左旋－二脫水伊地醇雙甲磺酸酯含藥血清對(duì)HL－60細(xì)胞增殖的影響

楊 斌，楊小葉，曾 春，劉 元，曹 斌

（1.廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣西南寧530021；2.廣西中醫(yī)藥研究院，廣西南寧530022）

左旋－二脫水伊地醇雙甲磺酸酯含藥血清對(duì)HL－60細(xì)胞增殖的影響

楊 斌1，楊小葉1，曾 春1，劉 元2，曹 斌2

（1.廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣西南寧530021；2.廣西中醫(yī)藥研究院，廣西南寧530022）

目的探討左旋－二脫水伊地醇雙甲磺酸酯含藥血清對(duì)HL－60細(xì)胞的增殖抑制作用。方法運(yùn)用CCK－8法測(cè)定不同劑量組DMDAI－L的含藥血清對(duì)HL－60細(xì)胞的增殖影響。結(jié)果DMDAI－L高中低劑量組含藥血清作用HL－60細(xì)胞48 h抑制率分別為30.29%、20.72%、13.97%，而陽(yáng)性組（環(huán)磷酰胺）抑制率為18.16%，高、中、低劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組與空白對(duì)照組比較有顯著性差異（P＜0.05）。結(jié)論DMDAI－L含藥血清能夠有效抑制HL－60細(xì)胞增殖。

左旋－二脫水伊地醇雙甲磺酸酯；HL－60細(xì)胞；含藥血清

血清藥理學(xué)是指在動(dòng)物經(jīng)口服給藥一段時(shí)間后采血分離血清，用此含藥血清進(jìn)行體外藥理實(shí)驗(yàn)的一種實(shí)驗(yàn)方法，血清化學(xué)主要是研究血清中的化學(xué)成分［1］。左旋－二脫水伊地醇雙甲磺酸酯（1，6－di－O－（methysulfonyl）－2，3，4，5－Dianhydro－L－iditol，DMDAI－L）屬于烷化劑類(lèi)細(xì)胞抑制劑，體外實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)DMDAI－L對(duì)急性髓系白血病HL－60細(xì)胞有很好的抑制作用并且誘導(dǎo)HL－60細(xì)胞凋亡［2，3］。為了進(jìn)一步探討經(jīng)口服途徑給藥，在體內(nèi)吸收、生物轉(zhuǎn)化等一系列過(guò)程后，血清中含藥活性成分對(duì)HL－60細(xì)胞的生長(zhǎng)影響，因此本實(shí)驗(yàn)首次通過(guò)血清藥理學(xué)的方法測(cè)定通過(guò)動(dòng)物體內(nèi)吸收及代謝后，DMDAI－L的含藥血清對(duì)HL－60細(xì)胞增殖的影響。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 健康的雄性SD大鼠，SPF級(jí)，（250± 5）g，廣西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，試驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證SCXK（桂）2009－0002，試驗(yàn)動(dòng)物使用許可證SCXK（桂）2009－0004。

1.2 藥品、試劑與儀器 DMDAI－L由廣西中醫(yī)藥研究所劉元副研究員提供；人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞HL－60購(gòu)自武漢博士德生物工程研究院；CCK－8試劑盒購(gòu)置碧云天生物技術(shù)研究所；超凈工作臺(tái)（上海浦東躍欣科學(xué)儀器廠）；CO2飽和濕度恒溫箱（美國(guó)Forma scientificlnc公司）；倒置光學(xué)顯微鏡（日本Olympus公司）；高速冷凍低溫離心機(jī)（美國(guó)Thermo scientific公司）。

1.3 DMDAI－L含藥血清的制備 參考文獻(xiàn)［4］方法略有改變，取SD雄性大鼠15只編號(hào)，隨機(jī)分為五組，每組3只，分別為空白對(duì)照組（等體積0.5% CMC－Na的生理鹽水）、DMDAI－L高、中、低劑量組（75、50、25 mg·kg－1）、環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組（25 mg·kg－1），空白對(duì)照組和給藥組為灌胃給藥方式，環(huán)磷酰胺腹腔注射，給藥前禁食不禁水12 h。給藥3 d，每天給藥兩次，末次給藥后2 h用20%的烏拉坦麻醉，腹主動(dòng)脈取血。室溫靜置2 h、2 500 rpm離心20 min，吸取上清血清，56℃滅活30 min，0.22 μm過(guò)濾除菌，－20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 DMDAI－L含藥血清對(duì)HL－60增殖的影響取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的HL－60細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為1×105·mL－1接種于96孔板，每孔75μL，預(yù)培養(yǎng)6 h后，給予各組含藥血清25μL，使血清終濃度為25%，作用48 h后每孔加入CCK－8試劑10 μL，37℃恒溫孵育3 h，450 nm酶標(biāo)儀測(cè)定每孔OD值，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 倒置顯微鏡下觀察DMDAI－L含藥血清對(duì)HL－60細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變 空白血清組HL－60細(xì)胞狀態(tài)良好，細(xì)胞膜清晰透亮，細(xì)胞核大而且明顯，大多數(shù)細(xì)胞呈圓形而且個(gè)頭均一。給予個(gè)劑量組含藥血清后作用48 h后，與空白血清對(duì)照組比較，細(xì)胞增殖有逐漸降低的趨勢(shì)，特別是高劑量組，細(xì)胞形態(tài)改變明顯，細(xì)胞表面皺縮、體積縮小，甚至出現(xiàn)細(xì)胞碎片（見(jiàn)圖1）。

圖1 各組DMDAI－L含藥血清作用HL－60細(xì)胞48 h形態(tài)學(xué)的改變（×100）

2.2 DMDAI－L含藥血清對(duì)HL－60細(xì)胞作用48 h的影響 由表1可見(jiàn)，各劑量組的含藥血清濃度為25%對(duì)HL－60細(xì)胞的生長(zhǎng)有抑制作用，陽(yáng)性對(duì)照組以及低、中、高劑量組與空白對(duì)照組比較均有顯著性差異（P＜0.05），表明左旋－二脫水伊地醇雙甲磺酸酯含藥血清對(duì)HL－60細(xì)胞作用有明顯抑制作用。

表1 各劑量組DMDAI－L含藥血清對(duì)HL－60細(xì)胞作用48 h的抑制率

3 討論

在體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)中［5］，當(dāng)藥物的結(jié)構(gòu)形式與體內(nèi)的理化性質(zhì)、作用形式存在差異時(shí)，往往藥物直接加入離體反應(yīng)體系的體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能客觀、真實(shí)地反應(yīng)藥物的作用效果，然而血清藥理學(xué)能在一定程度上彌補(bǔ)了這種缺陷。含藥血清所含的藥物成分一般經(jīng)過(guò)體內(nèi)一系列生物轉(zhuǎn)化后真正發(fā)揮作用的有效成分，同時(shí)包含那些在藥物作用下機(jī)體所產(chǎn)生的內(nèi)生性的有效成分，即各種生理活性物質(zhì)。血清中的有效成分是藥物和機(jī)體相互作用之后產(chǎn)生的。

有些藥物的代謝產(chǎn)物，藥效高于母體藥物，可直接合成該代謝產(chǎn)物作為藥用，從而發(fā)現(xiàn)藥效更好的藥物［6］。例如：抗過(guò)敏藥氯雷他定（loratadine）在消化道被吸收后，很快脫去乙氧羧基側(cè)鏈降解為對(duì)H受體活性更強(qiáng)的去羧氯雷他定（desloratadine，現(xiàn)已成為第二代新藥）［7］。所以通過(guò)對(duì)藥物代謝產(chǎn)物的研究是發(fā)現(xiàn)新藥的一種途徑。本課題組前期研究，提示DMDAI－L體外肝微粒體孵育代謝后結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變，導(dǎo)致其藥效也發(fā)生了改變，本實(shí)驗(yàn)研究以含藥血清的方法證明了DMDAI－L進(jìn)過(guò)體內(nèi)消化吸收生物轉(zhuǎn)化后，其含藥血清仍然對(duì)HL－60細(xì)胞有抑制作用。據(jù)文獻(xiàn)分析，迄今含藥血清實(shí)驗(yàn)方法偏重于藥效的研究，沒(méi)有對(duì)血清中的有效成分做進(jìn)一步的分析，尚缺乏對(duì)血清中所有藥物成分的定性、定量分析，藥物在體內(nèi)的代謝過(guò)程也未知。因此DMDAI－L含藥血清中的具體成分值得進(jìn)一步的研究，同時(shí)應(yīng)該更深入的研究其代謝產(chǎn)物，并對(duì)其代謝產(chǎn)物的藥效進(jìn)行研究。

［1］潘衛(wèi)松，劉美鳳，石鉞，等.血清藥理學(xué)、血清化學(xué)和中藥藥代動(dòng)力學(xué)［J］.世界科學(xué)技術(shù)（中藥現(xiàn)代化），2002，4（3）：53－56.

［2］曾春，郭超，石玲東，等.左旋－二脫水伊地醇雙甲磺酸酯對(duì)HL－60細(xì)胞增殖和凋亡的影響［J］.廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，29（2）：183－186.

［3］韋煥英，姚樹(shù)漢，周龍強(qiáng)，等.左旋－二脫水伊地醇雙甲磺酸酯抗腫瘤作用及毒性［J］.癌癥，1991，10（3）：193.

［4］王力倩，李儀奎，付勝光.血清藥理學(xué)方法研究探索［J］.中藥藥理與臨床，1997，13（3）：29－31.

［5］侯華新，黎丹戎，鄺曉聰，等.氧化苦參堿對(duì)卵巢癌HO8910細(xì)胞凋亡影響的血清藥理學(xué)研究［J］.中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2006，23（5）：349－352.

［6］陳競(jìng)洪，李林，屈英微，等.藥物代謝研究在新藥研究中的作用［J］.河北工業(yè)科技，2005，22（2）：114－116.

［7］Henz BM.The pharmacologic profile of desloratadine：a review［J］.Allergy，2001，56（Suppl65）：7－13.

The effect of serum containing DMDAI－L on human myeloid leukem ia HL－60 cells

YANG Bin1，YANG Xiao-ye1，ZENG Chun1，LIU Yuan2，CAO Bin2
（1.Pharmaceutical College，Guangxi Medical University，Nanning 530021，China；2.Guangxi Institution of Chinese Medicine＆Pharmaceutical Science，Nanning 530022，China）

ObjectiveTo detect the effectof serum containing DMDAI－L on humanmyeloid leukemia HL－60 cells.M ethodsThe proliferation inhibitory effect of serum containing DMDAI－L on human myeloid leukemia HL－60 cells were detected by CCK－8 assay in vitro.ResultsThe high，medium and low－dose groups of serum containing DMDAIL can inhibit the growth of HL－60 cells，the inhibition rate of high，medium and low－dose groups for 48 hours were 30.29%，20.72%，13.97%and cyclophosphamide group was 18.16%，there was significantly difference related to the control group（P＜0.05）.ConclusionThe serum containing DMDAI－L can inhibit the growth of HL－60 cells effectively.

DMDAI－L；HL－60 cells；Medicated serum

R965

A

2095－5375（2014）11－0626－003

廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目應(yīng)用基礎(chǔ)研究專(zhuān)項(xiàng)基金資助（No.桂科基0991013）

楊斌，男，教授，研究方向：腫瘤藥理，E－mail：8160722＠qq.com

曹斌，女，副研究員，研究方向：中藥藥理學(xué)，Tel：13907863117，E－mail：zyyskjb＠163.com