況樹斌 孟建明
陜西省南鄭縣圣水鎮(zhèn)獸醫(yī)站,陜西南鄭723100
做好重大動物疫病的監(jiān)測和預警是有效防止疫病發(fā)生的措施之一,動物血清學檢測是動物疫病監(jiān)測的重要手段,制備有效合格的血清是動物疫病監(jiān)測的首要條件。筆者結合實際工作經驗,就常見動物的采血方法及血清制備作了如下總結,供同仁參考。
采血部位為前腔靜脈(仔豬)或耳靜脈(成年豬)。
1)前腔靜脈采血。該法適用于35~70kg的豬,可采用仰臥或站立保定。助手將豬保定好后,采血者先用75%的酒精對豬的前腔靜脈窩(位于肩胛內側,手壓有窩狀感)進行消毒,再手持采血器,以45~60°的傾斜度朝向心端刺入2~3cm;回抽采血器,在有血回流時,根據(jù)需要采3~5mL即可。
2)耳靜脈采血。該法適用于較大的豬(如成年母豬或種公豬)或采血較少時,可采用側臥或站立保定。助手保定好豬只后,采血者一只手拉直豬耳,另一只手先用75%酒精對耳靜脈處進行消毒,再持采血器從遠心端平行耳靜脈刺入;采血完畢時先松開握耳根的手,然后拔出采血器,再用干棉球按壓采血處約1min(直至采血部位不出血)。
采血部位通常為頸靜脈。
1)牛的頸靜脈采血。采用站立保定(最好在六柱欄中保定),采血者沿頸靜脈溝(對于種?;蚍N羊應適當剪毛)消毒,用一只手按壓頸靜脈下端,使其充盈怒張;另一只手持16號針頭,垂直刺入頸靜脈處1~2cm,血液即可流到采血器中;終止采血后,先松手,后拔針頭,并用酒精棉球按壓采血部位約1min。
2)羊的頸靜脈采血。采用騎式保定法保定,助手跨騎在羊背上,兩手抓住羊角或羊耳;采血者對羊的頸靜脈溝部位剪毛、消毒,一只手按壓頸靜脈下端,使其充盈怒張;另一只手將12號針頭平行于頸靜脈朝遠心端刺入0.5~1.0cm,血液即可流到采血器中;采血完畢后,先松手,后拔針頭,并用酒精棉球按壓采血部位約1min。
采血部位為雞翅靜脈,保定方法為臥式保定。助手將雞保定好后,采血者將雞翅拉直呈30°傾斜,消毒翅靜脈處,將采血器平行翅靜脈朝遠心端刺入;血液流出后,固定采血器,回抽活塞;采血完畢后,用干棉球壓緊采血部位并拔出采血器,持續(xù)按壓采血部位直至不出血。
將采集的血樣呈30~45°斜放,靜置2h,待血液完全凝固后可帶回實驗室;再將血樣立放,夏季3~5h后即可得到血清,冬、春季節(jié)由于氣溫較低,血清析出較慢,可于第2天分離到血清。
此法適用于采樣任務大、時間緊的情況,將采集的血樣呈30~45°斜放,靜置,血樣凝固后置于離心機中,以3 500~4 000r/min的速度離心5~8min,即可得到所需的血清。
以上2種方法均可分離出血清,自然析出法較離心機分離法獲得的血清質量好,但較費時。
采樣要隨機,不要挑著采,更不要專挑那些不健康、消瘦的牲畜。如果挑著采樣,檢測的結果不具有代表性,就失去了檢測的意義。
由于接種疫苗后,動物體內要產生穩(wěn)定的抗體需要一定的時間和過程。因此,進行雞新城疫疫苗、禽流感疫苗、豬瘟疫苗及牛羊口蹄疫疫苗抗體檢測,在免疫后21d采血較合適;進行豬口蹄疫疫苗、高致性豬藍耳病疫苗抗體檢測,在免疫后28d采血較好。
將血樣進行編號并做好標記,分離血清的標記應與血樣編號一致;同時,填寫采樣單,并一一對應。采樣單是對采樣品種群基本情況的簡要記錄,包括畜主信息、飼養(yǎng)量、采樣量、采樣時間、免疫時間、疫苗種類和生產廠家、接種劑量等,均要一一填寫完整。
血清分離好后,有條件的應于當日連同采樣單一起送交上級實驗室保存;沒有條件的則自行冷凍保存,冷藏送檢,避免因血清腐敗變質而影響檢測結果。