HPLC法測(cè)定鹽酸舍曲林片的有關(guān)物質(zhì)

常艷波

（四川省食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)院，四川成都611731）

HPLC法測(cè)定鹽酸舍曲林片的有關(guān)物質(zhì)

常艷波

（四川省食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)院，四川成都611731）

目的建立高效液相色譜法檢測(cè)鹽酸舍曲林片中有關(guān)物質(zhì)的方法。方法采用Waters Symmetry C18色譜柱，以含有磷酸、磷酸二氫鉀溶液和乙腈的不同比例的混合液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速為1.0 mL·min－1，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm，柱溫為25℃，進(jìn)樣量為20μL。結(jié)果有關(guān)物質(zhì)與鹽酸舍曲林主成分色譜峰分離良好。結(jié)論該方法操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、專屬性強(qiáng)，可作為鹽酸舍曲林片質(zhì)量控制方法。

鹽酸舍曲林；高效液相色譜法；有關(guān)物質(zhì)

鹽酸舍曲林（sertraline hydrochloride），化學(xué)名為（1S－順式）－4－（3，4－二氯苯基）－1，2，3，4－四氫－N－甲基－1－萘胺鹽酸鹽，是一種5－羥色胺再攝取抑制劑，主要用于治療或預(yù)防抑郁癥與強(qiáng)迫癥。目前，對(duì)于鹽酸舍曲林有關(guān)物質(zhì)的報(bào)道為數(shù)不多［1～9］，如毛細(xì)管電泳法［7］、加壓毛細(xì)管電色譜法［8］等，主要為鹽酸舍曲林異構(gòu)體的分離測(cè)定，本文主要考察了鹽酸舍曲林的工藝雜質(zhì)，參考英國(guó)藥典，采用反相高效液相色譜（RP－HPLC）法分離鹽酸舍曲林片中的2種已知雜質(zhì)及其他未知雜質(zhì)，對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制，從而為鹽酸舍曲林片的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

Waters 2695系列高效液相色譜儀，包括Waters 2489紫外檢測(cè)器，Empower2色譜工作站。鹽酸舍曲林對(duì)照品（中檢所，批號(hào)：100702－200401）；雜質(zhì)C對(duì)照品（EP－7.0，批號(hào)：120828）；雜質(zhì)E對(duì)照品（Ep－7.0，批號(hào)：Y0001285）；鹽酸舍曲林片（廠家A批號(hào)：1272017；廠家B批號(hào)：130201、130202、130203）。磷酸二氫鉀、磷酸為分析純；乙腈為色譜純；水為純化水。

2 方法

2.1 色譜條件 色譜柱：Waters Symmetry C18（4.6mm ×250mm，5μm）；柱溫：25℃；流速：1.0mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm。進(jìn)樣量：20μL。流動(dòng)相A：0.272%磷酸二氫鉀溶液，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0；流動(dòng)相B：乙腈，梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

表1 梯度洗脫程序表

2.2 溶液的制備

2.2.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液 取鹽酸舍曲林對(duì)照品和雜質(zhì)C對(duì)照品適量，用乙腈－水（3∶7）溶解并稀釋制成含鹽酸舍曲林2.5 mg·mL－1、雜質(zhì)C 20 μg·mL－1的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液。

2.2.2 供試品溶液 取鹽酸舍曲林片9片，置200 mL量瓶中，加乙腈－水（3∶7）150 mL，振搖使完全崩散，超聲處理5 min，加上述溶劑稀釋至刻度，搖勻，制成含鹽酸舍曲林2.5mg·mL－1的溶液，濾過(guò)，取續(xù)濾液（前5 mL濾液棄去），作為供試品溶液。

2.2.3 對(duì)照品溶液 精密量取供試品溶液1 mL，置500 mL量瓶中，加乙腈－水（3∶7）稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液（1）；精密量取對(duì)照溶液（1）5 mL，置10 mL量瓶中，加上述溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液（2）；另精密稱取雜質(zhì)E適量，用乙腈－水（3∶7）溶解并稀釋制成10μg·mL－1的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果 取系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，雜質(zhì)C的出峰時(shí)間應(yīng)為12～17 min，鹽酸舍曲林應(yīng)在30 min內(nèi)出峰，鹽酸舍曲林峰和雜質(zhì)C峰的分離度不得小于1.5，結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 鹽酸舍曲林片系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液HPLC色譜圖1.雜質(zhì)C；2.鹽酸舍曲林

3.2 雜質(zhì)限度標(biāo)準(zhǔn)的制訂 供試品溶液的色譜圖中如有雜質(zhì)峰，與雜質(zhì)C保留時(shí)間一致的雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液（1）主峰面積的4倍（0.8%），與雜質(zhì)E保留時(shí)間一致的雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照品溶液主峰面積（0.4%），其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積（0.2%），總雜質(zhì)（除雜質(zhì)C峰外）不得大于對(duì)照溶液（1）主峰面積的7.5倍（1.5%）。小于對(duì)照溶液（2）主峰面積的雜質(zhì)峰不計(jì)（0.1%）。

3.3 檢測(cè)限定量限 精密稱取雜質(zhì)C、雜質(zhì)E對(duì)照品適量，加乙腈－水（3∶7）制成對(duì)照品溶液，通過(guò)逐級(jí)稀釋，精密量取20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。信噪比（S／N）約為10時(shí)的進(jìn)樣量即為定量限，信噪比（S／N）約為3時(shí)的進(jìn)樣量即為檢測(cè)限。

結(jié)果表明：雜質(zhì)C與雜質(zhì)E的檢測(cè)限分別為1.30、0.70 ng；定量限分別為3.92、2.10 ng。當(dāng)供試品溶液中鹽酸舍曲林濃度為2.5 mg·mL－1、進(jìn)樣量為20μL時(shí)，其絕對(duì)進(jìn)樣量為50 000 ng，該進(jìn)樣量約為雜質(zhì)C檢測(cè)限的38 000倍，即約0.003%的雜質(zhì)量可被檢出；是雜質(zhì)E檢測(cè)限的70 000倍，即約0.002%的雜質(zhì)量可被檢出，遠(yuǎn)低于雜質(zhì)限度要求，該方法靈敏度高，能充分保證有效檢出樣品中雜質(zhì)。

3.4 專屬性試驗(yàn) 取鹽酸舍曲林片9片及鹽酸舍曲林原料約500 mg分別進(jìn)行酸、堿、氧化、高溫、光照破壞實(shí)驗(yàn)，同時(shí)取輔料、未破壞供試品及原料按照上述色譜條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明經(jīng)酸、堿、氧化、高溫、強(qiáng)光條件破壞的樣品，在選擇的色譜條件下，樣品主峰、已知雜質(zhì)和強(qiáng)降解產(chǎn)物均能有效分離，表明本方法能夠有效的檢查鹽酸舍曲林片中的有關(guān)物質(zhì)。破壞性試驗(yàn)圖譜見(jiàn)圖2～7。

圖2 輔料空白

圖3 酸破壞原料

圖4 堿破壞原料

3.5 精密度試驗(yàn) 精密量取雜質(zhì)C，雜質(zhì)E對(duì)照品溶液及“2.2”項(xiàng)下對(duì)照溶液（1）各20μL，注入液相色譜儀，分別連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，考察精密度，結(jié)果各溶液色譜圖中主峰面積RSD（n＝6）分別為0.13%、0.19%、0.28%，表明試驗(yàn)精密度良好。

圖5 氧破壞原料

圖6 高溫破壞原料

圖7 光破壞原料

3.6 線性關(guān)系 分別取雜質(zhì)C、雜質(zhì)E對(duì)照品適量，分別用乙腈－水（3∶7）溶解并逐級(jí)稀釋制成濃度系列溶液，精密量取各溶液20μL，分別注入液相色譜儀，按照上述色譜條件檢測(cè)，記錄色譜圖，以峰面積對(duì)濃度線性回歸，試驗(yàn)結(jié)果表明，雜質(zhì)C在0.980 0～39.20μg·mL－1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好；雜質(zhì)E在1.05～21.04μg·mL－1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取雜質(zhì)C，雜質(zhì)E對(duì)照品溶液及“2.2”項(xiàng)下供試品溶液、對(duì)照溶液（1）室溫放置（20～25℃，遮光），按上述色譜條件，分別于0、1、2、4、8 h進(jìn)行檢測(cè)，考察穩(wěn)定性，結(jié)果表明，上述各測(cè)定溶液在室溫條件放置（20～25℃，遮光）8 h，雜質(zhì)含量無(wú)變化，穩(wěn)定性良好。

3.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取鹽酸舍曲林片供試品（130201），按照上述方法平行制備6份供試品溶液，分別進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)。結(jié)果表明，6份供試品溶液已知雜質(zhì)含量、未知雜質(zhì)含量和總雜質(zhì)含量結(jié)果均無(wú)顯著差異（RSD≤1.0%），雜質(zhì)個(gè)數(shù)一致，重復(fù)性良好。

3.9 耐用性試驗(yàn) 按上述色譜條件，在其他條件不變的情況下，分別將流速改變?yōu)椋?.0±0.1）mL·min－1，柱溫在20～35℃范圍內(nèi)改變，更換Waters Symmtry C18（4.6 mm×250 mm，5μm），Kromasil C18（4.6 mm ×250 mm，5μm），Chromsil ODS2（4.6 mm×250 mm，5μm）對(duì)取供試品溶液，進(jìn)行考察，結(jié)果顯示，在上述流速和柱溫的條件下，結(jié)果均能滿足系統(tǒng)適用性要求，但僅Waters Symmtry C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）能滿足系統(tǒng)適用性要求。

3.10 樣品有關(guān)物質(zhì)檢查 取鹽酸舍曲林片（市售，廠家A批號(hào)：1272017；廠家B批號(hào)：130201、130202、130203）樣品，按照上述有關(guān)物質(zhì)檢查方法檢查，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品的有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果

4 討論

4.1 專屬性試驗(yàn)結(jié)果表明氧化、光照條件對(duì)雜質(zhì)C影響較大，其余條件影響相對(duì)較小。

4.2 耐用性試驗(yàn) 本文采用3種色譜柱，對(duì)供試品溶液進(jìn)行了考察，結(jié)果僅Waters Symmtry C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）能滿足系統(tǒng)適用性要求，原因?yàn)樵摲椒ㄏ到y(tǒng)適用性對(duì)雜質(zhì)和主成分的出峰時(shí)間及之間的分離度有明確且較嚴(yán)格的要求，故在擬定該方法時(shí)必須規(guī)定色譜柱為Waters Symmtry C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）。

4.4 方法的優(yōu)化 英國(guó)藥典（BP2013）中舍曲林片有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)下規(guī)定，系統(tǒng)適用性溶液色譜圖每次均需與BP參考圖譜比對(duì)，要求“基本一致”，而中國(guó)藥典及中檢院的對(duì)照品均不提供參考圖譜，且BP雜質(zhì)對(duì)照品價(jià)格昂貴、購(gòu)買不易，給實(shí)際操作帶來(lái)不便，故本研究根據(jù)BP參考圖譜對(duì)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求，對(duì)方法進(jìn)行了優(yōu)化：取鹽酸舍曲林對(duì)照品和雜質(zhì)C對(duì)照品適量，用溶劑A溶解并稀釋制成含鹽酸舍曲林2.5 mg·mL－1、含雜質(zhì)C 20μg·mL－1的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液，雜質(zhì)C的出峰時(shí)間應(yīng)為12～17 min，鹽酸舍曲林應(yīng)在30 min內(nèi)出峰，鹽酸舍曲林峰和雜質(zhì)C峰的分離度不得小于1.5。

①鹽酸舍曲林與雜質(zhì)C的濃度：按照供試品溶液濃度及雜質(zhì)C限度（不得大于0.8%）配制系統(tǒng)適用性溶液，結(jié)果該溶液的色譜圖中，鹽酸舍曲林峰與雜質(zhì)C峰的保留時(shí)間，雜質(zhì)C的峰響應(yīng)值與BP參考圖譜中相應(yīng)峰基本一致。

②鹽酸舍曲林峰的保留時(shí)間：流動(dòng)相系統(tǒng)在0～30 min為高極性的等度洗脫，使雜質(zhì)及主成分有效分離，自30min起有機(jī)相的比例升高，使低極性的雜質(zhì)得以洗脫，主成分鹽酸舍曲林在30min內(nèi)出峰，保證了其他雜質(zhì)在50min的梯度洗脫中被有效檢出。

③雜質(zhì)C的保留時(shí)間：BP參照?qǐng)D譜中雜質(zhì)C的出峰時(shí)間約為14 min，為了保證系統(tǒng)適用性試驗(yàn)與BP的一致性，結(jié)合耐用性試驗(yàn)結(jié)果，將雜質(zhì)C的保留時(shí)間定為12～17 min。

④分離度：為保證鹽酸舍曲林峰和雜質(zhì)C峰有效分離，規(guī)定二者的離度不得小于1.5。

結(jié)果表明，優(yōu)化后的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)與原BP方法無(wú)明顯差異，為保證檢查的準(zhǔn)確和簡(jiǎn)便。

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Determ ination of related substances of Sertraline Hydrochloride Tablets by HPLC

CHANG Yan-bo
（Sichuan Institute for Food and Drug Control，Chengdu 611731，China）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of the related substances of Sertraline Hydrochloride Tablets.M ethodsA gradient elution was carried out on a Waters Symmetry C18column with mixture of phosphoric acid and potassium dihydrogen phosphate solution and acetonitrile asmobile phase，and the flow ratewas1.0 mL ·min－1.The detection wavelength was 210 nm，the column temperature was 25℃，and the injection volume was 20μL.Resu ltsThe relevant substances were well separated from the chief agent.ConclusionThe method was simple，repeatable and specific，and can be used for the quality control of Sertraline Hydrochloride Tablets.

Sertraline hydrochloride；HPLC；Related substances

R927.11

A

2095－5375（2014）10－0578－004

常艷波，碩士，主管藥師，研究方向：藥品質(zhì)量控制，E－mail：chang.y.b＠163.com