不同原因誘導(dǎo)的心肌纖維化動(dòng)物模型的建立

李 萌，呂仕超綜述，吳美芳，張軍平審校

0 引 言

心肌纖維化(myocardial fibrosis，MF)是指心肌間質(zhì)中膠原成分過(guò)度沉積，各型膠原含量增加、比例失調(diào)、空間位置重新排布的一種病理過(guò)程［1］。引起MF的原因很多，主要包括壓力超負(fù)荷、免疫損傷、缺血以及高糖，通常涉及腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS)、膠原生成系統(tǒng)、膠原降解系統(tǒng)、細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)以及多種心血管活性物質(zhì)、細(xì)胞因子、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等多種機(jī)制。MF作為多種疾病的共同病理結(jié)果，最終都將導(dǎo)致心肌僵硬度增加、心室舒張功能減退、冠狀動(dòng)脈血流儲(chǔ)備下降、嚴(yán)重室性心律失常，甚至引起猝死。因此，選擇合適的模型是MF研究的首要條件，在MF的病理特征、發(fā)病機(jī)制、診斷及治療研究中具有重要的意義。本文就多種MF動(dòng)物模型的建立方法作一綜述，期望為深入研究其發(fā)病機(jī)制以及探索其防治方法提供參考。

1 壓力超負(fù)荷誘導(dǎo)的MF模型

壓力超負(fù)荷誘導(dǎo)的MF模型主要有自發(fā)性高血壓模型、腎血管性模型、部分縮窄腹主動(dòng)脈模型、外源性誘導(dǎo)模型。雖然模型種類較多且各具特點(diǎn)，但其MF發(fā)生發(fā)展的主導(dǎo)機(jī)制一致，都是以激活RAAS為主。

1.1 自發(fā)性高血壓模型 大鼠的自發(fā)性高血壓屬于多基因遺傳病。目前最常用的是1963年Okamoto用自發(fā)高血壓Wistar大鼠培育而成的近交系—京都種自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rat，SHR)。該品種高血壓發(fā)生率高，在SHR生長(zhǎng)早期，其血管阻力持續(xù)增加，血壓升高，激活RAAS，導(dǎo)致MF的發(fā)生。一般于出生后第5周血壓開始升高，并持續(xù)上升;第10周高血壓形成，收縮壓＞160 mmHg(1mmHg=0.133kPa);第13周左右開始出現(xiàn)左心室肥厚;24周后，隨年齡增長(zhǎng)心室肥厚進(jìn)行性加重，心肌膠原含量明顯增高，發(fā)生MF，導(dǎo)致心臟舒縮功能障礙;最終于18～24個(gè)月發(fā)展為心力衰竭。

SHR模型未經(jīng)過(guò)任何有意識(shí)的人工處置，在自然培育的情況下產(chǎn)生高血壓及MF，并具有一定的遺傳性。其發(fā)病特點(diǎn)與人類原發(fā)性高血壓較相似，且病程后期均可發(fā)生嚴(yán)重的心肌損害和心臟重構(gòu)。該模型避免了人工干預(yù)造成的創(chuàng)傷，顯著降低了模型死亡率，可作為篩選抗MF藥物的理想動(dòng)物模型［2］。其缺點(diǎn)是飼養(yǎng)條件高，價(jià)格較貴，遺傳育種復(fù)雜，需要一定時(shí)間，且易變種或斷種，若大量使用尚存在一定困難。此外，SHR缺少典型的MF形成前期階段，其出生不久即有心臟羥脯氨酸含量增加，而未觀察到心肌變性壞死的表現(xiàn)。

1.2 腎血管性模型

1.2.1 兩腎一夾模型 兩腎一夾模型即大鼠腹腔注射麻醉，劍突下沿腹正中線作手術(shù)切口打開腹腔，鈍性分離左腎動(dòng)脈，于動(dòng)脈中段放置銀夾，使其部分狹窄，右側(cè)腎動(dòng)脈不觸及［3-4］。研究顯示:術(shù)后1周，大鼠左心室心肌出現(xiàn)明顯的間質(zhì)性水腫，成纖維細(xì)胞增生;第4周，間質(zhì)性水腫逐漸消失，伴隨間質(zhì)纖維化的加重，心肌膠原含量可達(dá)正常值的2～3倍;第12周，出現(xiàn)繼發(fā)于散在性小灶狀心肌細(xì)胞壞死后的修復(fù)性纖維化;第32周，修復(fù)性纖維化更加明顯，心肌膠原含量可高出正常值6倍，占左心室總體積的18%［5-6］。兩腎一夾法直接造成腎缺血，激活RAAS，導(dǎo)致腎臟合成、分泌腎素增多，進(jìn)而增高血液中血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)水平，AngⅡ作用于AngⅡ-1型(AT1)受體可使全身微動(dòng)脈平滑肌收縮，血壓升高;可使靜脈收縮，回心血量增加，從而增加心臟的前、后負(fù)荷;AngⅡ還可直接作用于心肌，引起心肌絲裂素活化蛋白激酶活性增加，從而導(dǎo)致心肌細(xì)胞增生、肥大以及間質(zhì)纖維化?？s窄腎動(dòng)脈亦可導(dǎo)致機(jī)體免疫功能紊亂，產(chǎn)生抗AT1受體自身抗體，其可與AT1受體特異性結(jié)合，產(chǎn)生與AngⅡ相似的受體激動(dòng)劑樣活性，共同參與了MF 的發(fā)生［7］。

兩腎一夾模型具有復(fù)制性強(qiáng)，同一性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，模型成功率可達(dá)95%，且與人類高血壓、MF病理過(guò)程具有可比性，是研究MF發(fā)病機(jī)制最常用的經(jīng)典動(dòng)物模型。但也存在缺點(diǎn)，隨觀察時(shí)間的延長(zhǎng)，其血壓水平有所下降，甚至恢復(fù)到正常水平，血壓存在波動(dòng)［8］。

1.2.2 兩腎兩夾模型 兩腎兩夾模型即大鼠腹腔注射麻醉，行腹正中縱行切口，依次鈍性分離雙側(cè)腎動(dòng)脈，用內(nèi)徑為0.3mm的環(huán)形銀夾分別夾住雙側(cè)腎動(dòng)脈起始部，并確定腎動(dòng)脈置于銀夾的環(huán)形結(jié)構(gòu)［9］。研究顯示:術(shù)后4周為MF形成前期，主要病理改變?yōu)殚g質(zhì)水腫、膠原代謝增加和心肌細(xì)胞變性壞死;4～12周為反應(yīng)性纖維化階段，主要以間質(zhì)性纖維化和血管周圍纖維化為主;12周后為修復(fù)性纖維化階段，主要表現(xiàn)為心肌細(xì)胞壞死和替代性瘢痕的出現(xiàn)，并可有心臟功能的異常。其機(jī)制與兩腎一夾模型相似，都是以激活RAAS為主，造成腎源性高血壓，最終導(dǎo)致MF的發(fā)生［10］。

與兩腎一夾模型相比，兩腎兩夾模型具有以下優(yōu)點(diǎn):血壓峰值高且穩(wěn)定，隨鼠齡增長(zhǎng)，血壓持續(xù)穩(wěn)步升高，與人類高血壓的演變過(guò)程基本一致。由于此模型造成雙側(cè)腎臟缺血，激活雙腎RAAS，因此MF的程度更加嚴(yán)重。存在的缺點(diǎn):該模型復(fù)制成功率為84.2%，低于兩腎一夾模型，且后期腦卒中發(fā)生率較高，增加了模型的死亡率，不適用于觀察時(shí)點(diǎn)較長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)［11-12］。

此外，腎血管性模型還包括一腎一夾模型［13］、腎臟包裹模型，但因其復(fù)制成功率較低，血壓波動(dòng)較大，MF病變不典型，而應(yīng)用較少。

1.3 腹主動(dòng)脈部分縮窄模型 大鼠腹腔注射麻醉，沿腹正中線打開腹腔，在腎動(dòng)脈分支上方0.5 cm處，分離出約1 cm長(zhǎng)的腹主動(dòng)脈，用直徑為0.7 mm的針頭緊貼腹主動(dòng)脈，平行放置，將兩者共同結(jié)扎，然后抽出針頭，即形成腹主動(dòng)脈部分縮窄模型［14-15］。研究顯示:術(shù)后4周大鼠血壓明顯升高，左心室質(zhì)量指數(shù)顯著升高，心肌間質(zhì)出現(xiàn)大量膠原纖維，心肌組織膠原容積分?jǐn)?shù)和心肌膠原蛋白含量均顯著增加;第8周上述各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)一步升高，表明MF程度進(jìn)一步加重［16-17］。腹主動(dòng)脈縮窄法所致持續(xù)性壓力后負(fù)荷引起心臟血流動(dòng)力學(xué)改變、免疫系統(tǒng)激活及心臟適應(yīng)性反應(yīng)，后期激活RAAS，共同導(dǎo)致 MF。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)在此模型的MF進(jìn)展中起重要作用，其表達(dá)量與纖維化程度密切相關(guān)。TGF-β1具有促進(jìn)心臟成纖維細(xì)胞增殖、調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)和細(xì)胞外基質(zhì)合成的重要作用，而TGF-β1/Smads通路的激活是諸多致纖維化因素啟動(dòng)的關(guān)鍵。

腹主動(dòng)脈部分縮窄模型手術(shù)創(chuàng)傷較大，且術(shù)后發(fā)生劇烈的血流動(dòng)力學(xué)變化，因而大鼠術(shù)后成活率偏低，僅為63.33%。此外，其血壓波動(dòng)較大，MF病變不典型，模型缺乏穩(wěn)定性，因此近年來(lái)該模型的應(yīng)用逐步減少［18］。

1.4 外源性誘導(dǎo)模型 外源性誘導(dǎo)模型主要有2種，①外源性給予大鼠AngⅡ:把含有溶于載體的AngⅡ的微量滲透泵植入大鼠皮下，AngⅡ的釋放速率為150 ng/(min·kg)，同時(shí)在其飲水中加入0.3%KCl，給藥第 2 周即出現(xiàn) MF［19］。②外源給予醛固酮(aldosterone，ALD):先切除大鼠單側(cè)腎，皮下植入含有溶于載體的ALD的微量滲透泵，ALD的釋放速率為 0.75 μg/h，飲水中加入 1%NaCl，第 6周出現(xiàn) MF［20］。

外源性誘導(dǎo)模型復(fù)制率較高，近100%，死亡率低，尤其適于研究RAAS中不同環(huán)節(jié)的作用機(jī)制，可用于探討AngⅡ、ALD與MF發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性，是篩選以RAAS作為靶點(diǎn)的抗MF藥物的良好模型。但其成本高，應(yīng)用較少。

2 免疫損傷誘導(dǎo)的MF模型

免疫損傷誘導(dǎo)的MF模型是通過(guò)自身抗原激發(fā)機(jī)體的自身免疫反應(yīng)，造成心肌炎性損傷，最終發(fā)展為MF。主要模型有心肌自身抗原誘導(dǎo)模型和回輸激活的自身免疫細(xì)胞誘導(dǎo)模型。

2.1 心肌自身抗原誘導(dǎo)模型

2.1.1 心肌肌凝蛋白(cardiac myosin，CM)誘導(dǎo)模型 CM是一種重要的心肌自身抗原。有學(xué)者從豬心肌中提取并純化CM，與等體積完全弗氏佐劑(complete Freund's adjuvant，CFA)混合形成乳濁液，于Lewis大鼠的雙側(cè)后肢足墊區(qū)多次注射［21-22］，結(jié)果顯示:初次免疫后第18天呈現(xiàn)急性期表現(xiàn)，主要以心肌炎性細(xì)胞浸潤(rùn)為特征;第30天呈現(xiàn)亞急性期表現(xiàn)，炎癥逐漸消退;第49天呈現(xiàn)慢性期擴(kuò)張型心肌病(dilated cardial myopathy，DCM)的表現(xiàn)，出現(xiàn)心肌間質(zhì)和血管周圍廣泛的纖維化，常累及左心室心內(nèi)膜下層［22］。

CM誘導(dǎo)模型成功率高、死亡率低、模型穩(wěn)定、病變典型，早期以心肌損害和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)為特征，后期發(fā)生MF，其與人類病毒性心肌炎的損傷過(guò)程極其相似，是研究心肌炎所致MF的代表模型。其不足之處在于CM的提取制備極其復(fù)雜，難度較大，局限了該模型的廣泛應(yīng)用。

2.1.2 CM抗原表位誘導(dǎo)模型 將人工合成的CM分子614～627位多肽，與等體積CFA混合形成乳濁液，于Balb/c小鼠雙側(cè)腋下和腹股溝分3次注射［23］，結(jié)果顯示:初次免疫后第14天，心肌細(xì)胞損傷，局部出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn);第21天，心肌細(xì)胞損傷與炎癥浸潤(rùn)更加嚴(yán)重;第60天，炎癥基本消退，心肌組織膠原容積分?jǐn)?shù)和心肌膠原蛋白含量均顯著升高，呈現(xiàn)出明顯的心肌細(xì)胞間纖維化和血管周圍纖維化［24］。

CM抗原表位誘導(dǎo)模型針對(duì)性強(qiáng)，準(zhǔn)確定位了CM的作用片段，進(jìn)一步明確其作用機(jī)制，且操作簡(jiǎn)便，是研究心肌炎導(dǎo)致的MF的良好模型。

2.1.3 心肌C蛋白抗原表位誘導(dǎo)模型 心肌C蛋白是CM結(jié)合蛋白的一種，位于CM表面，具有更強(qiáng)誘導(dǎo)心肌炎的作用。將重組C蛋白片段(317～647)與等體積CFA混合形成乳濁液，于Lewis大鼠雙側(cè)后肢足墊區(qū)單次注射，結(jié)果顯示:免疫后第2周以急性、彌散性炎癥浸潤(rùn)為主;第4周以纖維瘢痕形成為主要病理表現(xiàn);第6周進(jìn)入DCM階段，以心肌細(xì)胞間纖維化較為突出，同時(shí)累及肌內(nèi)膜和肌束膜，間質(zhì)性纖維化可與微小修復(fù)性纖維化連接成網(wǎng)狀。心內(nèi)膜出現(xiàn)普遍性或局限性增厚，彈力纖維和膠原蛋白含量增多［25］。

心肌C蛋白抗原表位誘導(dǎo)模型心肌炎癥反應(yīng)劇烈，MF程度嚴(yán)重，免疫后第50天有75%的大鼠死于心力衰竭，剩余存活的100%發(fā)展為DCM。因其病死率高，不適用于觀察時(shí)點(diǎn)較長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)［26］。

2.2 回輸激活的自身免疫細(xì)胞誘導(dǎo)模型

2.2.1 回輸自身免疫性CD4+T淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)模型從CM抗原表位誘導(dǎo)的EAM大鼠體內(nèi)提取出自身免疫性CD4+T淋巴細(xì)胞，將其在體外培養(yǎng)后通過(guò)尾靜脈輸入正常的Lewis大鼠體內(nèi)，結(jié)果顯示:它可以引發(fā)心肌的持續(xù)性炎癥反應(yīng)以及心肌細(xì)胞的凋亡損傷，6個(gè)月后大鼠心肌發(fā)生嚴(yán)重纖維化并伴有心室擴(kuò)張和心肌肥大，其病理表現(xiàn)類似人類DCM的表現(xiàn)［27］。該模型病變程度較輕，誘導(dǎo)MF發(fā)生的時(shí)間較長(zhǎng)，且操作繁瑣，因此應(yīng)用較少。

2.2.2 回輸刺激活化的自身樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)模型通過(guò)脂多糖和CD40激活物活化樹突細(xì)胞(dendritic cell，DC)表面的Toll樣受體和CD40受體，以激活小鼠DC，然后輸入正常Balb/c小鼠體內(nèi)。載有CM抗原表位多肽并活化后的DC可直接引起大量CD4+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)小鼠心肌，并可在短時(shí)期內(nèi)發(fā)生MF的病理改變，最終發(fā)展為類似人類的DCM［28］。該模型操作繁瑣，影響因素多，因此應(yīng)用較少。

3 缺血誘導(dǎo)的MF模型

缺血誘導(dǎo)的MF模型是通過(guò)造成心肌缺血壞死，激活多種體液因子，間接激活RAAS，最終導(dǎo)致MF的發(fā)生。主要模型有冠狀動(dòng)脈結(jié)扎模型、藥物誘導(dǎo)模型、自發(fā)性壞死模型。

3.1 冠狀動(dòng)脈結(jié)扎模型 冠狀動(dòng)脈結(jié)扎模型即于大鼠第3、4肋間隙鈍性分離肌層，打開胸腔，剪開心包，擠出心臟。距離左心耳尖端約2 mm水平，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支，根據(jù)體表心電圖Ⅱ?qū)?lián)R波高尖、ST段抬高判斷結(jié)扎成功。結(jié)果顯示:結(jié)扎后第4～7天梗死灶周邊即有活躍的肌成纖維細(xì)胞和成纖維細(xì)胞增生;2～3周進(jìn)入修復(fù)性纖維化階段;第4周形成肉眼可見的瘢痕［29］。該模型能完整模擬心肌梗死后MF的急性期、代償期，是研究心梗繼發(fā)MF的最適模型。但其手術(shù)創(chuàng)傷大，操作難度高，模型存活率僅為 66.7%［30］。

3.2 藥物誘導(dǎo)模型

3.2.1 異丙腎上腺素(isoproterenol，ISP)誘導(dǎo)模型ISP屬于兒茶酚胺類物質(zhì)，參與MF的形成過(guò)程，可造成多發(fā)性灶狀心肌壞死并發(fā)展為MF。大鼠皮下注射ISP水溶液，每日1次，每次劑量為1～10mg/kg，連續(xù)注射2d，末次注射后48h取出心臟，即可觀察到邊界清晰的心肌壞死灶。首次注射后第3天病灶內(nèi)即可出現(xiàn)成纖維細(xì)胞增生;第7天病灶內(nèi)成纖維細(xì)胞顯著增多，病灶外亦可見增生的成纖維細(xì)胞;第3周心肌膠原含量明顯增高［31］。其機(jī)制為:ISP激活RAAS，血漿 AngⅡ水平明顯增加，并進(jìn)一步刺激TGF-β1 mRNA 表達(dá)，誘導(dǎo) TGF-β1蛋白合成增加，最終促進(jìn)MF的發(fā)生發(fā)展。此方法相對(duì)無(wú)創(chuàng)，動(dòng)物死亡率低，但與人類心梗繼發(fā)MF的病理過(guò)程有一定差異，故局限了其應(yīng)用［32］。

3.2.2 垂體后葉加壓素誘導(dǎo)模型 垂體后葉加壓素具有強(qiáng)烈收縮冠脈血管的作用，大劑量可引起心肌缺血缺氧性壞死，最終發(fā)展為MF。但是對(duì)于不同的動(dòng)物個(gè)體，加壓素造成心肌壞死的病灶范圍和數(shù)量差異較大，造成的心肌損害不穩(wěn)定，因而未被廣泛應(yīng)用［33］。

3.3 自發(fā)性壞死模型 1965年，在敘利亞金色倉(cāng)鼠發(fā)現(xiàn)一種遺傳性壞死性心肌病?；即瞬〉膫}(cāng)鼠于出生后30～60 d，出現(xiàn)心肌細(xì)胞變性、鈣鹽沉著、灶狀壞死;60～90 d出現(xiàn)MF;90～150 d出現(xiàn)心室擴(kuò)張、心肌肥厚，最終發(fā)展為充血性心力衰竭。后來(lái)人們針對(duì)這類心肌病培育出 BIO14.6、BIO50.54、BIO82.62、BIO53.58、UM-X7.1 等品種。自發(fā)性壞死性心肌病倉(cāng)鼠的MF及心室重構(gòu)，與人類DCM相類似，是較為穩(wěn)定的MF模型［34］。

4 高糖誘導(dǎo)的MF模型

大鼠經(jīng)腹腔一次性注射鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)60mg/kg，7d后測(cè)定血糖≥16.7 mmol/L 為STZ誘導(dǎo)有效。結(jié)果顯示:注射STZ后第3個(gè)月，心肌膠原含量增多、比例失調(diào)、排列紊亂，以心肌細(xì)胞間和血管周圍纖維化為主，造成心肌僵硬度增加，順應(yīng)性下降，心臟舒縮功能障礙。其中Ⅰ型膠原蛋白在心肌細(xì)胞的彌漫性、廣泛性表達(dá)隨病程逐漸增多;Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)先有增加，6個(gè)月后表達(dá)開始減少，且與TGF-β1的消長(zhǎng)成正比［35］。此模型MF的發(fā)生發(fā)展是由糖、脂及能量代謝紊亂，RAAS激活，炎癥反應(yīng)，細(xì)胞外基質(zhì)增生，鈣轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制異常，心肌細(xì)胞的氧自由基清除的異常，心肌細(xì)胞凋亡等多因素協(xié)調(diào)作用導(dǎo)致的。該模型心肌病理改變符合人類糖尿病心肌病特征，且模型穩(wěn)定，復(fù)制成功率為81.4%，可作為研究糖尿病所致心肌病的理想模型［36］。

5 MF模型的評(píng)價(jià)

建立MF模型后，如何評(píng)價(jià)該模型尤為重要。我們主要通過(guò)以下幾個(gè)方面觀測(cè)與評(píng)價(jià)MF模型:①病理學(xué)檢查，是評(píng)價(jià)MF模型的“金指標(biāo)”，通常采用Masson三聯(lián)染法［37-38］或飽和苦味酸天狼星紅染色法［39-40］，觀察MF病理改變;②心功能檢測(cè)，是評(píng)價(jià)心肌損傷程度和心臟結(jié)構(gòu)改變的重要方法，通常采用心臟彩超技術(shù)檢測(cè)左心室舒張末內(nèi)徑、左心室收縮末內(nèi)徑、室間隔厚度、左心室后壁厚度、射血分?jǐn)?shù)、室間隔運(yùn)動(dòng)幅度等指標(biāo)，并計(jì)算左室短軸縮短率［41］;插管至左心室腔，連接壓力換能器，記錄左室壓力曲線，獲得左心室收縮壓峰值、左心室舒張末壓、等容期內(nèi)左心室壓力最大變化速率等指標(biāo)［42］。③血清生化指標(biāo)檢測(cè)，是評(píng)價(jià)MF程度的輔助方法，采用ELISA法檢測(cè)血清Ⅰ型前膠原羧基端肽、Ⅲ型前膠原羧基端肽的含量［43］;用放射免疫分析法檢測(cè)血清透明質(zhì)酸、層粘連蛋白的含量［44］。

6 結(jié) 語(yǔ)

對(duì)不同因素誘導(dǎo)的MF動(dòng)物模型的研究經(jīng)歷了漫長(zhǎng)的過(guò)程，與其相伴的是對(duì)MF致病誘因和發(fā)病機(jī)制的進(jìn)一步認(rèn)識(shí)。但是仍存在一些問題:①不同原因誘導(dǎo)的MF動(dòng)物模型，其發(fā)病機(jī)制和病理特征的異同點(diǎn)有待闡明;②在 MF發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，RAAS、膠原生成與降解系統(tǒng)以及多種心血管活性物質(zhì)、細(xì)胞因子等處在一個(gè)復(fù)雜的體系，它們的網(wǎng)絡(luò)性調(diào)節(jié)作用有待進(jìn)一步說(shuō)明。③MF的模型評(píng)價(jià)尚未有明確的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，因此模型評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)尚需優(yōu)化。④MF作為一種病理改變，可見心臟形態(tài)、結(jié)構(gòu)及功能上的變化，而大鼠與MF相關(guān)的生物信息學(xué)研究尚未見報(bào)道。⑤各種模型的長(zhǎng)期MF改變尚需進(jìn)一步觀察。⑥有關(guān)MF基因敲除模型的研究較少，仍需進(jìn)一步探索。

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