2 回收率試驗結果（%，n＝3）Tab 2 Results of recovery test（%，n＝3）

2.6 定量限、檢出限試驗

將標準溶液逐級稀釋，分別取2 ml，置于頂空進樣瓶中，按“2.1”項下色譜條件進樣，記錄色譜圖，直至信噪比為10∶1 和3∶1，即為定量限和檢測限。結果乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、異丙醇與甲苯定量限分別為0.15、0.12、0.18、0.09、0.45、0.21、0.45、0.54 ng，檢測限分別為0.05、0.04、0.06、0.03、0.15、0.07、0.15、0.18 ng。

2.7 重復性試驗

取同一批（批號：130201）樣品6 份，每份約0.2 g，精密稱定，按“2.2”項方法制備供試品溶液并測定。結果異丙醇平均含量為0.016%，RSD＝0.59%（n＝6），表明方法重復性良好。

2.8 樣品中有機溶劑殘留量測定

精密量取標準溶液和供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分別進樣測定，以外標法計算得3批樣品中異丙醇殘留量平均值分別為0.014%、0.017%和0.018%，均未檢出其他7 種有機溶劑。

3 討論

3.1 溶劑的選擇

因阿莫曲坦不溶于水，易溶于沸點較高的DMF，且DMF不干擾其他溶劑的檢查，故選擇DMF為溶劑。

3.2 頂空進樣條件的選擇

考慮到待測殘留有機溶劑的沸點除甲苯外，乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、異丙醇的沸點均小于100 ℃，因此采用頂空瓶平衡溫度為100 ℃；并且在此條件下，對頂空瓶平衡時間進行篩選，結果發(fā)現(xiàn)平衡時間在30 min后，峰面積基本不再改變。因此選擇在100 ℃平衡溫度條件下平衡30 min作為頂空進樣條件。

3.3 色譜柱溫度、加熱時間的選擇

乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、異丙醇的沸點范圍較窄（39～83 ℃），筆者曾分別選擇柱溫35、45、55 ℃進行試驗，結果在35 ℃時乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、異丙醇分離較好，45 ℃和55 ℃時出峰過快、分離度差。故選擇35 ℃作為初溫，保持5 min，待8種溶劑完全出峰后，再升高至200 ℃，使DMF出峰。

3.4 檢測限度

藥品中有機溶劑殘留種類因生產(chǎn)工藝不同而異，本文中各種有機溶劑限度根據(jù)文獻[3]要求及2010年版《中國藥典》[2]的規(guī)定，暫將阿莫曲坦原料藥中乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、異丙醇與甲苯的限度定為0.5%、0.041%、0.06%、0.029%、0.5%、0.072%、0.5%和0.089%。

綜上所述，本試驗建立的方法線性、精密度、回收率、定量限、檢測限結果等均較好，符合要求，能準確、迅速地檢測出阿莫曲坦原料藥中殘留的乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、異丙醇與甲苯，從而控制藥品質量、保證安全用藥。

[1]李曉東.抗偏頭痛藥阿莫曲坦：almotriptan[J].國外醫(yī)藥合成藥、生化藥、制劑分冊，2002，23（1）：55.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄61-63.

[3]周海鈞.藥品注冊的國際技術要求：質量部分（ICH）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：82-89.